告达亭通过wntβ-catenin信号通路影响胃癌细胞系的增殖

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1、分类号——学校代码!Q量垒2密级告达亭通过Wnt／[3．catenin信号通路影响胃癌细胞系的增殖CaudatinaffectscellproliferationingastriccancercellsthroughmodulationofⅥ恤t／B．cateninsignaling■1一，一指导教师姓名、职称周逝耋丝湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一四年五月IIIIIIIMIllllllllllllllllllllllllllllllllY2548820摘要、⋯研究表明告达亭具有抑制胃癌，肝癌以及肺癌细胞等癌细胞生长和诱导细胞凋亡的作用，这被认为它具有抗肿

2、瘤作用。尽管已有文献报道告达亭能够有效地抑制胃癌细胞株的增殖，但是目前有关告达亭是通过何种途径影响胃癌细胞株增殖和凋亡还未见报道。在本论文研究中，我们采用MTT法检测告达亭对胃癌细胞株(AGS和HGC．27)增殖的影响。通过Hoechst33258染核、细胞凋亡流式分析法检测告达亭对胃癌细胞株(AGS和HGC．27)凋亡的影响。同时，Westernblot结果显示，在AGS细胞株中，半胱氨酸蛋白酶家族(Caspases)中的Caspase-9、Caspase-3、Caspase一8和多聚ADP-核糖聚合酶(P_卿)均被激活，诱导细胞凋亡的发生。细胞周期流式分析法

3、结果显示，不同剂量的告达亭处理细胞后，AGS和HGC．27细胞株都被阻遏在G1期，Westemblot结果显示，CDK2随着告达亭浓度的增高的表达逐渐降低，而P21的表达逐渐增高。这些研究结果表明，告达亭处理胃癌细胞株(AGS和HGC．27)后可以抑制其增殖并诱导细胞凋亡发生，并且这种细胞凋亡现象具有时间和剂量依赖性。免疫细胞化学和Westernblot实验结果表明，在HGC．27和AGS细胞株中，告达亭降解D-catenin蛋白，这种降解是通过蛋白酶体途径实现的，并且下调p-catenin的下游cyclinDl和c．MYC的表达。进一步研究表明，在胃腺癌组织和

4、AGS细胞株中，miR-372异常表达。在AGS细胞株中，随着告达亭处理浓度的增高，miR-372和miR-21的表达均逐渐下降，而1et．7amiRNA的表达逐渐上升。本论文研究结果表明，告达亭可以抑制胃癌细胞株(AGS和HGC．27)的增殖并诱导其凋亡，其诱导凋亡的原因是通过影响Wnt／13-catenin信号通路来实现的。这揭示了告达亭抗肿瘤作用的一种新机制，为临床治疗胃癌提供了一种新的思路。关键词：胃癌细胞株，告达亭，13-eatenin，Caspase家族，细胞凋亡，信号通路ABSTRACTA10tofpapershaveindicatedthatca

5、udatincouldinhibitcellsproliferationandinducecellsapoptosis，suchasgasticcarcinoma，hepaticcarcinomaandlungcancer,whichwasconsideredthatcaudatinpossessesthecharacteristicsofanti—tumor．Althoughithasreportedthatcaudatincouldinhibitgastriccellsproliferationandinducecellsapoptosis，fewstudi

6、eshaverevealedtheunderlyingmechanismsofcaudatiningasticcells．Inourpresentstudy,wedetectedtheinfluenceofcaudatinongastriccells(AGSandHGC一27)inproliferationbyusingMTTassay．wealsoanalyedtheeffectofcaudatinongastriccells(AGSandHGC·27)mapoptosisthroughthemethodsofHoechst33258stainingandFA

7、CSassays．Inaddition，WesternblotanalysisdemonstratedthatCaspase-9，Caspase-3，Caspase-8andPARPwereactivated，whichresultedincellapoptosis．FACSassaysshowedthatcaudatininducedG1／Sarrestanddown-regulatedtheexpressionofCDK2，yet，theproteinofthep21levelswasup··regulatedinadose--dependentmanner

8、．Theseresult