野蔷薇苷对h_2o_2诱导心肌细胞氧化损伤的保护作用及其机制研究

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1、授予单位代码10089学号或申请号20122511HebeiMedicalUniversity硕士学位论文科学学位野蔷薇苷对h2O2诱导心肌细胞氧化损伤的保护作用及其机制研究研究生：刘洋导师：李灵芝教授专业：药理学二级学院：武警后勤学院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研宄所获的研宄成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公共和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专

2、利等知识产权归河北医科大学所有。否则’承担相应的法律责任。研究生签名：^碑导师签章二级学院签章：2-0/^年/月>曰河北医科大学研究生论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标样等内容之外，文中不包括其他人己经发表或撰写的研宄成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：女导师签章>(辟6月L日目录中文摘要……………………………………………………………………1英文摘要……………………………………………………………………4英文缩写……………………………………………………………………

3、8研究论文野蔷薇苷对H2O2诱导心肌细胞氧化损伤的保护作用及其机制研究前言……………………………………………………………………9材料与方法…………………………………………………………10结果…………………………………………………………………21附图…………………………………………………………………25附表…………………………………………………………………46讨论…………………………………………………………………50结论…………………………………………………………………55参考文献……………………………………………………………56综述野蔷薇苷及其苷元

4、委陵菜酸的药理活性研究进展………………60致谢………………………………………………………………………67个人简历…………………………………………………………………68中文摘要野蔷薇苷对H2O2诱导心肌细胞氧化损伤的保护作用及其机制研究摘要目的：本课题组前期研究表明，蕨麻的正丁醇提取部位能够明显改善缺血再灌注大鼠心肌细胞活力，抑制大鼠心肌细胞凋亡，其中提取分离出来的活性单体“野蔷薇苷”，对血管内皮细胞的缺氧损伤具有显著的保护作用，且其机制可能与抗氧化作用有关。但目前“野蔷薇苷”在心肌细胞氧化性损伤中的作用及其调控机制还不清楚。因此，本研究在课题组前期

5、工作的基础上，选取H9c2细胞作为研究对象，通过建立H2O2诱导心肌细胞氧化损伤的模型，观察“野蔷薇苷”对心肌细胞氧化损伤的保护作用，并探讨其分子机制。方法：1氧化损伤模型的建立：采用MTT法检测心肌细胞的活力变化，确定H2O2最佳诱导损伤的时间和浓度，建立细胞损伤模型。2实验分组：取生长状态良好的H9c2心肌细胞随机分为：正常-11-12对照组、H2O（2200μmol/l）损伤模型组、野蔷薇苷1×10mol/l、1×10mol/l、-131×10mol/l干预组(同时加入野蔷薇苷和H2O2），阳性药维拉帕米组-11(1×10mol/l）。3实验

6、检测指标：3.1采用生化指标检测手段，测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）与肌酸、激酶（CK）活性变化；检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性变化、丙二醛（MDA）释放量的变化，过氧化氢酶（CAT）活力、谷胱甘肽氧化酶（GSH-Px）；观察“野蔷薇苷”对H2O2所致心肌细胞氧化损伤的保护作用。3.2采用Hochest/PI染色、DAPI染色观察“野蔷薇苷”对心肌细胞形态及结构的影响。3.3采用AnnexinV/PI两种荧光标记，选用流式细胞仪检测“野蔷薇苷”对心肌细胞凋亡率的影响。3.4采用流式细胞技术，测定“野蔷薇苷”对心肌细胞内ROS水平1中文摘要

7、的影响。2+3.5采用激光共聚焦显微镜，观察“野蔷薇苷”对心肌细胞内Ca浓度的影响。3.6采用免疫印迹（WesternBlot）技术，检测cryab、Pcryab、akt、Pakt、bcl-2、bax、Cyt-c、caspase9、caspase3蛋白的表达水平；并通过加入PI3K/AKT通路阻滞剂LY294002后，检测心肌细胞的活力变化，观察Pakt、caspase3蛋白的表达变化，探讨“野蔷薇苷”抗心肌细胞氧化性损伤的分子机制。结果：1氧化损伤模型的建立随着过氧化氢处理时间的延长和过氧化氢浓度的升高，心肌细胞活力逐渐降低，其中采取200μmo

8、l/l过氧化氢处理3h后，细胞损伤明显，且细胞存活率稳定、适中，适于建立心肌细胞的氧化性损伤模型。2药物浓度的确定通过MT