约氏疟原虫红外期感染小鼠模型的建立及感染肝细胞mirna表达谱分析

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1、第二军医大学硕士学位论文约氏疟原虫红外期感染小鼠模型的建立及感染nT-幺$胞miRNA表达谱分析Theestablishmentofmurinemodelforexo—erythrocyticPlasmodiumyoeliiandanalysisofthealteredmiRNA‘IfileofinfectedhepatocytesexDresslonprofilelectea20101063答辩日期：2Q13生§旦二O一三年五月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工

2、作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：套la目星签字日期：砩年6月弓13学位论文使用授权书声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：塞蛆星导师签名：签字日期：邳年6月313签字日期：讪多年1月￡}13目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8—1上一—j一刚吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9一、疟疾的危害⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9二、红外期疟原虫与宿主相互作用的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．9三、宿主miRNA介导疟原虫与宿主相互作用的研究进展⋯．．11四、本课题研究内容及意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14一、材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14二、方法与步骤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l6结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．26一、转基因PyGFP虫株的构建和鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”26二、PyGFP蚊期和小鼠红外期感染模型的建立及优化⋯⋯⋯29三、感染PyGFP肝细胞miRNA表达谱的检测、验证及生物信息学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．39结论与意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．43参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．44发表论文和参加科研工作情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．49综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50丝氐痤盈塞丝皇I塑盛苤：』：凰搓型鲍建皇丛盛鎏竖鱼丝塑i丛△盘垫遥金盘摘要疟疾仍然是严重危害人类身体健康和生命安全的寄生虫疾病。疟原虫抗药性和蚊媒对杀虫剂抗性的出现和扩散使疟疾流行形势进一步恶化。目前疟疾防治迫切需要新的技术、方法和策略。防治技术突破的重要基础是需要对病原体生物学的深刻理解以及病原体与宿主相互作用的功能分子发现和应用。疟原虫生活史复杂，包括了蚊体内发育阶段(蚊期)和脊椎动物体内发育阶段，其中在脊椎动物体内又可分为肝细胞内发育阶段(红外期或肝期)和红细胞内发育阶段(红内

6、期)。疟原虫子孢子经按蚊叮咬进入脊椎动物体内，首先侵入肝实质细胞并在其中进行裂体增殖，产生的裂殖子释放入血并感染红细胞。虽然红内期是疟原虫主要致病阶段，而肝期(红外期)发育不表现明显临床症状，但是肝期是疟原虫在脊椎动物中建立感染的首要阶段。因此，阻断疟原虫对肝细胞的入侵或在其中的生长发育，就可以有效阻断感染，是新型防治技术研发的重要靶点。由于疟原虫红外期研究材料获得的限制，以往疟疾研究大多以红内期原虫为研究对象。近年来，多种新技术的开发和应用使得我们能够对疟原虫肝期发育阶段开展更为深入的研究。疟原虫与宿主相互作用及其细胞和分子机制研究，一直是疟原虫生物学研究领域的重点、热点，也是发展新的药

7、物、疫苗和疟疾防治策略的基础。同样，在肝期疟原虫与宿主相互作用中的关键性因子及其对肝期疟原虫生长发育的作用也是研究的热点。目前，相关研究进展主要集中在发现一些虫源性或宿主来源的分子及其对肝期疟原虫发育繁殖的作用。而现今生命科学研究热点之一的miRNA及其对疟原虫生长发育的影响只有少量研究报道。miRNA是一类非编码小RNA分子，长度为18．22个核苷酸，主要在转录后水平调节基因功能，广泛参与细胞增殖、分化、凋亡、信号转导