骨髓间充质干细胞在免疫性血小板减少症发病机制中的作用研宄

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1、中因刮等獻博±研究生学位论文Ｖ纖北京协和医学院研究生院学校代码：１佩２３学号：８２０１１０１４０１４博±学位论文骨髓间充质干细胞在免疫性血小板减少症发病机制中的作用研究所院：血液学研巧所姓名；张冬雷指导教师：杨仁池导师小姐；中法实验室沮学科专业；内科学研巧方向：ＩＴＰ发病机制研巧完成日期：２０１５年５月目录１课题：间充质干细胞在慢性原发免疫性血小板减少症中的作用硏究中：摘要１英文摘要３前Ｓ５材料与方７

2、结２０Ｓ職２９３２结论参考文献３３课题２－７在原发免：ＩＬ疫性血小板减少症中的作用研巧中文摘要３９英文摘要４０前Ｈ４２＃料与方法４４，结果５２－ｉｆｉ＾５９微６１参考文献拍一综述间充质干细胞的免疫学调节作用及其与自身免疫性疾病的关系６８综述二ＩＬ－７８９在免疫系统中的作用及与自身免疫性疾病的关系一附录英文缩略语表１０７附录二在学期间发表文章１１１鎌１１３中国医学科学院北京协和

3、医学院博±研巧生学位论文课题１：间充质干细胞在慢性原发免疫性血小板减少症中的作用研究摘要一背景：原发免疫性血小板减少症（ｐｒｉｍａｒｉｍｍｕｎｅｔｈｒｏｍｂｏｃｔｏｅｎｉａ打Ｐ）是类由ｙｙｐ，于自身免疫导致的血小板破坏増加、血小板生成受损的疾病。由于自身免疫耐受的打破，从而导致针对血小板！＾及巨核细施的体液免疫和细胞免疫是慢性打Ｐ的主要ＭＳＣ一发病机制。间充质干细胞（Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｄｌｓ，ｓ是类能够在自身免疫）耐受中发挥免疫调节功能的细胞

4、群体，在多种自身免疫性疾病中有报道骨髓（ＢＭ）－ＭＳＣｓ的异常生物学持征和免疫学特性。－目的－ＭＳＣ：本研巧旨在比较研巧慢性打Ｐ患者ＢＭＭＳＣｓ和正常对照ＢＭｓ生物学特性及功能的差异－ＭＳＣｓ是否存在异常提供实验基础，为探讨慢性ＩＴＰ患者ＢＭ及理论依据，亦为慢性打Ｐ的发病机制研究探讨新思路。方法－；（１）采用贴壁、传代培养的方法从慢性打Ｐ患者和正常人骨髓姐织中获取相对纯化的ＭＳＣｓ，除了采用普通培养基培养外，还设立了添加ｂＦＧＦ、ＥＧＦ和打Ｓ这Ｈ种额外添加物（ａｄｄ）－ｉｔ

5、ｉｏｎｓｕｌｅｍｅｎｔｓＡＳ）（２ＭＳＣｓ的ｐｐ，；倒置显微镜观察ＢＭ形态特征（３）－ＭＳＣｓ表面标志（４）；流式细胞仪检测培养的ＢＭ；定向诱导－ＭＳＣｓ向赌肪细胞和成骨细胞分化ＢＭ，进行相应染色，比较成脂、成骨的分化潜－ＭＳＣ能；（５）测定ＢＭｓ增殖能为并绘制生长曲线；（６）流式细胞仪方法检测ＢＭ－７－ＭＳＣｓ细胞周期及细胞调亡）ＭＭＳＣｓ与ＰＢＭＣｓ）；（建立Ｂ外周单个核细胞（－－共培养体系，比较研究ＢＭＭＳＣｓ对ＰＨＡ活化的ＰＢＭＣｓ细胞的増殖、分泌ＴＮＦｏｕＩＦＮ－和

6、正－－研ｙ１０的影响；（８）建立ＢＭＭＳＣｓ与ＣＤ４＋Ｔ淋己细胞共培养体系，究ＢＭ－ＭＳＣｓ对ＣＤ４＋Ｔ细胞向ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７１０Ｗ调节性Ｔ细施的分化的能力。（结巧；１）成功培养并获取高纯度的慢性ＦＴＰ患者骨髓间充质干细胞２）；（采用普－通培养基培养－ＳＣｓ存在形态学差异正，慢性打Ｐ患者ＢＭＭＳＣｓ与正常ＢＭＭ，－常ＢＭＳＣｓ细胞体积小－Ｍ、纤细、呈长梭形，规则排列生长打Ｐ患者ＢＭＭＳＣｓ；细胞扁平且体积较大，呈短梭形、多角形、不规则形，边缘不整齐。ＡＳ能够改善

7、ＩＴＰ患－－者ＢＭＭＳＣｓ形态异常，与正常ＢＭＭＳＣｓ无明显差别。（３）打Ｐ患者－ＢＭＭＳＣｓ与正常对照ＢＭ－ＭＳＣｓ均表达ＣＤ７３、ＣＤ１０５和ＣＤ９０，均不表达造血细１中国医学科学院北京协和医学院博±研究生学位论文ＣＤ３４、ＣＤ４５ＣＤＵｂ、ＣＤ１４ＣＤ１９。（４）ＩＴＰＢＭ－ＭＳＣ胞标志，不表达和患者ｓ分－ＭＳＣｓ相比未见明显差异５）ＩＴＰ患者化为脂肪细胞和成骨细胞能为与正常ＢＭ。（－ＢＭ－ＭＳＣｓ细胞调亡水平明显高于正常对照。ＡＳ处理能够减少Ｂ

8、ＭＭＳＣｓ的调亡水？ＩＴＰＢＭ－平，此时患者同正常对照无明显差异。（７）ｍ患者ＭＳＣｓＷ剂量依赖的方式抑制正常来源ＰＢＭＣｓ増殖－Ｍｓ，但与正常ＢＭＳＣ相比能力下降。ＩＴＰ患者－－ＢＭＭＳＣｓ抑制ＰＢＭＣｓＮ－、ＴＮＦ－ａＰＢＭＣ正１０对ＩＦＹ的分泌，但是促进ｓ分泌的能－ＢＭ－Ｄ４＋力相比正常ＢＭＭＳＣｓ下降。（８）打Ｐ患者ＭＳＣｓ诱导正常来源ＣＴ细胞分－ＭＳＣｓ相比降低化为Ｔｒｅｇ的能力与正常ＢＭ。－ＭＳＣｓ増殖能力受损形