藏系绵羊gsdma基因皮肤特异表达载体的构建

《藏系绵羊gsdma基因皮肤特异表达载体的构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、硕士学位论文题目藏系绵羊GSDMA基因皮肤特异表达载体的构建作者任亮完成日期2015年3月14日学科门类农学专业基础兽医学研究方向动物功能基因组学指导教师郑玉才学院(系、部)生命科学与技术学院授予学位日期年月日Constructionofskin-specificexpressionvectorforGSDMAgeneofTibetansheepByLiangRenAThesisSubmittedToSouthwestUniversityforNationalitiesInFulfillmentof

2、theRequirementsforMasterDegreeSupervisor：YucaiZheng(Professor)CollegeofLifeScienceandTechnologySouthwestUniversityforNationalitiesChengdu,610041,P.R.ChinaMarch2015藏系绵羊GSDMA基因皮肤特异表达载体的构建摘要本研究的目的是构建藏系绵羊Gasdermin基因家族成员GSDMA基因的表达载体，在细胞水平上探索GSDMA基因在毛囊细胞中可能发

3、挥的调控机制，为进一步研究绵羊GSDMA基因在毛囊发育与周期变化中的功能提供理论基础。试验以藏系绵羊母羊为研究对象，从皮肤中克隆了藏系绵羊GSDMA基因序列，并以此为基础构建了皮肤特异的真核表达载体，进一步转染体外培养的人毛囊内根鞘细胞(Humanhairinnerrootsheathcells,HHIRSC)，利用荧光定量PCR及Westernblot检测藏系绵羊GSDMA基因以及与毛囊生长发育相关的Wnt通路信号分子β-catenin基因mRNA和蛋白质水平的变化。主要研究成果如下：（1）获得了

4、藏系绵羊GSDMA基因的CDS编码区序列，长度为1341bp。CDS区序列比对显示，GSDMA基因与预测的绵羊序列存2个碱基差异，但氨基酸序列相同。（2）以pCDsRed2-KI真核载体为骨架，构建了含KAP6.1皮肤特异表达启动子的GSDMA基因重组真核载体pCDsR-KG。（3）将pCDsR-KG转染HHIRSC，用流式细胞术分选红色荧光蛋白(RFP)标记的阳性转染细胞。经荧光定量PCR和Westernblot分析，藏系绵羊GSDMA基因在转染pCDsR-KG载体的HHIRSC中高表达，并且β-

5、catenin基因在mRNA水平上表达量上调了2.2倍，在蛋白水平上相对于未转染的细胞提高了30%。结果提示，藏系绵羊皮肤特异真核表达载体pCDsR-KG构建成功，可用于GSDMA基因功能的细胞水平研究；初步推测，GSDMA基因可能通过Wnt通路影响毛囊的发育和周期变化。关键词：藏系绵羊；毛囊；GSDMA；载体；β-cateninIAbstractTheobjectiveofthisstudywastoconstructGSDMAgene(oneoftheGasdermingenefamilymem

6、bers)expressionvectorofTibetansheep,andtoexplorepossibleregulationmechanismofGSDMAinfolliclecellsatcellularlevelandprovideatheoreticalbasisforfurtherstudyingthefeatureofsheepGSDMAgenesinhairfollicledevelopmentandcycling.TibetansheepewewasusedtocloneGSD

7、MAgenefromtheskintissueandtoconstructskin-specificeukaryoticexpressionvector.ThentransfectedHumanhairinnerrootsheathcellsinvitrousingtheconstructedvector.Real-timePCRandWesternblotwereusedtodetectinthetransfectedcellsthemRNAandproteinlevelsofGSDMAgeneo

8、fTibetansheepandβ-catenin,whichisasignalingmoleculeofWntsignalingpathwayessentialforhairfolliclegrowthanddevelopment.Themainfindingsareasfollows:（1）A1341bpcodingsequence(CDS)ofGSDMAgeneofTibetansheepwasobtained.SequencealignmentsofCDSre