自噬在成骨细胞氧化应激中的作用及其与骨质疏松的关系研究

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1、上海交通大学博±学位论文自處在成骨细胞氧化应激中的作用及其与骨质疏松的关系研究ＴＨＥＲＯＬＥＯＦＡＵＴＯＰＨＡＧＹＩＮＯＸＩＤＡＴＩＶＥＤＡＭＡＧＥＴＯＯＳＴＥＯＢＬＡＳＴＳＡＮＤＩＴＳＣＯＮＴＲＩＢＵＴＩＯＮＴＯＯＳＴＥＯＰＯＲＯ別Ｓ作者姓名：杨越华指导教师：蒋雷生教授学科专业：外科学（骨外）提交日期：２０１５年４月０８日２０１５年５０４日答辩日期：月学号：０１２７２２９２０４Ｉ上海交通大学博±学位论文自處在成骨细胞氧化应激中的作用及其与骨质疏松的关系研究ＴＨＥＲＯＬＥＯＦＡＵＴＯＰＨＡ

2、ＧＹＩＮＯＸＩＤＡＴＩＶＥＤＡＭＡＧＥＴＯＯＳＴＥＯＢＬＡＳＴＳＡＮＤＩＴＳＣＯＮＴＲＩＢＵＴＩＯＮＴＯＯＳＴＥＯＰＯＲＯＳＩＳ作者姓名：杨越华指导教师：蒋雷生教授学科专业：外科学（骨外）研究方向：骨质疏松申请学位：博±培养单位：医学院附属新华医院提交日期：２０１５年４月０８日答辩日期：２０１５年５月０４日关键词：骨质疏松细胞自唆细胞调亡氧化应激成骨细胞骨细胞ＩＩ上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明，是本人在导师的指导下，：所呈交的学位论文独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注

3、明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本。文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中Ｗ明确方式标明本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。Ｌ学位论文作者签名：广衣應宇日期：年月日ＩＩＩ上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本

4、学位论文。保密□，在＿年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□〇＂＂（请在Ｗ上方框内打Ｖ）学位论文作者签名：了指导教师签名：日期：年月日日期：年月日ＩＶ上海交通大学医学院博壬学位论文自隨在成骨细胞氧化应激中的作用及其与骨质疏松的关系研巧摘要第一部分骨质疏松骨组织中骨细胞自隨増加及其与氧化应激和骨量的关系目的：探讨骨质疏松大鼠骨组织中骨细胞是否存在自唆，Ｗ及与氧化应激的关系。方法；通过去卵巢建立骨质疏松大鼠模型，将３６只６周龄ＳＤ大鼠随机分为假手术组，去卵巢组（ＯＶＸ组）和去卵巢加雌激素治疗组（０ＶＸ＋Ｅ２）

5、。６周后，ｉｃｒｏ－ＣＴ和ＤＥＸＡ检测骨微细结构和骨量通过ｍ，透射电镜观察骨细胞胞浆内自ｔｔ－唆体Ｗ及细胞器的变化，免疫巧光法、Ｗｅｓｅｒｎｂｌｏ和ｑＲＴＰＣＲ检测自唆特异性基因ＢＥＣＮ－１、Ｐ６２／ＳＱＳＴＭ１Ｗ及Ｍａｐｌ－ＬＣ３－ＩＩ／Ｉ的表达。并通过ＥＬＩＳＡ检测血Ｔ－ＡＯＣ、ＳＯＤ、ＣＡＴ浆内雌激素水平、骨组织内等抗氧化酶活性。此外，分析自唆与氧化应激的相关性。结果：骨质疏松模型大鼠骨细胞，透射电镜下细胞胞浆内可见较多环状结构物质，该物质有自唆体特异性的双层膜结构，同时Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测自唆相关基因１ＢＥＣＮ－

6、１Ｍｌ－ＬＣ－ＩＭ蛋白表达增加Ｐ６２／ＳＱＳＴＭ、Ｗ及ａｐ３。免疫巧光检测结果思－思增高组织示，骨质疏松动物模型骨细胞胞浆内ＭａｌＬＣ３蛋白的表达明ｐ；而骨内抗氧化酶活性明思下降，提示在此过程中细胞自唆与抗氧化酶相关。结论：骨质疏松模型大鼠骨细胞自唆增强，且与氧化应激相关，但自唆与氧化应一■步实验明确激的关系有待进。关键词：骨质疏松；氧化应激；自隨；骨细胞Ｖ上海交通大学医学院博壬学位论文第二部分内质网应激介导自處减轻成骨细胞氧化应激损伤目的：氧化应激诱导成骨细胞调亡在骨质疏松病理过程中起重要作用，但自唆在成骨细胞氧化应激、调亡

7、中的作用尚未明确。本项研究的目的在于观察自唆对成骨细胞氧化应激损伤中的作用，并借此观察细胞自唆与调亡之间的关系。：－给予不同浓度（０．１、１、１０ｍＭ）过氧化氨Ｈ２０２刺激ＭＣ３Ｔ３Ｅ１细胞方法；（）在不同时间０、２、６、８、１２ｈ，采用透射电镜观察自唆体，ＭＤＣ和ＬｓｏＴｒａｃｋｅｒ（）ｙｔｔ－１染色检测细胞内的自唆溶酶体活性，Ｗｅｓｅｒｎｂｌｏ检测自唆相关蛋白ＢＥＣＮ、ｌ－ＬＣ－ＩＩ／Ｉ－Ｍａ３的表达变化，ＤＣＦＨＤＡ巧光染色检测细胞内的ＲＯＳ水平ｐ；ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ检测细胞调亡率Ｒａ－Ｍ