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时间:2018-12-09
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1、河北医科大学硕士学位论文野蔷薇苷抑制EA.hy926内皮细胞缺氧所致损伤的作用及机制姓名:龚海英申请学位级别:硕士专业:药理学指导教师:李灵芝201010中文摘要野蔷薇苷抑制EA.hy926内皮细胞缺氧所致损伤的作用及机制摘要目的:研究野蔷薇苷(Rosamultin)对EA.hy926内皮细胞缺氧损伤的保护作用,并探讨其可能机制。方法:1、人脐静脉内皮细胞株(EA.hy926)用含10%FBS的高糖DMEM培养液置二氧化碳培养箱中培养,待细胞生长成单层后备用。2、通过MTT法及LDH检测确定EA.hy926内皮细胞的缺氧时间,建立缺氧损伤模型。3、通过MTT法及LDH检测确定野蔷薇苷高、
2、中、低剂量组药物浓度,细胞随机分为正常对照组、缺氧损伤模型组、野蔷薇苷1×10。10mol/1、1×10—1mol/1、1×10。12mol/1干预组(缺氧同时加入野蔷薇苷),红景天苷组(1×10~mol/1)。通过MTT法检测细胞代谢活力,检测LDH含量观察不同剂量野蔷薇苷对EA.hy926内皮细胞缺氧损伤的保护作用。4、采用HE染色观察野蔷薇苷对缺氧损伤EA.hy926细胞形态的影响。5、检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性及脂质氧化代谢产物丙二醛(MDA)含量,研究野蔷薇苷对缺氧所致内皮细胞脂质过氧化损伤的保护作用。6、检测细胞外一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性。
3、7、通过RT-PCR、WesternBlot以及ELISA技术检测各实验组HIF.1、VEGFmRNA及其蛋白表达的差异。结果:1、倒置相差显微镜下观察,正常培养EA.hy926内皮细胞,呈上皮样贴壁生长,胞体饱满,折光良好,细胞成多角形或扁平短梭形,细胞核为圆形,椭圆形,可见核仁1~2个,呈鹅卵石样铺满底层。2、缺氧损伤模型建立:EA.hy926细胞缺氧损伤0--一2h,随缺氧时间韵延长,细胞活性明显降低,LDH外漏增加,曲线较陡。2--一,6h间,随缺氧时间的延长,细胞活性下降幅度变小,LDH外漏量曲线趋于平缓,故确定2h为模型缺氧时间。3、LDH活性检测及MTT法确定野蔷薇苷高、中
4、、低剂量组药物浓度分别为1×10一umol/1、l×10。1mold、1×10qzmol/1。4、野蔷薇苷对EA.hy926内皮细胞缺氧损伤的保护作用:(1)MTT检测显示:与正常对照组比较,缺氧损伤模型组细胞代谢活力下降中文摘要(尸5、著升高(尸6、与模型组比较NO含量、NOS活性均升高(尸7、促进NO的合成与释放、促进VEGF基因高表达有关。关键词:野蔷薇苷;EA.hy926内皮细胞;缺氧损伤;氧自由基,内皮功能英文摘要EffectsandMechanismsofRosamuitininhibitingHypoxiaInjurytoEA.hy926EndothelialCellsABSTRACTobjeetive:TostudytheeffectsandmechanismsofRosamultininhibitinghy
5、著升高(尸6、与模型组比较NO含量、NOS活性均升高(尸7、促进NO的合成与释放、促进VEGF基因高表达有关。关键词:野蔷薇苷;EA.hy926内皮细胞;缺氧损伤;氧自由基,内皮功能英文摘要EffectsandMechanismsofRosamuitininhibitingHypoxiaInjurytoEA.hy926EndothelialCellsABSTRACTobjeetive:TostudytheeffectsandmechanismsofRosamultininhibitinghy
6、与模型组比较NO含量、NOS活性均升高(尸7、促进NO的合成与释放、促进VEGF基因高表达有关。关键词:野蔷薇苷;EA.hy926内皮细胞;缺氧损伤;氧自由基,内皮功能英文摘要EffectsandMechanismsofRosamuitininhibitingHypoxiaInjurytoEA.hy926EndothelialCellsABSTRACTobjeetive:TostudytheeffectsandmechanismsofRosamultininhibitinghy
7、促进NO的合成与释放、促进VEGF基因高表达有关。关键词:野蔷薇苷;EA.hy926内皮细胞;缺氧损伤;氧自由基,内皮功能英文摘要EffectsandMechanismsofRosamuitininhibitingHypoxiaInjurytoEA.hy926EndothelialCellsABSTRACTobjeetive:TostudytheeffectsandmechanismsofRosamultininhibitinghy
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