抗氧化剂对铀矿尘致人巨噬细胞功能损伤保护作用

《抗氧化剂对铀矿尘致人巨噬细胞功能损伤保护作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、主要英文缩略语索引I中文摘要IIIAbstract材料与方法31实验材料32实验方法43数据统计分析8结果91铀矿尘对人巨噬细胞功能损伤的影响92抗氧化剂对铀矿尘致巨噬细胞损伤保护作用14讨论211•铀矿尘对人巨噬细胞功能损伤的影响212.抗氧化剂对铀矿尘致巨噬细胞损伤保护作用23结论25参考文献26综述31已发表的论文37致谢38主要英文缩略语索引(ABBREVIATIONS)英文缩写英文全称中文名称AMAlveolarmacrophage肺泡巨噬细胞CaCalcium钙CATCatalase过氧化氢酶2,7■二氯荧光黄双乙酸DCFH

2、-DA2,7・dichloro・fluoresceindiacetate盐E.coliEscherichiacoli大肠埃希氏菌GSHGlutathione谷胱甘肽GM-CSFGranulocytc-macrophagccolonys粒细胞■巨噬细胞集落timulatingfactor刺激因子IL-8Intcrlcukin-8白细胞介素・8IL-ipInterleukin-1卩白细胞介素・1卩Mitochondrialmembranepotentialassay线粒体膜电位检测试JC-10kitwithJC-10剂盒JC-10MTTMe

3、thylthiazolyltetrazolium四甲基偶氮卩坐蓝法NACN-acetylcysteineN・乙酰半胱氨酸PBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PIPropidiumiodide碘化丙唳PMAPhorbol・12-myristate-13-acetate佛波酯ROSReactiveOxygenSpecies活性氧SODSuperoxidedismutase超氧化物歧化酶THP-1Ratalveolarmacrophagecellline人单核白血病细胞系TNF-aTumornecrosisfact

4、or-a肿瘤坏死因子抗氧化剂对铀矿尘致人巨噬细胞功能损伤的作用研究生：曹芳导师：贺性鹏教授朱茂祥研究员专业：劳动卫生与环境卫生学中文摘要目的探究铀矿尘对人巨噬细胞功能影响的研究以及四种抗氧化剂(NAC、SOD、CAT、甘露醇)对铀矿尘介导的巨噬细胞损伤保护作用，为降低铀矿尘致肺损伤寻找防护剂提供实验依据。方法将实验分为对照组(0Mg/cm2)和实验组(25、50、100、200和400pg/cn?),通过MTT法检测铀矿尘对人巨噬细胞(THP-1)存活率影响的时效关系；采用Annexin-VFITC/PI双染法以及Hoechst3325

5、8荧光标记法来分析铀矿尘对人巨噬细胞凋亡率和凋亡形态学的影响；经2,7•二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色后，采用荧光显微镜及化学/荧光发光仪检测铀矿尘对人巨噬细胞内活性氧(ROS)水平的变化情况；分别用荧光染料JC・10、FLU68AM、CMFDA染色后，化学/荧光发光仪检测THP-1巨噬细胞线粒体膜电位、细胞内游离钙离子(Ca2+)及胞内谷胱甘肽(GSH)水平的变化情况；FITC标记的大肠杆菌与不同浓度铀矿尘处理12h后的THP-1巨噬细胞共同孵育2h,化学/荧光发光仪检测其荧光强度，分析铀矿尘对THP-1巨噬细胞吞噬功能的影

6、响；液体悬浮芯片系统检测各实验组细胞因子(IL・1

7、3、GM・CSF、TNF-a.IL・8等)时效关系的变化特征。抗氧化剂(NAC、SOD、CAT、甘露醇)孵育THP-1巨噬细胞后，检测铀矿尘致巨噬细胞损伤后细胞凋亡、凋亡相关指标、吞噬功能以及细胞因子的变化情况，比较研究四种抗氧化剂对铀矿尘致人巨噬细胞功能损伤的保护作用。结果铀矿尘染毒人巨噬细胞后，细胞存活率呈暴露时间和剂量依赖性下降。胞内ROS的变化水平和细胞凋亡率与染毒剂量呈正相关，上升的ROS水平加快GSH耗竭。同时伴随线粒体跨膜电位的下降与胞内Ca?+水平上升。细胞的吞噬功能随

8、着铀矿尘浓度的升高而逐渐被抑制，低剂量铀矿尘处理吋IL・1

9、3、GM-CSF.TNF-a和IL・8等细胞因子的表达量呈逐渐增加状态，加快了炎症反应。四种抗氧化剂（SOD、CAT、廿露醇、NAC）孵育THP-1巨噬细胞后，存活率较处理前明显上升，凋亡率也呈下降趋势，氧化损伤指标影响的（ROS和GSH变化水平）也呈对应变化趋势。其中，NAC和甘露醇组作用效果最为明显。NAC孵育后较孵育前能明显抑制巨噬细胞吞噬功能的降低，IL・10、GM-CSF、TNF-a.IL-8等细胞因子的上升幅度较孵育前也明显降低。胞内活性氧自由基（H2O2、0厂、・

10、0H等）的产牛与铀矿尘致人巨噬功能损伤呈正相关，・0H可能是细胞损伤过程中最主要的活性氧自由基，其具体作用机制需要进一步研究。结论1.铀矿尘能诱导THP-1巨噬细胞凋亡，降低细胞存活率，早期铀矿尘致细胞损伤