sirna-id-1对肝癌hepg2细胞增殖的影响与erk信号通路调控的实验研究

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1、福建医科大学硕士学位论文siRNA-Id-1对肝癌HepG2细胞增殖的影响与ERK信号通路调控的实验研究姓名：林孟新申请学位级别：硕士专业：内科学（消化内科）指导教师：刘豫瑞20090301siRNA—Id一1对肝癌HepG2细胞增殖的影响与ERK信号通路调控的实验研究中文摘要目的：观察siRNA—Id一1对肝癌细胞系HepG2细胞增殖的影响，研究Id-i促进肝癌细胞增殖与细胞外信号调节蛋白激酶(extracellularsignalregulatedproteinkinase，ERKl／2)信号转导途径的关系，探讨ERKI／2’信号通路在肝癌Hep

2、G2细胞增殖中的作用。方法：针对Id—ImRNA序列设计合成编码siRNA的DNA模板，构建siRNA—Id一1重组质粒，转染HepG2细胞，实验分成四组：siRNA—Id一1组、阴性对照组、脂质体组和空白组；分别用反转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测转染后Id一1、ERKl／2mRNA与蛋白的表达；噻唑蓝比色法(MTT)观察细HepG2细胞胞增殖情况，流式细胞术分析细胞周期特征。结果：第一部分：HepG2细胞转染siRNA—Id一1后24小时，蛋白免疫印迹显示siRNA-Id-i组Id一1、ERK蛋白

3、的表达较其他三组组明显减弱。RT-PCR显示siRNA—Id-1组Id一1、ERKl／2mRNA表达明显降低，与阴性对照组、脂质体组和空白组比较，差别具有统计学意义(PO．05)。2、流式细胞周期仪结果：siRNA-Id-1干预组细胞G1期(DNA合成前期)细胞比例明显增多，S期细胞比例显著减少；与空白组、空脂质

4、体组及阴性对照组相比，均具有统计学意义(P

5、可能是肝癌发生发展过程的重要原因。关键词：si-Id-1细胞周期ERKl／2流式细胞术肝细胞癌4InvestigationontherolesofsiRNA-Id一1intheproliferationof．HepG2cellandtheregulationofERKl／2pathwayAbstractObjective：MyprojectaimsTostudytheeffectofsiRNA——Id——1onthecellgrowonHepG2andinvestigatetherelationshipbetweenId-1inducescellpr

6、oliferationandtheeffectsofextracellularsignalregulatedproteinkinase。Method：establishedsiRNA—Id一1invitro．afterstabletransfectionintoHepG2cellsbyLipofectamine2000，HepG2cellwassettedtofourgroupswithdifferenttreatments：siRNA—Id—lgroup，controlSiRNAgroup，lip02000group，andblankgroup．t

7、heexpressionofId一1andERKl／2wasanalyzedbyRT—PCRandwesternblottingrespectively，cellgrowthwasmeasuredwithMTTassay，cellcycleofthetransfectedcellswasexaminedbyflowcytometry．Result：PartI：AfterHepG2cellsweretransfectedwithsiRNA-Id-124hourslater，TheresultsofRT—。PCRanalysisdiscoveredtha

8、ttheexpressionofId——ImRNAwassuppressedsignificantly．Al