蒙古沙冬青转录组测序和amdreb1f基因的克隆

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1、内蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：日期：垫!丝垒笸虬8内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文

2、工作的知识产权单位属内蒙古农业大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：日期：銎!蟛旦11目摘要IIIIIIIIIitlllll)1111111111111t1)11111)111111)1lY2600868沙冬青(Ammopiptanthusmongoli

3、cus)具有很强的耐寒和耐早等耐逆特性，是研究植物耐寒耐旱机理和挖掘耐逆基因的珍稀材料。然而，目前对于沙冬青功能基因组的研究只取得了有限的序列数据。本研究利用Illumina技术对蒙古沙冬青在冷冻和干旱胁迫下的转录组进行了测序和从头组装，并对其中AmDREBIF基因进行了克隆，取得了下列主要研究成果：(1)测序产生了4．26G的高质量数据。47．29Mb的cleanreads和86058条Unigene序列，其平均长度为756bp，N50长度为1279bp。’(2)利用RT-PCR方法对12条Unigene序列进行了扩增验证，表明本研究序列组装

4、结果质量较高。(3)通过对蛋白质数据库进行Blast搜索，共有51014条Unigene与已知的基因匹配，其中多数被注释的基因可划归于44个GO功能条目、25个COG蛋白族和125条KEGG途径。共有35044条Unigene没有匹配序列，其中有部分Unigene可能来自沙冬青中所特有的基因。(4)根据功能注释信息，共有2533条Unigene序列编码转录因子，分属于57个转录因子家族。(5)通过在TIGR植物转录组数据库中进行Blast比对，表明与蒙古沙冬青转录组最相似的物种是大豆。(6)利用PCR方法克隆了AmDREBlF基因的编码区eDN

5、A和gDNA，二者均由726bp组成，故无内含子序列。推测其蛋白产物由241个氨基酸残基组成，含1个保守的AP2结构域和核定位信号，定位于细胞核。(7)A刎豫船J，的表达主要受低温的诱导，而受干旱和高盐胁迫诱导的幅度较小。将该基因编码区cDNA片段成功构建到植物表达载体pCAMBIA3301上，利用农杆菌介导法将AmDREBIF基因转化拟南芥，目前已经获得35株T1代，为进一步研究其功能奠定了基础。关键词：沙冬青；冷冻；干旱；转录组测序；DREB；基因克隆TranscriptomeSequencingofAmmopiptanthusMongol

6、icusandCloningofAmDREBlFGeneAbstractAmmopiptanthusmongolicushasverystrongcoldanddroughttolerancesandisarareplantspeciesforstudyingbothcoldanddroughttolerancemechanismsandtherelatedstress．tolerantgenes．HoweveLonlylimitedgenomicdataarecurrentlyavailableforthisplant．Atpresentst

7、udy,weperformedthetramcriptomesequencingandde／20V0assemblyofcold—anddrought-stressedA．mongolicususingIUuminatechnology．WealsoclonedtheAmDREBIFgenefromA．mongolicus．Themainresultsaleasfollows：(1)Thesequencingoutputgenerated4．26gigabasesofhigh-qualitydata,47．29millionbasesofcle

8、anreadsand86058unigenesequences，withanaveragelengthof756bpandN50lengthof127