蒙古沙冬青amgpat和amfad8基因的克隆与功能分析

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1、‘？，．，分巧号Ｑ７８学校代码１０１２９ＵＤＣ５５７学号２０１２２］１００６ｗ——■■Ｔ—■———ＭＴ——ＷＭｉＪ—ＭＩＣ＇－？—、ｊ■、＇，．，＾硕±学位论文蒙古沙冬青＞４／ｎＧ／Ｍ巧日＞Ｊｗ；９ＩＺ议基因的克隆与功能分祈Ｃｌｏｎｉｎａｉ？ｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＡｎａｌｓｅｓｏｆＡｍＧＰＡＴＡｍＦＡＤＳｇｙＧｅｎｅｓｆｒｏｍＡｍｍｏｐｉｐｔａｎｔｈｕｓｍｏｎｇｌｏｉｃｉｉｓ申请入：郭婷学科口类；理举学科专

2、业；遠传学硏究方向：植物抗逆分子生物学与基因工程指导教师；王茅雁教授论文提交日期二〇…五年六月：内蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料一，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。一申请学位论文与资料若有不实之处

3、，本人承担切相关责任。论文作者签名、《：部婷日期：訓名内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属内蒙古农业大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学，且导师为通讯作者，通巧作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅。学校可公布学位论文的全部或部分内容（保密内容除外，

4、、）采用影印缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：乘供指导教师签名：＇乂日期：姚／３摘要叶绿体中的巧囊体是植物光合作用过程中进斤光反应的场所，是受温度影响最敏一一。ｈｏｓｈａｔｉｄｌｌｃｅｒｏｌＰＧ，感的部位么稱脂醜付油（ｐｐｙｇｙ，）是巧囊体膜中唯的磯脂其－－脂肪酸的不饱和程度与植物对低溫的敏感性密切相关。叶绿体甘油３磯酸醜基转移－－－ｌｃｅｒｏｌｈｏｓｈａｔｅａｃ酶ｓＭ３ｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＧＰＡＴ）和脂肪酸脱氨酶ｆａｔａｃｉｄＣｇｙｐｐｙ（ｙｄｅｓ

5、ａｔｕｒａｓｅｓＦＡＤ是巧定ＰＧ中不饱和脂肪酸含量的重要因素。我们从强抗寒植物蒙古，））沙冬青ｚｗｏｎｇｏ此ＵＳ克隆到了和＾０７剧ＺＳ基因的ｃＤＮＡ，并）中着重分析了了巧响应和抵抗温度胁迫中的功能。主要研究结果如下：－ｃＤＮＡ１用ＲＴＰＣＲ方法扩增到ＡｗＧ饼ｒ的全长编码区，它由１３８３ｂ组成，（）ｐ。Ｎ推测其编码蛋白含４６０个氨基酸残基序列分析显示其为亲水性蛋白，具有端叶绿体导化，属于叶绿体可溶性ＧＰＡＴ。－巧通过半定量ＲＴＰＣＲ分化发现在正常条件下表达量较高，室内低温

6、处理和野外自然冷冻胁迫可诱导其表达量上调，而高温胁迫对该基因的表达总体上呈抑制趋势，干早胁迫则对其表达量影响不大。（３）将＾／？饼＾了编码区ｃＤＮＡ构建到植物超表达载体上，转化拟南芥后对Ｔ３巧纯合体进行了抗逆性鉴定。结果表明，在冻害条件下，转基因株系比野生型幼苗的存．活率明显提髙，月其恢复生长好于野生型。此外，转基因株系的叶绿素萊光Ｆｖ／Ｆｍ值巧冷冻处理后的恢复期回升速度快于野生型。而转基因株系对离温和干早胁迫的耐性低于野生型。上述结果表明，主要巧响应和抵抗低温胁迫中发挥功能。（

7、４）用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增到间公的全长ｃＤＮＡ编码区，它由１５２６ｂｐ组成，推测其编码蛋白含４５７个氨基酸残基。将该ｃＤＮＡ片段成功构建到植物超表达载体上，转化掛南芥后获得Ｔ。１代转化植株关键词：蒙古沙冬青；Ｇ似了；剧０；基因克隆；表达分析；功能鉴定ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＡｎａｌｓｅｓｏｆＡｍＧＰＡＴｏｎｄＡｍＦＡＤＳＧｅｎｅｓｆｒｏｍｙＡｍｍｏｐｉｐｔａｎｔｈｕｓｍｏｎｇｏｌｉｃｉｉｓＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｙｌａｋｏｉｄｉｎｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｉｓｔｈｅ

8、ｓｉｔｅｏｆｐｈｏｌ；ｏｒｅａｃｔｉｏｎｉｎｐｈｏｔｏｓｙｍｈｅｓｉｓｏｆｐｌａｎｔｓ，ａｎｄｉｔｔｉｖｅａｒｔｓｔｏｔｅｍｅｒａＵｉｒｅＰＧｈｏｉｉｓａｋｏｏｎｅｏｆｄｉｅｍｏｓｔｓｅｎｓｉｐｐ．ｓｈａｔｉｄｉｌｃｅｒｏｌｓｔｈｅ（ｐｐｙｇｙ）ｕｎｉｑｕｅｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｉ打ｔｈｙｌａｋｏｉｄｍｅｍｂｒａ打ｅｓ，ａｎｄ化ｅｕｎｓａｔｕｒａｔ