胞红蛋白对巨噬细胞氧化损伤的保护作用

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4、显的细胞保护作用。本文探讨巨噬细胞氧化应激过程中CYGB表达模式；构建CYGB过表达/低表达巨噬细胞模型，研究CYGB在氧化应激过程中对巨噬细胞的作用。[方法]1、将小鼠巨噬细胞株RAW264.7、人巨噬细胞株THP-1、EC及人肝癌细胞HepG2扩增后，Westernblot检测正常生理状态下RAW264.7、THP-1、EC及HepG2细胞中CYGB蛋白的表达水平。2、将小鼠巨噬细胞株RAW264.7扩增后，Westernblot检测RAW264.7在H2O2刺激不同时间时CYGB的蛋白表达水平：分为4组:对照组，0.5mmol/LH2O2处

5、理6、12、24h组。Westernblot检测RAW264.7在不同浓度H2O2刺激12h时CYGB蛋白的表达水平：分为4组：对照组，0.25mmol/LH2O2、0.5mmol/LH2O2、1mmol/LH2O2处理组。3、首先构建CYGB过表达/低表达巨噬细胞模型。然后观察在氧化应激过程中CYGB对RAW264.7小鼠巨噬细胞的作用，将RAW264.7细胞分为4组：对照组、0.5mmol/LH2O2处理组、0.5mmol/LH2O2+CYGB过表达组及0.5mmol/LH2O2+CYGB低表达组。于12h后，检测CYGB蛋白水平、谷胱甘肽过

6、氧化物酶（GSH-PX）、乳酸脱氢（LDH）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）；荧光定量PCR检测CYGB、NF-κB在细胞中的表达。[结果]1、Westernblot结果显示：在正常生理状态下，CYGB在小鼠巨噬细胞I株RAW264.7、人巨噬细胞株THP-1、人脐静脉内皮细胞EC及人肝癌细胞HepG2中均有表达。2、Westernblot结果显示：H2O2处理6、12、24h组CYGB表达水平高于对照组，并且在12h组CYGB表达水平最高，差异有统计学意义（P<0.05）。0.25mmol/LH2O2、0.5mmo

7、l/LH2O2和1mmol/LH2O2处理巨噬细胞12h后CYGB表达水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。3、荧光显微镜结果显示：转染CYGB过表达质粒及CYGB低表达质粒的巨噬细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光。4、Westernblot结果显示：0.5mmol/LH2O2处理组、0.5mmol/LH2O2+CYGB过表达组及0.5mmol/LH2O2+CYGB低表达组CYGB蛋白表达水平均高于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。0.5mmol/LH2O2+CYGB过表达组的CYGB表达最高（P<0.05），0.5mmol/

8、LH2O2+CYGB低表达组的CYGB表达较0.5mmol/LH2O2处理组低，差异有统计学意义（P<0.05）。酶联免疫吸附测定法（E