约氏疟原虫来源mif同源分子对小鼠免疫系统功能调节的探索

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1、北京协和医学院硕1.研究牟学缒论文硕士学位论文学校代码:10023学号:$2009243约氏疟原虫来源MIF同源分子对小鼠免疫系统功能调节的探索所姓指导导师学科研究完成院名教师小组专业方向日期:北京协和医学院基础学院:罗茗月:王恒:许雪梅、宋国兴:病原生物学:分子寄生虫学和分子免疫学:2012年4月北京协和医学院硕lj研究生学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯5实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯151.PyMIF重组蛋白纯化及去内毒素⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.152.细胞学实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一183.免疫学检测方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.234.化学检测方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..24原虫来源的MIF同源分子对小鼠免疫系统功能调节的探索⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26第一部分体外实验结果⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33第二部分体内实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..50附录:本论文所用的英文缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..55致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯56北京协和医学院硕。Ij研究生学位论文III11111111111111111111111111111111111111IY2123417约氏疟原虫来源MIF同源分子对小鼠免疫系统功能调节的探索罗茗月(北京协和医学院,100005北京)中文摘要疟疾是世界上最严重的传染性疾病之一,2010年全球感染疟疾的人数仍达2.16亿,死亡人数约为65万。疟疾的肆虐不仅威胁疫区人群的健康和生存质量,也给这些地区的发展中国家带来巨大的经济损失和社会压力。在人类

5、抗击疟疾的战斗中,对疟原虫生物学特性的了解无疑是一个至关重要的环节。疟疾与其他大多数感染性疾病一样,需要通过免疫效应机制对其控制和消除,疟原虫免疫抑制导致免疫逃逸和过强的炎症反应引起脑疟等免疫病理损伤是这一疾病的突出特征。但目前对于疟原虫如何调节宿主免疫系统的机制知之甚少。哺乳动物巨噬细胞迁移抑制因子(MigrationInhibitoryFactor,MIF)是一种具有多种生物学活性的细胞因子,与许多感染性疾病和免疫相关疾病相关,且在疟疾感染病理、特别是疟疾感染导致的贫血中发挥了重要作用。目前已有四种疟原虫来源MIF(Plasmodi

6、umdedvedMIF,pMIF)分子被报道:P扫lciparumMIF(PJMIF),P.bergheiMIF(PbMIF),P.vivaxMIF(PvMIF)和P.yoeliiMIF(PyMIF)。pMIF被证明与宿主MIF在高级结构和功能上有惊人的一致性。现在已有多个研究小组在探索pMIF分子的功能,体外实验证明宿主巨噬细胞是其靶细胞,提示这些虫源MIF分子能够调节宿主免疫细胞。但是pMIF对机体详细的免疫调节机理还没有明确结论。本论文通过体外实验和体内实验两部分探索约氏疟原虫PyMIF重组蛋白在宿主免疫系统可能的调节靶点。DC作

7、为能够激活初始T细胞的抗原递呈细胞,在疟疾抗感染免疫过程中发挥了很重要的作用。本实验室前期做了大量工作探索pMIF对DC的功能影响,发现PyMIF.-]下调DC表面TLR4分子表达,且诱导与DC共孵育后CD8+T细胞的CD69表达下降。本论文在此基础上,继续探索了PyMIF对骨髓来源BM-DC、CD4+T细胞和全脾细胞的作用。在体外实验中,未发现PyMIF可以影响BM-DC分泌IL一10;f至PyMIF作用后的BM.DC与CD4+T细胞共培养,未见T细胞表面CD69分子表达署flIL一2分泌有改变:未发现其可以直接调节CD4+T细胞活化

8、:PyMIF作用后未见CD4+T细胞CD69表达和IL.2分泌有改变;未发现其可以调节全脾细胞向Thl或调节性T细胞分化。因此,我们认为在本研究中,PyMIF重组蛋白在体外对宿主的骨髓来源树突状细胞分泌IL

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