约氏疟原虫mif在宿主抗疟疾感染免疫中的作用机理研宄

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1、京诚和皆学化博＋研究生学位论文Ｗ北京协和医学院研究生院学校代码：１００２３学号：Ｂ２０１２００５０６３博±学位论文约巧痕原虫ＭＩＦ在宿主抗追疾感染免疫中的作用机理研究所院：北京协和医学院基础学院姓名：刘娟指导教师：王恒导师小組：许雪梅、刘力学科专业：病原生物学研究方向：分子寄生虫学和分子免疫学０１５４完成日期；２年月北京协和医学院博±研究生学位论文目录中文摘要１英：＾摘要３刖胃５实验材料１０实验方法１９１．常用分子生物学方法１９２．ＲＮＡ制备和ｃＤＮＡ合成２７

2、３．蛋白的表达和纯化３０４．重组蛋白内毒素的去除方法及检测３２５．蛋白浓度测定３６６．蛋白检测技术３７７－．酬式婦醇式互变异构酶活性测定４３８．细胞生物学方法４３９．细胞调亡检测４５１０．约氏追原虫培养策略４５１１．小鼠实验４６１２．电子显微镜观察样品制备４８１３４９．流式细胞仪检测和分选１４．ＰＭＩＦ敲除质粒构建和转染过程中用到的实验方法５１ｙ１５．Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ细胞迁移实验５３实验结果５５一第部分ＰＭＩＦ在致死型约氏拒原虫（Ｐｙｌ７ＸＬ）感染免疫中的功能探索实验总体技术路线巧

3、一－－１７ＩＦ、巧ＸＬＭＫＯ和ＭＩＦＧＦＰ虫株的制备％１．转染质粒的构建５６２．大量质粒酶切和线性化的条件优化５８３－－．Ｐｙｌ７ＸＬＭＩＦＫＯ和Ｍ１ＦＧＦＰ虫株的获得与鉴定５８二、ＰｙＭＩＦ不影响约氏追原虫红内期生长６５１．ＰｙＭＩＦ不影响感染小鼠虫血率和生存率６５２．ＰｙＭＩＦ不影响血液感染各期的形态６５Ｈ、ＰｙＭＩＦ在红内期约氏拒原虫中定位于虫体胞质内６８－ＩＩＦ．ＰｙＭＧＦＰ在约氏追原虫中定位的观察６８北京协巧医学院博±研巧生学位论文２．ＰｙＭＩＦ通过其单抗在约氏追原虫中的定位６８四、Ｐｙ

4、ＭＩＦ促进宿主炎症因子的分泌７０１．ＰｙＭＩＦ促进感染小鼠贫血症状的发生７０２．ＰｙＭＩＦ促进宿主总ＩｇＭ的产生７１３．ＰｙＭＩＦ促进宿主炎症因子的分泌７２＋＋五、ＰｙＭＩＦ促进ｃｍ化Ｌｙ６ｃ细胞在感染小鼠脾脏中聚集Ｗ促炎７６＋＋１．ＰｙＭＩＦ的缺失下调感染小鼠脾脏ＣＤｌｌｂＬｙ６ｃ细胞数７６＋＋２．ＣＤｎｂＬｙ６ｃ细胞叱例的增加促进脾细胞炎症因子分泌８４＋＋ｃ六、ＰｙＭＩＦ在体外对ＣＤｌｌｂＬｙ６细胞有趋化作用８６＋＋１．ＰｙＭＩＦ对感染小鼠来源的ＣＤＨｂＬｙ６ｃ细胞确有趋化作用％＋．ＣＤｌｌｂ２细胞表面有高水

5、平ＣＸＣＲ２和ＣＸＣＲ４的表达％＋＋３．ＣＸＣＲ２／４的封闭能抑制ＰｙＭＩＦ对ＣＤ１化Ｌｙ６ｃ细胞的趋化郎＋＋４．ＰｙＭＩＦ与ＭｍＭＩＦ在对ＣＤｌｌｂＬｙ６ｃ细胞的趋化上有协同效应８８＋＋５ＰＭＩＦＣＤＨｂｃ－－１、４．ｙ下调Ｌｙ６细胞表面ＩＣＡＭＶＬＡ水平９０二部分（ｌＮＬ第：ＰＭＩＦ在非致死型约氏拒原虫Ｐｙ７Ｘ）感染免疫中功能的初步探索１．Ｐ＾７ＸＮＬ虫株感染小鼠虫血率及ＰＭＩＦ表达变化分析於－２．Ｐｌ７ＸＮＬＭＩＦＫＯ的制备ｙ虫株％１７ＸＮＬ－ＫＯ与ＷＴ虫３．ＭＩＦ株感染Ｂａ化／Ｃ小鼠基本指标检测的比较９

6、３？巧论９７Ｓ论１０２参考文献１０３１文献综述０６附录Ｉ；本论文使用的英文缩略语１２０附录ＩＩ：直樽期间发表的文章和参加的会议１２２親１２３３北京协和医学院博±研巧生学位论文约氏痕原虫ＭＩＦ在宿主抗追疾感染免疫中的作用机理研巧刘娟（北京协和医学院，１００００５北京）中文摘要一由疮原虫感染引起的虫媒传染病拒疾是世界上最严重的Ｈ大传染性疾病之。２０１３年全球感染店疾人数仍有１．９８亿，其中死亡人数５８．４万。拒疾的防控和治疗仍面临着严峻的挑战，而我们对追原虫生物学持性及其与宿主免疫系统关系的了解

7、仍很匿芝。拒原虫来源的巨随细胞迁移抑制因子ＭＩＦ（ＭａｃｒｏｐｈａｇｅＭｉｇｒａｔｉｏｎＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙＦａｃｔｏｒ，ＰＭＩＦ）是在炬原虫中发现的与宿主ＭＩＦ同源的蛋白质。ＭＩＦ是最早发现的ＴＴＮＦ－细胞因子，它具有活化巨幢细胞和辅助性细胞、诱导０ＵＮＯ等多种炎症因ＭＩＦ和ＰＭＩＦ的水平都显著上调。子分泌等特点。在追原虫感染之后，宿主炬原虫一为何要分泌种与宿主的细胞因子如此相似的蛋白，ＰＭＩＦ是否在宿主抗拒疾免疫一中发挥作用是个值得探究的问