CD4+CD25+调节性T细胞在夏氏疟原虫感染中调控作用的实验研究

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1、·英文缩略语·9中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的

2、知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：：釜丞指导教师签名：盗盈毽坠日·中文论著摘要·CD4+CD25+调节性T细胞在夏氏疟原虫感染中调控作用的实验研究实验目的疟疾是疟原虫通过媒介昆虫蚊传播的人类最为严重的寄生原虫感染性疾病。世界上100多个国家为疟疾

3、流行区，约22亿人口受到疟疾的威胁，每年有300,---500万疟疾临床病例，病死人数高达110"270万。《世界疫苗与疫苗接种状况报告》指出，当今人类迫切需要针对艾滋病、结核和疟疾的疫苗。因此，研制开发有效的疟疾疫苗是当今人类亟待解决的重点课题。而疟原虫感染宿主机体应答的免疫学、分子生物学等综合基础研究是其必需的前提基础。鼠疟研究已经证实，红内期保护性免疫应答需要CD4+T细胞和抗体的共同参与，Thl．Th2连续活化是确保保护性免疫效应发挥的关键。IFN．Y在Thl的建立和维持上发挥重要的作用，以往的文献显示Thl应答对抵抗鼠控制红内期疟原

4、虫至关重要。IFN-),作为具有重要免疫调节功能的Thl型细胞因子，可显著活化巨噬细胞等多种免疫细胞，而由巨噬细胞分泌的非特异性免疫效应分子NO在抗细菌等多种病原生物感染过程中介导了宿主的免疫防御作用。CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)是天然存在的具有独特调节功能的细胞亚群。自1995年Sakaguchi等首次报道后即引起广泛关注。区别于传统的CD4+Thl／Th2细胞，Tregs特异地表达叉状头／翅膀状螺旋转录因子(ForkheadboxP3，Foxp3)和表面分子CD25，细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CytotoxicTlym

5、phocyteassociatedantigen4，CTLA．4)和糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体(Glucocorticoid．inducedtumor,GITR)。其中，Foxp3对Tregs的发育具有关键作用；CD25、CTLA．4和GITR分子与Tregs功能的发挥密切相关。体内、外试验均已显示，Tregs具有广泛的免疫抑制性。近期研究显示，消除Tregs能够保护小鼠免于致死型约氏疟原虫17XL株(Plasmo讲umyoeliil7XL，P．yoelii17XL)的攻击，这种保护性作用与特异性T细胞应答有关，提示Tregs在疟疾感染过

6、程中发挥免疫抑制作用。我们前期的研究发现，在P．yoelii17XL感染早期，Tregs的参与可能是导致BALB／c小鼠未能建立有效的Thl型细胞免疫应答的相关机制之一。与约氏疟原虫感染过程不同，BALB／c和DBA／2小鼠对致死型夏氏疟原虫AS株(PlasmodiumchabaudiAS，P以chabaudiAS)感染呈现截然相反的结局。因此，为充分了解Tregs在疟疾感染过程中的活化特点及与感染进程的相互关系，本实验以PLchabaudiAS分别感染BALB／c和DBA／2小鼠，以流式细胞术检测脾细胞悬液中Tregs百分含量；ELISA测

7、定脾细胞培养上清IFN吖和IL一4水平，以期探讨Tregs在疟疾感染中的调控作用。实验材料与方法BALB／c和DBA／2小鼠经腹腔感染lxl06P．c．chabaudiAS寄生的红细胞。制备薄血膜，Giemsa染色，镜检计数红细胞感染率。动态观察小鼠生存率。分别在感染前和感染后第1d、3d、5d、8d、10d、1ld、12d和15d收集小鼠脾细胞，1xlOT／m1个细胞接种到24孔板，含lO％dx牛血清1640、5％C02、37℃条件下培养48h后收集上清，待IFN吖和IL一4检测。流式细胞仪专用染色管预先加入抗Fe丫III／II受体抗体2“

8、1，取新鲜制备的1x107／ml脾细胞悬液0．1ml，再加入抗CD4．FITC单抗和抗CD25一PE单抗各0．21xg。以流式细胞术检测脾细胞悬液中Tregs百分含