狂犬病病毒感染小鼠脊髓的mirna表达谱分析及其相互作用的初步探索

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1、硕士硕士学位论文谢琳娟狂犬狂犬病病毒感染小鼠脊髓的miRNA表病病毒达谱分析及其相互作用的初步探索感染小鼠脊髓的miRNA表达谱分谢琳娟析及其相互作用的初步探索二○一三年六月2013分类号S855.3密级UDC硕士学位论文狂犬病病毒感染小鼠脊髓的miRNA表达谱分析及其相互作用的初步探索谢琳娟学科专业预防兽医学指导教师罗廷荣教授论文答辩日期2013年5月28日学位授予日期答辩委员会主席陆芹章教授广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发

2、表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。□不保密。(请在以上相应方框内打―√‖)论文作者签名：日

3、期：指导教师签名：日期：作者联系电话：14795798661电子邮箱：xlj1329@163.com狂犬病病毒感染小鼠脊髓的miRNA表达谱分析及其相互作用的初步探索摘要狂犬病病毒（Rabiesvirus，RV）是弹状病毒科狂犬病病毒属的成员，是一类高度嗜神经性病毒，能导致所有温血动物高致死性疾病。目前狂犬病的致病机理尚未清楚，无治疗方法，只能通过加强疫苗预防予以控制，因此深入研究其致病机制，寻找新的途径来预防和治疗尤为重要。miRNA是一类内源性、长约为21-23nt的非编码蛋白的单链小分子RNA，通过与靶基因完全和不完全配对起到降解mRNA或抑制mRNA翻译的功

4、能，是一类重要的基因调节子。它在机体的基因表达调控、细胞分化、细胞凋亡及抗病毒防御中发挥着重要作用。本实验用正常和感染了狂犬病病毒GX01的小鼠脊髓组织抽提总RNA，构建SmallRNA文库并上机测序分析后，获得病毒感染前后小鼠脊髓miRNA的表达谱，其中表达上调3倍以上的有4个：miR-34a-3p、miR-155-5p、miR-223-3p和miR-223-5p；表达下调3倍以上的只有1个miR-193b-5p。对这5个差异表达的miRNA进行靶基因预测后再进行KEGGpathway分析，同时也用计算机预测并验证获得了139个新的miRNA与狂犬病病毒感染有关。

5、在此基础上，本实验还对miR-34a-3p、miR-155-5p和miR-223-3p这3个表达差异的miRNA进行了real-timeqRCR验证，结果表明，两种方法检测呈表达趋势相似的为miR-155-5p和miR-223-3p，均呈上I调趋势，但miR-34a-3p差异倍数并不相符，初步推测该结果可能与检测方法有关。本研究选取了miR-101c、miR-155和miR-223这3个差异表达的miRNA，从miRBasce中获取目的基因后，扩增包含其前体在内的miRNA初级转录物片段，构建了3个重组质粒pEGFP-C1-miR-101c、pEGFP-C1-miR

6、-155和pEGFP-C1-miR-223，并成功在BHK细胞上表达。同时探索了3个重组质粒与狂犬病病毒的相互作用，希望找出miRNA通过与病毒的哪些基因作用而发挥抗病毒功能。结果表明，3个重组质粒均能在一定程度上降低病毒滴度，抑制了病毒增殖速度。而狂犬病病毒N基因的表达在病毒感染12h和24h后无显著影响，在感染48h和72h出现不同程度的上调；狂犬病病毒N蛋白的表达则均未出现显著影响。miRNA的表达对狂犬病病毒增殖的影响及其与宿主的相互作用关系还有待进一步研究。关键词：狂犬病病毒miRNA小鼠脊髓差异表达相互作用IITHEMIRNAPROFILESANALYS

7、ISOFMURINESPINALCORDINFECTEDWITHRABIESVIRUSANDTHEPRELIMINARYSTUDYOFTHEINTERACTIONABSTRACTRabiesvirusisamemberoftheLyssavirusgenusoftheRhabdoviridaefamily.Itisahighlyneurotropicvirusthatcancausefatalinfectionsofwarm-bloodedanimals.Atpresent,thepathogenesisofrabiesvirushasnotbeenfullyu