绵羊骨骼肌特异表达mirna前体多态及其表达分析

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1、分类号:密级：学号:2013408012单位代码：10759石河子大学碩士營像讼夂绵羊骨骼肌特异表达miRNA前体多态及其表达分析学位申请人宋广超指导教师刘守仁研究员甘尚权研究员中请学位类别专业硕士专业名称农业推广硕士研究领域养殖所在学院动物科技学院中国•新疆•石河子2015年5月分类号：密级：学号：2013408012单位代码：10759石河子大学硕士学位论文绵羊骨骼肌特异表达miRNA前体多态及其表达分析学位申请人宋广超指导教师刘守仁研究员甘尚权研究员申请学位类别专业硕士专业名称农业推广硕士研究领域养殖所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2015年5月Detectionan

2、danalysisofpolymorphismattheSheepskeletalmuscle-specificmiRNAamongdifferentFlocksADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofProfessionalMasterofAgricultureBySongGuangchao(AgriculturalExtensionMaster)DissertationSupervisor:Prof.LiuShou-renProf.G

3、anShang-quanMay,2015石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：if时间：年月?曰使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供

4、检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。摘要提高绵羊的产肉性能在绵羊养殖业中具有重要的生产意义。据研究表明，miRNA在骨骼肌发育过程中起到重要的调控作用。而miR-1,miR-133和miR-206三种miRNA在骨骼肌和心肌中特异表达，与肌肉发育息息相关。鉴于此，本论文以miR-1,miR-133和miR-206及其前体为研究对象，从以下几个方面探究其在绵羊骨骼肌发育中的表达规律及生物学作用：1.采集发育时间为45天、65天、85天、105天和125天的绵羊胚胎，提取后肢骨骼肌样品并提取RNA，利用荧光定量PCR技术研究miR-1,mi

5、R-133和miR-206在绵羊胚胎阶段的不同时期以及成年后的表达规律。2.采用PCR-SSCP及测序检测miR-1,miR-133和miR-206前体序列在不同产肉性能的四个绵羊品种（特克赛尔羊、阿勒泰羊、中国美利奴羊和湖羊）中的多态性，发现miR-133前体g.54047535位点存在一个A>G突变，该位点存在AA、AG、GG三种基因型。并对该突变位点在不同品种绵羊群体中的基因频率进行生物统计学分析，证明该位点G等位基因频率在特克赛尔羊群体中远高于A等位基因，其差异显著（p<0.5）。二级结构预测分析表明该突变可以提高miR-133前体基因二级结构的稳定性。3.将包含该突变位

6、点的miR-133前体基因序列构建表达载体，转入Hela细胞，在细胞水平验证其前体序列的改变对miRNA成熟加工的影响。实验证明包含GG基因型的基因片段能够显著提高细胞内miR-133的表达量。本论文的研究成果可在分子水平初步阐明miR-1,miR-133和miR-206的表达量及其前体序列的改变与绵羊骨骼肌生长发育的相关性，为绵羊骨骼肌生长发育的调控及优良肉羊品种的培育提供理论基础及手段，对提高绵羊的产肉性能和肉羊育种产生积极地推动作用。IAbstractSheephusbandryplaysanimportantroleinbreedingindustry.Sheepfarm

7、ingcangetavarietyofeconomicbenefits,inwhichmeatperformanceisthemostimportanteconomictraits.Differentsheepspecieshavedifferentmeatproductionperformance.Molecularmechanismofmuscledevelopmenthavecarriedoutalotofresearch.Someofthegenesinvolvedinm