白藜芦醇对thp-1源性巨噬细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级：___________MDC：___________白藜芦醇对THP-1源性巨噬细胞氧化损伤的保护作用及机制研究课题来源：广东省自然科学基金（S2013010011949）广东省自然科学基金（2016A030313755）姓名：宋东清学号：2111542016院系：临床医学院学位类型：学术学位专业：内科学研究方向：心血管内科导师：阮云军副主任医师论文提交日期：2018年3月21日论文答辩日期：2018年5月14日学位授予单位：广东药科大学二〇一八年五月广州广东

2、药科大学硕士研究生学位论文StudyoftheprotectiveeffectandthemechanismofResveratrolonTHP-1MacrophagesfollowingoxidativeinjuryCandidate：SONGDongqingStudentID：2111542016Affiliation：SchoolofclinicalmedicalAcademicDegreeApliedfor:MasterofMedicine，Speciality：InternalMedicineSupervisor：

3、ProRuanYunjunDayofDefence：May2018Degree-Conferring-InstitutionGuangdongPharmaceuticalUniversityMay2018广东药科大学硕士研究生学位论文广东药科大学硕士研究生学位论文白藜芦醇对THP-1源性巨噬细胞氧化损伤的保护作用及机制研究硕士研究生：宋东清指导老师：阮云军摘要【研究背景及目的】随着人们生活水平的不断提高，动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）性心血管疾病的发病率和病死率逐年升高，已严重威胁着人类的生命健康，给家

4、庭和社会带来巨大负担。AS是以动脉血管壁脂质沉积、内膜损伤增生、炎性浸润和粥样斑块形成为主要病理表现的病变，其发病机制非常复杂，受多种因素综合影响，国际学术界为此提出了众多AS发病机制学说，其中脂质浸润学说、氧化应激学说、炎症学说仍是当今主要研究的热点。脂质浸润学说认为血液中增多的氧化低密度脂蛋白侵入受损的血管内皮细胞并蓄积在内皮下，使单核细胞粘附在内皮细胞上的数量增多，并向内膜下迁移转化为巨噬细胞，通过清道夫受体吞噬氧化低密度脂蛋白形成泡沫细胞。当巨噬细胞不能有效降解脂蛋白，它们将体积变大甚至破裂，导致大量的氧化脂蛋白进入

5、血管壁，加剧AS的发生发展。因此巨噬细胞功能的改善在AS形成中起重要作用，但目前对改善巨噬细胞功能方面的研究所知甚少。研究发I广东药科大学硕士研究生学位论文现，氧化应激存在于AS发生发展过程中，并介导了单核巨噬细胞功能改变和损伤，而减轻巨噬细胞氧化损伤可能有助于延缓AS的进程。因此如何提高巨噬细胞的抗氧化能力具有重要意义。白藜芦醇（Resveratrol，Res）是红葡萄酒中发挥心血管保护作用的重要物质，其具有抗氧化、抗炎、抗血小板聚集和抗血栓形成等多种生物活性，其中Res抗氧化和抗炎方面的作用最为突出。但是其是否对巨噬细胞

6、具有保护作用尚不明确。众所周知，内皮细胞和平滑肌细胞也是AS形成的重要细胞组成，有研究发现Res可以通过提高内皮细胞及平滑肌细胞的抗氧化能力起到细胞保护作用，从而延缓动脉粥样硬化形成，因此，我们推测Res对巨噬细胞氧化损伤也具有保护作用，可以改善巨噬细胞功能，延缓AS进展。为此，本课题拟观察Res预处理THP-1源性巨噬细胞后能否改善对THP-1源性巨噬细胞的氧化损伤。另外，鉴于自噬是细胞自我保护的重要机制，巨噬细胞自噬在动脉粥样硬化中发挥了自我保护的作用，在本研究中也将进一步探讨Res的作用效应及与巨噬细胞自噬之间的可能的

7、联系。【方法】1.佛波酯诱导人单核THP-1细胞分化为巨噬细胞每次实验前，将处于对数生长期的人单核THP-1细胞用160nmol／L的佛波酯（PMA）孵育48h，诱导后分化为巨噬细胞，利用倒置显微镜下动态观察细胞的形态学变化。用免疫细胞化学的方法进一步鉴定巨噬细胞。2.巨噬细胞氧化损伤模型的建立II广东药科大学硕士研究生学位论文将巨噬细胞分为对照组（Control组）、不同浓度过氧化氢（Hydrogenperoxide,H2O2）处理组:分别加入浓度100、200、300、400、500μmol/LH2O2作用细胞12h、2

8、4h、36h。MTT法检测各组巨噬细胞的细胞活力，确定H202最佳诱导损伤的浓度及作用时间，建立巨噬细胞氧化损伤模型。3.不同浓度Res对氧化损伤巨噬细胞的干预作用将巨噬细胞分为Control组、H2O2组、H2O2+Res组：分别加入20、40、60、80、100μmol/LRes预处理