新城疫病毒感染鸡巨噬细胞miRNA表达谱分析及gga-miRNA155的功能

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1、１０１８３分类号：Ｓ８５２．６５单位代码：研究生学号：２０１５８５２０１７密级：公开吉林大学硕士学位论文学术学位（）新城疫病毒感染鸡巨噬细胞ｍｉＲＮＡ表达谱分析及－ｍｇｇａｉＲＮＡ１５５的功能－ＴｈｅｍｉＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒｏｆｉｌｅｉｎＮＤＶｉｎｆｅｃｔｅｄａｖａｉｎｐ－ｍｍａｃｒｏｈａｅｓａｎｄｔｈｅｒｏｌｅｓｏｆａｉＲＮＡ１５５ｐｇｇｇｄｕｒｉｎｇＶｉｎｆｅｃｔｉｏｎＮＤ作者姓名：陈严玉专业：预防兽医学研究方向：动物传染病指

2、导教师：丁壮教授培养单位：动物医学学院２０１８年６月未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此。限）。否则，应承担侵权的法律责任吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明，是本人在指导教师的指导下，：所呈交学位论文独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰

3、写过的作品成果。对本。文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。．＊４学位论文作者签名：日期年ｔ月／ｔ７日新城疫病毒感染鸡巨噬细胞miRNA表达谱分析及gga-miRNA155的功能ThemiRNAexpressionprofileinNDV-infectedavainmacrophagesandtherolesofgga-miRNA155duringNDVinfection作者姓名：陈严玉专业名称：预防兽医学指导教师：丁壮教授学位类

4、别：农学硕士答辩日期：2018年6月5日中文摘要新城疫病毒感染鸡巨噬细胞miRNA表达谱分析及gga-miRNA155的功能新城疫是由新城疫病毒（Newcastlediseasevirus,NDV）强毒株引起的一种禽类急性高度接触性病毒性传染病，可感染大部分的非免疫鸟类，并可跨种传播哺乳动物。我国当前的优势型新城疫毒株为基因VII型强毒，其高致死率对全球养禽业的经济造成了严重危害。而现阶段对新城疫的防控措施主要依赖疫苗接种，在一定程度上控制了禽类感染新城疫病毒后的临床症状以及死亡现象，却无法完全控制病毒在禽类体内的

5、复制以及机体向体外排毒的现象，因此单纯的依赖疫苗免疫存在着一定的局限性。microRNA(miRNA)是一类长度为18~25nt的可以由动物、植物、病毒等多种生物体编码合成的非编码小RNA，参与组织发育、细胞分化、增殖凋亡，以及在调控病毒的基因表达、干扰病毒复制、组装、释放等环节都发挥着重要的作用。本文通过高通量技术分析了鸡巨噬细胞感染新城疫强、弱毒后的miRNA表达谱，对筛选后的众多差异miRNA的表达量进行了荧光定量鉴定，并利用软件对差异miRNA进行了功能性分析，为今后研究新城疫病毒与miRNA之间的相互作用

6、奠定了一定的基础。根据相关的文献和实验结果以及这次的高通量数据，选取了miRNA155作为研究对象，研究其在新城疫病毒感染鸡巨噬细胞过程中对病毒在细胞中复制的作用，并利用相关软件对miRNA155的靶基因和功能进行了预测和分析。研究分为以下几个部分：1．新城疫病毒感染鸡巨噬细胞后的miRNA表达谱分析用MOI=2剂量的新城疫强（NA-1）、弱(LaSota)毒株分别感染鸡巨噬细胞（HD11），在感染后24h、48h分别收集细胞，并设立空白对照组。用Tripure提取总RNA，对总RNA进行质量检测评估，选取质量合格

7、的样品进行高通量测I序。对不同毒株在同一时间点以及同一毒株在不同时间点感染细胞后的miRNA表达谱进行分析（pvalue<0.01，信号值>100，差异值

8、Log2

9、>2），为下一步鉴定差异miRNA做准备。结果显示NA-1毒株感染HD11细胞24h后产生了2227种miRNA，感染48h后产生了1954种miRNA。LaSota毒株感染HD11细胞24h后产生了1950种miRNA，感染48h后产生了1914种miRNA。2．差异miRNA的表达量分析比对感染组样品与未感染组样品细胞内的miRNA，对差异miRN

10、A进行筛选和分析。发现与未感染组相比感染NA-1的细胞在24h和48h分别产生了233和263种差异miRNA，有122个miRNA是在24h和48h都持续产生的。而感染Lasota后在24h和48h分别产生了158和153种差异miRNA，其中有35个miRNA是在感染后24h和48h都持续产生的。另外有18个miRNA是在不同毒株以及不同时间点感染后都持