软坚散结胶囊调控vegf-erk信号通路影响胃癌sgc79001细胞增殖与凋亡的实验研究

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4、於．茂蘇巧拍：浩．山西省中區药研究院学位论文原创性声明：所呈交的学位论文，本人郑重声明，是个人在导师的指导下独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加化注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人。和集体，均已在文中从明确方式标明并致谢本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名－：１０日日期ＩＶ年ｔ月幻关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山西省中医药研究院有关保留使用学位论文的规定，同意学校

5、保留或向国家有关部口机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权山西省中医药研究院可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。，可采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名论文导师签名＿＾！１＾＾＾日期：年月巧日ｔ中文摘要目的：本实验应用血清药理学方法通过CCK8、激光共聚焦显微镜技术、流式细胞术、WesternBlot及RT-PCR等技术手段研究临床中药制剂软坚散结胶囊对胃癌SGC7901细胞增殖及凋亡作用，

6、并进一步探讨其分子作用机制及与VEGF-ERK信号通路的关系，为临床使用软坚散结胶囊治疗胃癌提供实验理论依据。方法：1.制备软坚散结胶囊含药血清。2.检测软坚散结胶囊含药血清对胃癌SGC7901细胞增殖的影响：CCK8法检测软坚散结胶囊含药血清对胃癌SGC7901细胞增殖的抑制作用。3.检测软坚散结胶囊含药血清对胃癌SGC7901细胞凋亡的诱导作用：激光共聚焦显微镜观察软坚散结胶囊含药血清对胃癌SGC7901细胞形态的影响；流式细胞仪检测软坚散结胶囊含药血清对胃癌SGC7901细胞凋亡率的影响。4.探讨软坚散结

7、胶囊含药血清抑制胃癌细胞增殖的作用机制及与VEGF-ERK信号通路的关系：WesternBlot检测软坚散结胶囊含药血清对人胃癌SGC7901细胞ERK、P-ERK及VEGF蛋白表达的影响；RT-PCR检测软坚散结胶囊含药血清对人胃癌SGC7901细胞中Caspase-3,Bax,Bcl-2基因表达的影响。结果：1.CCK8结果显示软坚散结胶囊含药血清对胃癌SGC7901细胞增殖有抑制作用。2.激光共聚焦显微镜下可见软坚散结胶囊含药血清处理后细胞发生凋亡:阴性对照组以正常活性细胞为主，Annexinv和PI均为

8、低染，细胞膜完整，细胞形态正常；低剂量组组可见AnnexinV高染（细胞膜呈绿色荧光）、PI低染（细胞核着色浅或不着色），提示部分细胞处于凋亡早期阶段，细胞形态尚正常；中剂量组含药血清组可见Annexinv高染、PI低染（细胞膜呈绿色荧光，细胞核呈桔红色荧光)，提示部分凋亡中晚期细胞发生且细胞形态变圆；高剂量组含药血清组PI高染（细胞核呈红色荧光），出现部分细胞的细胞膜破裂、细胞核呈大