玉米秸秆低温降解菌剂降解效果的研究

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分类号Ｓ５１３学校代码１０１２９ＵＤＣ６３３学号２０１２２０２０１７硕±学位论文Ｖ！＞．玉米稳巧化温降解菌剂峰解效果的研究Ｅｆｆｅｃｔａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｏｒｎｓｔａｌｋｓｄｅｇｒａｄａｂ，ｅｍｉｃｒｏｂ的ａｔｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ申请人：高琳学科口类：农学学科专业；作物殺培学与耕作学研究方向：作物生理生态指导教师：高聚林教授论文提交日期二〇－五年六月： 内蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研巧成果。据我所知，餘了文中特别加标法和致谢的，地方外，论文中不包括其他人己经发表或撰写过的研究成果也不包一括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我间工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说．明并表示斑＇意。一切相关责任申请擎位论文与资料若有不实之处，本人承担。论文作者签名；而棘日期；測内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授奴书目本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定，Ｐ；研究化在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属巧蒙古农业大学。本人保祀毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙＇＇古农业大学，通讯作者单位亦著名为内蒙古农业，且导师为通讯作者大学。学校有权保留并向国家有关部口或化构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被登阅和借阅。学校可Ｗ公布学位论文的全部或部）。分内容（保密内容除外，采用影印、缩印或其他手段保存论文讫文作者签名：也棘＇指导教师签名；日期訓ｔ、ＩＶ；（／ 摘要梧轩还田是提高作物稻巧利用效率、提高±壤肥力、改变±壌微环境的有效方式，但由于其自身结构、温度等原因，自然条件下降解速度慢，造成了资源的浪费。本文对己筛选出的降解玉米程巧的复合菌系的降解效果进行研巧，为研巧北方低温降解稻巧的生物制剂提供技术支撑。主要研巧结果如下；’在ｌＯＣ条件下，对已保存的３５个复合菌系，进行复筛、传代的稳定性、稻轩－、－－降解效果的测定，选出３个复合菌系，编号为ＧＦＳ７２ＧＦＳ１８、ＧＦＳ７７。选出的Ｈ株在液态条件下对其生长特性和降解效果进行测定’Ｃ：在ｌＯ条件下，Ｈ株复合菌系的生长曲线在接菌后直接进入对数期；ｐＨ值在培养巧期迅速下降，随ＦＰＡ后稳定在７．２左右、Ｃ、Ｃ、Ｃ；ｉｘｂ酶活在添加菌液后均先升高，培养后期下降，ＧＦ－Ｓ７２最高０－酶活分别为．８２、１．４１、１．巧、１．巧ＩＵ，ＧＦＳ１８最高酶活分别为０．８２、－－１．３１、１．３５、１．３５ＩＵ；ＧＦＳ７７最嵩酶活分别为０．８０、１．２３、１．２６、１．３２ＩＵＧＦＳ７２、：ＧＦ－Ｓ１８、ＧＦ－Ｓ７７养培１５ｄ降解率分别为２５．６０％、２１．２０％、２１．４１％，湿著高于ＣＫ；ＧＦ－Ｓ７２－－、ＧＦＳ１８、ＧＦ７７、ＣＫ纤维素残余量分别从培养前的０．４５ｇ降解到０．３２、０．３２、０．３３、０．３９ｇ半纤维素残余量分别从０．２７降解到０．１７、０１９、、．．０．１８０２０ｇ；；ｇ木质素残余量分别从化０９ｇ降解到０．０６、化０５、０．０６、化０８ｇ，其中纤维素、木质素残余量显著离于ＣＫ。－Ｓ７２－－探讨其中两组玉米稳轩低温降解复合茜系ＧＦ、ＧＦＳ１８、ＧＦＳ７７接种于主’Ｃ条件下Ｆ－壌模拟还田梧轩的促腐效果。结果表明：在ｌＯ，施加复合剂ＧＳ７２、ＧＦ－Ｓ－１８、ＧＦＳ７７提高玉米梧轩的降解效果。４５ｄ降解率分别为５１．５０％、３７．５９％、〇３４ＣＫ１－Ｓ７２－１－Ｓ７７．７４／〇，显著４５ｄＧＦ、ＧＦＳ８、ＧＦ高于；纤维素残余量分别从培养．４４到１．、．、ＵＯ．．、前的２ｇ降解１２１３５ｇ，半纤维素残余量分别从１．３２ｇ降解到０７２、０８７０．８２ｇ，木质素残余量分别从化４２化２７、０．３１、０．２９显著商于ＣＫ１。腐ｇ降解到ｇｇｇ，－殖质碳组成、±壤酶活均髙于未添加复合菌系的主壤。因此，复合菌系ＧＦＳ７２和－－ＧＦＳ１８是具有开发潜力的复合菌系。利用ＰＣＲＤＧＧＥ技术研巧±微生物多样性，结果表明，施加枯巧复合菌剂的±壤ＤＮＡ丰富度和Ｓｈａｎｎｏｎ指数商于ＣＫ０（原始±巧）、ＣＫ１（不加茜）。通过切胶回收条带、连接转化及测序分析后，主要包括＂＂变形菌厚壁菌｜］（ｆＶｍｆｃｗｔｅｓ）、拟杆菌｜］（＆，ｃｔｅｒｅ＞Ｗｅｔｏ）。’关键词ＣＣＲ－ＤＧＧＥ：玉米釉轩；低温（ｌＯ），夏合菌剂；Ｐ； Ｅｆｆｅｃｔａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｏｍｓｔａ化ｓｄｅｇｎｄａｂｌｅｍｉｃｒｏｂｅｓａｔｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅＡｂｓｔｒａｃｔＳｔｒａｗｉｓａｍｏｒｅｅｆｉｃｉｅｎｔｕｓｅｏｆｃｒｏｐｒｅｓｉｄｕｅｓ，ｉｍｐｒｏｖｅｓｏｉｌｆｅｒｔｉｌｉｔｙ，ｓｏｉｌｍ－ｗａｔｔｔｏｃｈａｎｅ化ｅｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｂｕｂｅｃａｕｓｅｏｆｉｔｓｓｔｒｕｃｔｕｒｅｔｅｍｅｒａｔｕｒｅｉｃｒｏｅｆｅｃｔｉｖｅｙ，，ｐｇａｎｄｏｔｈｅｒｆａｃｔｏｒｓｄｅｒａｄｅｔｈｅ打ａｔｕｒａｌＣＯ打ｄｉｔｉｏ打ｓｏｆｓｌｏｗｒｅｓｕｌｔｉｎｉ打ａｗａｓｔｅｏｆｒｅｓｏｕｒｃｅｓ．ｇ，ｇＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｈａｓｂｅｅｎｓｅ；气ｃｔｅｄｆｏｒ化ｅｄｅｇｒａｄａｔｉｏ打ｏｆｃｏｍｓｔｏｖｅｒｃｏｍｐｌｅｘｓｔｒａｉｎｓｓｔｕｄｉｅｄ，ｆｏｒｔｈｅｏｆｂｏｌｏｉｃａｌａｅ打ｔｓｉ打打ｏｒｔｈｅｒｎｄｅｒａｄａｔｉｏｎｏｆｓｔｒａｗ化ｒｏｖｉｄｅｔｅｃｈｎｉｃａｌｉｇｇｇｐｓｕｏｒｔｈｅｍｓｉｎｆｉｎｄｉｎｓａｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ：ｐｐ．ＴｇＡｔ１０Ｖｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｓａｖｅｄ３５ｃｏｍｐｌｅｘｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｒｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，ｐａｓｓａｇｅｏｆｂ－ｓｔａｉｌｉｔｅａｓｕｒｅｄｄｅｒａｄａｔｉｏｎｏｆｓｔｒａｗｅｌｅｃｔ也ｒｅｅｃｏｍｏｓｉ化ｓｔｒａｉｎｓｎｕｍｂ巧ｅｄＧＦＳ７２，义ｍｇ，ｐ，－Ｓ？ＧＦ１８ＧＦＳ７７．，＊巨ｌｅｃｔｅｆｔｈｒｅｅｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅＣＯ打ｄｉｔｉｏｎｓｏｆｉｔｓｌｉｕｉｄｒｏｗｔｈｑｇｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｄｅｒａｄａｔｉｏ打ｅｆｅｃｔｓ：ａｔ１０ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｔｈｒｅｅｓｔｒａｉ打ｓｏｆｔｈｅｒｏｗｔｈｇ，ｇｃｕｒｖｅｃｏｍｌｅｘｓｔｒａｉｎｓａｆｔｅｒｉ打ｏｃｕｌａｔｉｏ打ｄｉｒｅｃｔｌｙｉ打ｔｏｔｈｅｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃｈａｓｅＭｖａｌｕｅｐｐ；ｐｄｅｃｒｅａｓｅｄｒａｉｄｌｉｎｔｈｅｅａｒｌｓｔａｅｏｆｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｔｈｅｎｓｔａｂｉｌｉｚｅｄａｔａｒｏｕｎｄ７．２ＦＰＡＣｌｐｙｙｇ，；，ＣＸ，Ｃｂｅｎｚｙｍｅｓｏｆｖｉａｂｌｅｂａｃｔｅｒｉａｗｅｒｅａｄｄｅｄａｆｔｅｒｔｈｅｉｎｉｔｉａｌｉ订ｃｒｅａｓｅ，ｔｒａｉｎｌａｔｅ化１１，－－Ｓ７２ｈｉｅｓｔａｃｔｖｔｗｅｒｅ０．８２３３１．２５ｌＵＧＦＳ１ｈｉｇｈｅｓｔａｃｔｉｖＵｗｅｒｅＧＦｇｈｉｉｙ，，，８ｙ－－１．３３５１Ｆｔｔｗｅｒｅ０１１１．３ＩＳ７２０．８２１．１５ＬＵＳ７７ｈｉｈｅｓｔａｃｉｖｉ．８０？巧．２６２Ｕ，３Ｇ，，，ＧＦ，，，；ｇｙ；－－ｒｉｄｄｅｒａ．ＧＦＳ１８ＦＳ７７ｔａｎｉｎ１５ａｄｔｉｏｎｒａｔｅｓｅｒｅ２５６０％２１．２０％２１ｗ．４１％，Ｇｇｇ，，，■－－ｓ化ａｎＣＫ－１７７ｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｉＧＦＳ７２ＧＦＳ８，ＧＦＣＫｒｅｓｉｄｕａｌａｍｏｕｎｔｏｆｃｅｌｌｕｌｏｓｅｇ；，，ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｗｅｒｅｃ山ｔｕｒｅｄｆｒｏｍ０．４５ｇａｇｏｔｏ０＊３２，０．３２，０．３３，０．３９ｇ；ｈｅｍｉｃｅｌｉｕｌｏｓｅＳｕｒｅｓｉｄｕａｌｄｅｒａｄａｔｉｏｎｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌｙｆｒｏｍ０．２７ｇｔｏ０．１７０．１９０．１８０．２０ｇｒｅｓｉｄｕａｌｌｉｎｉｎｇｐ，，；，ｇｄｅｒａｄａｔｉｏｎｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌｆｒｏｍ０ｔｏ．．０９００６０．０５０．０６０．０８ｗｈｅｒｅｉｎｔｈｌｌｕｌｏｓｅ，ｅｃｅ，ｇ，ｐｙｇ，，ｇ，ｌｉｎｉ打ｒｅｓｉｄｕｅｗａｓｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｈｅｒｔｈａｎＣＫ．ｇｇｈｇ－ｏｆ－Ｔｗｏｃｏｍｓｔ：ｏｖｅｒｔｏｅｘｐｌｏｒｅｃｏｍｐｌｅｘｃｒｙｏｇｅｎｉｃｄｅｇｒａｄｉｎｇｓｔｒａｉ打ｓＧＦＳ７２ＧＦＳ１８，〇ｓｅｅｄｅｄｈｉｓｏｉｌｓｉｍｕｌａｔｉｏｎＳｔｒａｗｒｏｔｐｒｏｍｏｔｉｎｇｅｆｅｃｔ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄ：ｕｎｄｅｒ１０Ｃ－ｔｘ－ｃｏｎｄｉｉｏｎｉｍｏｓｅｄｃｏｍｌｅｉｎａｅｎｔＧＦＳ８ＧＦＳ１５ｅｎｈａｎｃｅｄｅｒａｄａｔｉｏｎｏｆｃｏｍｓ化ｖｅｒ．，，ｐｐｇｇｇ〇－４５ｄｄｅｒａｄａｔｉｏｎｒａｔｅｓｗｅ化４４．３０／〇３４．７０％ｓｉｎｉ巧ｃａｎｔｌｉｈｅｒ化ａｎＣＫＩ４５ｄＧＦＳ８ｇ，，ｇｙｈｇ；－ｎｉｎｒｅｍａ．１ｃｅｌｌｕｌｏｓｅｈｅｍｉｃｅｌｌｕｏｓｅｌｉｉｎｉｎａｍｏｕｎｔｗａｓ１２０．７２．２ｒｅ，ｌ，ｇ，０７ＧＦＳ１５ｗｅｇｇ，ｇｇ；１．３９ｇ，０．８７ｇ，０．３Ｉｇ；ｈｕｍｕｓｃａｒｂｏｎｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｓｏｉｌｅｎｚｙｍｅｃｏｍｐｌｅｘｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒ－ｈａ打ｔｈｓｔａＳｏｃｏｍ化ａｉ打－ｔｅｓｏｉｌｗａ打ｏｄｄｅｄ．ｐｌｅｘｓｓＧＦＳ７２ａｎｄＧＦＳ１８ｉｓａｃｏｍｌｅｘｓｔｒａｉｎｓｐｈ－ａｖｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｆｂｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅ打ｔ．ＴｈｅｕｓｅｄｏｆＰＣ民ＤＧＧＥｔｅｃｈｎｉｑｕｅｏｆｓｏｉｌｍｉｃｒｏｂｉａｌｄｉｖｅｒｓｔｒｅｓｅａｒｃｒｅｓｕｉｔｓｓｈｏｗ化ａｔｂａｌｉｎａｓｏｉｌｂａｃｔｅｒｉｕｍＤＮＡｒｉｃｈｎｅｓｓａｎｄｉｙ打ｙｐｐｙｇ 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目录一１第章前言１１．１稻杆的利用现状２１田的研究进展．２枯杆的还２Ｌ．１诘巧的还田方式２２１．２稻利还田的意义２．１３．３稻轩降解原理１．３．１稻杆的主要成分３１４．３．２稻巧裕解菌的筛选１１４．３．２．降解稻轩的微生物３４１．２．２稻巧降解菌的巧选．１．４诘轩降解菌对程杆还田的影响５１．５研究的目的及意义５１６．６研巧技术路线图第二章复合菌系复筛选育６１试验材料与方法７１．１试验材料７１．１．１试验复合菌系７１．１．２碳源和培养基的配置７１２８．测定项目及方法２数据处理及统计分析用相关参数计算８３结果与分析８３．１复合菌系的滤纸崩溃试验８０３．２程巧液态发酵时的降解率１４结论１１第Ｈ章复合菌系液态发酵条件下的生长特性及降解效果１１１试验材料与方法１２１．１试验材料１２１１２．２主要试剂配制１．３试验设计１２１．４试验方法１２１１．４．１生长量巧线的测定．２１３．４．２削值变化的测定１ １．４．３酶活力测定方法１３１．５稻轩的降解率１５１．６木质纤维素残余量的测定１５２５数据处理及统计分析用相关参数计算１３结果与分析１５３．１液态发醇条件下微生物生长量的动态变化１５３．２液态发酵条件下則值的动态变化１６＿３．３液态发酵条件酶活的动态变化１７３１８．４液态发酵条件下程巧降解率的动态变化３．５液态发酵条件下福杆木质纤维素残余量的动态变化１８４结论．．．．１９第四章模拟还田方式下语轩降解菌的稻杆降解效果研究２１１材料与方法２１１１．１试验材料２１．１．１试验菌剂２１１．１．２玉米賴杆２１１．１．３止壤２１１．１．４培养基２１１．２试验设计２１１．３样品采集２２１．４测定方法２２１．４．１±壤培养效果２２１．２２．４１．１诘轩的降解率１．４．１．２木质纤维素残余量的测定２２１．４２２．１．３主壤腐殖质碳的测定１．４．１．４±壌酶活的测定２２２２１．４．２止巧微生物多样性１．．２２．４．２．１主壤微生物区系组成多样性２３１．４．２．２ＤＧＧＥ３结果与分析２５３．１复合菌系对玉米稻杆降解率的影响２５３．２复合菌系对玉米稻轩木质纤维素组成成分的影响２６３．３复合菌系对止壌腐殖质组成的影响２６２６？？？．？？．．？３．４复合菌系对±壌酶活的影响？． ３．５±壌微生物遗传多样性分析２９３．５．１主壌微生物数量的变化２９３．５．２±壤ＤＮＡ提取３０３．５．３±壌细菌ＰＣＲ产物的琼脂糖凝胶电泳定性检测３１３．乱４ＤＧＧＥ图谱分析３１４结论３３第五章全文讨论与结论３５致谢３７参考文献３８作者简介４２ 插图和附表清单．５１图１复合菌系的０Ｄ值１２．图２复合菌系的地值１５３．图３复合菌系的酶活的变化１６７４．图４复合菌系降解率的变化１５．图５复合菌系木质舞维素残余量的变化１８６．图６复合菌系对玉米稻杆降解率的影响（１０Ｃ）２５７２６．图７复合菌系对玉米稻巧的木质纤维素残余量的影响８２８．图８复合菌系对±壤酶活的影响９．图９止壤微生物数量的测定２９１０．图１０止壌部分样品ＤＮＡ凝胶电泳图３０１１．图１１止壤部分样品细菌ＰＣＲ电泳图３０１１．图１２±壤细菌１６ＳｒＤＮＡＤＧＧＥ聚类图３２１２７．表１复合菌系来源与编号３２８１．表滤纸断裂情况１４１０．表３稻轩液态发酵时的降解率１５．表４葡萄糖标准溶液光密度测定流程１３３１６．表５ＦＰＡ酶活的测定流程１１７．表６ＣＸ酶活的测定流程１４１８．表７主壤微生物数量测定方法２２１９２３．表８变性凝胶溶液的配制２化表９复合菌系对培养巧ｄ时止壤腐殖质组分碳的影响２３２１３１．表１０±壤细菌微生物《样性指数２２．表１１典型止壤样品细菌化ＳｒＤＮＡ比对序列特征３２ 缩略语表ＤＧＧＥｄｅｎａｌ：ｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（）变性梯度凝胶电泳ＣＭＣｓｏｄｉｕｍｃａｒｂｏｘｒｌｍｅｔｈｒｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ（）））證甲基纤维素ＰＣＲ（化ｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）聚合酶链式反应ＦＰＡ（ｆｉｌｔｅｒｐａｐｅｒａｃｔｉｖｉｔｙ）滤纸酶活Ｃｘ（ｅｎｄｏｇｌｕｃａｎａｓｅｓ）內切酶Ｃｌ（ｃｅｌｌｏｂｉｏｈｙｄｒｏｌａｓｅｓ）外切酶－＜ｕｃｏｓ－ＰｇＩｉｄａｓｅｓ）Ｐ荀萄糖昔 内蒙古农业大学硕：Ｉｔ学位论文１＿第一章前言一一作为个农业大国，我国的农作物稻杆资源居世界第，但实际利用率却相对较低，高利伟等对农作物稻杆的去向研巧表明，作物稻杆还田约占总量的２４．３％；梧轩饲用主要是作草食动物饲料，约占总量的巧．９％；程杆就地焚烧约占总量的３５．３％，其他去向所占比例为１０．５％。稻杆焚烧比例较高，不仅造成了严重的大气污染一、破坏生态平衡，也是对宝贵自然资源的种浪费。稻轩还田能高效的增加稳杆利用率，，，改善±壤理化性状增加主壌肥力刺激王壌微生物活性的増加及提高一农作物产量及品质，是种良好的处理稻巧的方式，玉米稻杆降解受到多方面因素的影响然而，在干旱、冷凉条件下，自然腐解，速度较为缓慢，大量残留未腐烂的括巧在腐解过程中会产生与作物争氮的现象严重影响下珪作物的生长。因此，利用稻巧离效降解菌剂，促进稻杆在田间短时期快速腐解。如何促进玉米稻杆田间快速腐熟还田依然是农业生，对稻杆还田至关重要产的一个大难题１．１稳巧的利用现巧一作物稻杆是各种农作物收获后的废弃产物，是地球上最丰富的生物质资源之，但却由于其复杂的纤维素结构Ｗ及自然状态下难降解等因素导致利用率低。常年Ｗ来，我国的作物稻杆用作农村燃料和发展畜牧业，但随着能源结构的调整和畜牧业的发展，农作物作为燃料和饲料的地位动摇，造成大量穂杆无法有效利用成为各级，政府关注的焦点一，因此稿杆的实用技术是项急需解决的重大课题目前农作物产量越来越高。在作物稻杆资源中，其中水稻精杆最多，可＾＾＾１，稽轩产量也増加占到稻巧总量的３１．６％，其次是玉米占到总量的２３．９％，然后是小麦，占２１．６％Ｈ大７６，作物共占．１％，因此开发和硏究作物括杆蕴含丰富的营养物质和能量在我国尤其拥有巨大开发利用潜力，前景十分广阔＾焚烧稻杆可从带来的环境巧染问题，稻轩还田不仅可＾＾＾避免，而且实现了±壤的Ｗ地养地，，增加止壌有机质含量改善了±壌团粒结构和微环境，为离产、稳产创出了新思路一。可见，稻杆还田是稻杆利用效率最髙技术。稻轩作为种能源资源是当今一世界上第四大能源，仅次于煤炭、石油和天然气，是唯可再生的能源，用稍杆蕴藏的能量发电己经得到应用并取得较好经济效益和生态效益ｆＷ。結杆是肥料资源，枯轩来源于作物，含有作物生长所需的主要元素特别是碳含量 玉米括轩低温巧麟苗剂降巧效果的研究Ｊ尤其丰富。枯巧是饲料资源，稻杆经过青胆、氨化、发醇等加工可＾ＪＬ成为很好的饲料，Ｉｆｗ例如玉米枯巧经过加工饲喂奶牛等。稻巧还田的良性效应是作物枯杆含有作物生－种完全肥料长所必需的各种矿质营养元素及有机成分，是。有研巧结果为作物稻轩ｉｙ主壤有机质含量増加到原来的ｆ２倍还田后，，速效氮増加到原来３倍；研究表明，稻轩还田后可从降低±壤容重，増加±壌孔隙度和大粒径微团聚体数量及水稳定性１６］［０但直接还田负面效应是稻杆在±壌中被微生物分解转化的时间长，未能完全腐解ｎｆｌｔｗ，大量作物残巧置于±壤表层会影响后续作物的播种质量和出芽率，还造成生产管理上的不便。稻巧还田还可能将稻杆中的病菌带入主壤，从而增加病菌的数量ｔｗ，另外，由于稻巧结构Ｗ及北方天气寒冷干燥等原因，不易降解，这使得程杆中的纤维素难Ｗ被分解利用，所Ｗ，加快稻杆在低温下腐解速度，是生产实践中提出的ｗｆｌ急切需要解决的课题。近年来，我国形成了稻轩直接还田作肥料，利用艳杆气化、热解发电，稻轩再次，洁杆青贬、氨化、盐化作饲料加工成型或做编织原料，程杆粉碎配比作食用菌基料ＰＩ１等有效利用途径。Ｗ上方法除了直接还田做肥料之外，其余的都面临着运输、劳动成本等问题，。所Ｗ农民为了自己的利益和方便，大多都焚烧稻杆，因此，程杆利用率很低，，而且是培肥改±、所Ｗ，实行作物稻杆原位还田不仅可提高稽巧的综合利用率一提高主壌肥力的顶行之有效的技术措施，还是提离农业生产的产出水平，实现农业Ｉｎｌ可持续发展的重要内容。１２．括巧还田的研究进展１．么１括轩还田方式田方式主要有直接还田和间接还田一括杆还。是直接还田，即将作物的稻轩直接、施人±壌中或覆盖于农田表面，主要方式有墙沟埋草还田留离蒂机械化返转灭蕃还田、留高巧查播还田、铺盖还田。二是间接还田技术，即将作物賴杆堆腐妪制后还田，、、包括稻杆堆腐高温堆腐稻轩腐熟剂堆腐等形式，稻杆作基料生产食用茜，再将废渣还田Ｗ及沼肥还西等１．２．２棺軒还田的意义括巧还田能提茵±壌养分。作物稻杆中含有作物生长所必需的各种矿质营养元 内蒙古农业大学硕±学位论文一，尤其富含Ｎ，种天然的肥料。稻轩还田可供应作物所需素及有机成分、Ｐ、Ｋ是要的养分，有利于作物生长发育、且可Ｗ改善±壌生态环境。洪春来等研巧表明，梧－，，有机质均有不同程度的增加由原来的４．２３％增加到４．３８４．５３％杆连续还田两年后；±壤氮素含量也明思高于清巷处理，稻巧还田可Ｗ増加±壌氮矿。李贵桐等结果表明ＰＷＷ还田后还可Ｗ提高±壌碱解氮含量，同时提高氮肥利用率。枯杆还田化量，稻杆一是提高±壤养分含量的有效途径之。一梧巧还旧可Ｗ增化上壌微生物多样性。上壌中微生物是个复杂的群体，它们Ｐ７—２８１参与±壌有化质分解，腐殖质合成，养分生成。１．２．３梧巧还田的存在问题稻杆在自巧状态下，１６周后，稻巧中难降解的纤维素和半纤维素仍未被降解。如果祐巧没脊及时分解，微生物将与作物争氮，进而影响苗期生长，并最终影响产量；ＰＷＷ还会引起作物病虫害的增加。如今很多地方在作物收割后将括轩直接粉碎还田，一，，得到定的推广翻压后腐解较快。但是由于机械化的不足和耕地地势等原因并没ｔＷ＾有发挥其优势。同时也需要增施氮肥文帮助稻轩腐烂。１．３括巧降解原理１．３．１梧轩的主要成分３０－３５％水稻，半纤维素含量约为、小麦及玉米等农作物梧杆的纤维素含量约为＾２一－１－２０２５％巧３０％约为。半从上。，木质素含量纤维素半纤维素总量占到稻杆组分枯杆细胞壁是由纤维素，使细胞紧密相连。尤其、半纤维素和木质素相互交织形成，是木质素的存在，导致了稻杆很难高效利用常温下，不会被稀酸和稀碱水解。３－４－纤维素是由许多个葡萄糖分子通过１，糖昔键连接而成的直链高分子化合物，由内切葡聚糖酶、外切纤维素，具有不溶性的刚性结构纤锥素酶是复合酶－－酶葡糖昔酶水解协同作用形成葡萄糖；半纤维素由木聚糖酶和目甘露聚糖酶、Ｐ－为ＣＣ键，，，两种酶降解为单糖和糖酸酸；木质素分子单元间多非常稳定不易水解己发现的木质素降解酶主要有木质素过氧化物酶（ＬｉＰ）、铺过氧化物酶（ＭｎＰ）和３４［１漆酶化ａｃｃａｓｅ）。Ｐｙ，分子间与分子内存在大量的氨键ＰｅｔｅｒｓｓｏｎＬ等研究表明在纤维素物质中，。。这给纤维素水解带来很大的困难因而，在自然条件下分解缓慢半纤维素是由五碳糖和六碳糖组成的多聚体。木聚糖是半纤维素的主要沮分， ４玉米程轩低溫降巧菌剂降解效果的研究＿－－－－其主链是由目Ｄ化喃型木糖残基通过目１，４糖昔键连接而成，有些半纤维素的组成成分，如阿拉伯糖、半乳聚糖在冷水中的溶解度就相当大，且由于半纤维素是一和纤维素夹杂在，起所［＾，只有当纤维素也被水解时，才可能全部水解木质素基本结构单元是苯基丙焼一，靠多种共价键连接形成种不溶性的Ｈ维网一状结构的菌分子聚合物。木质素与纤维素和半纤维素起构成细胞壁的主要成分。一木质素Ｗ—种物理屏障存在成为许多开发利用木质组织的工业化过程的个障碍３８－３９［］〇１．．３２稳巧降解窗的痛选１．３．么１降解梧轩的微生物一ｔＷ降解福杆的微生物很多，真菌、细茜和放线菌都有。般来说真菌的降解效ｔｗ率和速率远高于细菌。木质纤维素降解的优势微生物是真菌，真菌中降解最快的是担子菌。稻巧的降解效率可能与丝状真菌通过菌丝向稻巧内输送氮和金属离子同一时Ｗ程杆为碳源有关。从另方面考虑，把自然界所有微生物能吃的物质分类的话，，降解纤维素或者稻轩的微生物种类太多了枯轩将会是植物中的主要种类，也很难一全面列举所有蜂解稻杆的微生物，事实上绝大部分丝状真菌可能都能在定程度上降解稻杆。文献报道的细菌有很多，主要有梭菌属Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、纤维单胞菌属的４引Ｃｅｌｌｕｌｏｍｏｎａｓ、杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ＇高温单胞菌属Ｔｈｅｒｍｏｍｏｎｏ巧ｏｒａ等。１．３．２．２稳轩降解菌的筛选近年来在筛选新的纤维素降解菌株方面有很大进展。钱玉停采用改良的ＰＣＳ。培养基，通过定期改变传代方法，从自然环境中筛选并驯化出１细纤维素分解菌群３４．１．。半纤维素、纤维素、木质素的降解率分别为．９８％，２２７６％，５８２％试验选用该ＺＹ－２复合菌群为目标菌，筛选得到的纤维素降解复合菌群中起主导作用的是菌，且２９．５６％与原复合菌群相比，降解纤维效果更为明显，７ｄ对稻轩的降解率达到，差异４５极显著ｆ３。郭红伟从腐烂的树枝和±壤中筛选木质纤维素酶高产茜株，Ｗ稻轩为一ＰＤＡ－５Ｃ，唯源富集培养后，采用愈创木醋法进行初筛，筛选出产木质素酶真菌株然后Ｗ玉米稻杆为主要Ｃ源进行固态发酵和复筛。结果表明：第５号菌株在发酵玉米３４．９５％２０．００％。稻巧５ｄ后，使木质素的蜂解率达到最高（），粗纤维的降解率达到由于我国北方气候寒冷千燥。，低温纤维素酶与中温酶相比在应用主更具优势和潜力其在自然条件下具有较高酶活力及较高催化效率。化温环境存在着众多生物体，特 内蒙古巧业大学硕±学位论文＾别是细菌、酵母菌、单细胞藻类和真菌。因为这些生物体不需要温度调节，其内部－ｆｗｓｗ■温度与周困环境接近，但是对Ｔ低温条件下，玉米稻巧降解菌的研巧还不够完善。１．４梧巧降解菌对梧巧还田的影响ｆＷ张庆华模拟田间覆止菌种筛选方法，Ｗ稻杆腐解率为指标，建立了复筛方法，并进行了模拟田间应用效果分析。ＹＩ３、７７４、ＨＸ及ＪＩ４株菌的腐解率较富，比对照２７．０４％．．３分别提高、２９６５％、３５８％和２７．８６％；ｎ杨振兴ｔｉ在盆栽和大田条件下，研究了稻轩腐熟剂对玉米生长及其产量、玉米－ｉ±壤肥力的影响福杆腐解速率：壤微生物＾＜及。结果表明，稻巧还田时施用括杆腐熟剂对賴窩玉米产量具有明显的增产效果；采用粉碎还田配稻轩腐熟剂对玉米增产效果较整巧沟埋配稻巧腐熟剂显著；稻巧腐熟剂能够提高±壌中微生物数量、促进稻轩较快腐解，减轻和防止多量稻杆还田给作物生长带来的不利影响，同时可稳定提高±壌养分含量。‘刘爽等人在巧ｒ条件下，筛选到３株高效福杆降解真菌，在１（Ｔ２５Ｃ范围内，稻巧翻埋及覆盖还田盆体模拟实验研究表明，与ＣＫ相比，施用供试菌株后程杆的降解率显著提高。综上，对福杆降解菌剂的研巧主要集中在中髙温菌剂的研制和开发上，其在結轩原位还田过程中常受到地温低的限制，大大影响了降解效果，尤其在北方地区，其降解效率非常低，甚至在应用过程中失活。１．５硏究的目的及意义（１）从已保存的茜系中挑选出化温降解玉米诘巧的优势菌系。一（２）从挑选出的菌系中测定低温条件下結轩降解茜系降解的系列参数。（３）模拟田间低温条件下降解茜株对枯杆的降解效果。目前国内外集中研巧高溫和中低温的稽轩降解菌，对低温研究较少，因此本试’Ｃ验从己保存的菌系中挑选出低温（ｌＯ）降解玉米稻杆的优势茜系。 Ｊ玉米稳巧低温巧解苗剂降巧效果的研究１．６研究技术路线图供试苗种去复合菌的复壮与选育ｉ选出优势复合茵剂巧态发酵条件下降解恃巧１橫掛稻巧还田试验ｍＩ动苗Ｉ纤淳Ｓ秦Ｉ寡ＩＩ養露ＩＩＩＩ｜惩｜吿孽慶素解§活遷生囊養當寥ＡＩ１ＩＩＩ義ＩｉＩ義—１０—ＩＩ—ＩＩ＿＾稻杆降解苗剂综爸评价对供试菌种进行复壮与选育，选出优势的复合菌剂，测定液态发酵时的降解特一性级模拟程杆还田试验，通过系列指标对稽轩降解菌进斤综合性的评价。 内蒙古农业大学硕±学位论文１＿第二章复合菌系复筛选育对己经筛选出的菌种进行复筛和选育，根据滤纸崩溃程度、传代之间的稳定性Ｕ及降解效果选出效果好的菌种。１试验材料与方法１．１试验材料１．１．１倚龄复合菌系，编号如表１复合菌系来自内蒙古农业大学玉米中也微生物实验室。表１复合菌系来源与编号Ｔａｂｌｅ．１Ｃｏｍｐｌｅｘｓｔｒａｉｎｓｏｒｉｉｎａｎｄｎｕｍｂｅｒｇ菌窺号样品来源菌编号样品來源菌编号样品來源ＧＦ－ＳＧＦ－巧４柳树木质部ＧＦ－３腐烂树叶Ｓ８０西藏萨嗔±－－－ＧＦＳ‘ＧＦＳ４腐烂坑席；３５腐烂玉米枯杆ＧＦＳ８５扎旗腐烂树叶四川腐烂玉米枯－－ＧＦ－Ｓ６玉米田±ＧＦＳ４３巧ＧＦＳ８６食用菌下脚料＋抗席－－ＧＦ－Ｓ８腐烂葡萄ＧＦＳ４４ＧＦＳ８７玉米枯轩还田±果园±（６月份）－－ＧＦ－ＳＧＦ％０扎旗鹤子粪便ＧＦＳ８８＋１５西藏那曲草匈±树林±木拖ＧＦ－Ｓ上ＧＦ－Ｓ５５ＧＦ－Ｓ８９蜗蚁洞边±１６竹林拉萨鸡粪便－ＧＦ－Ｓ６３Ｆ－Ｓ１８控草印西藏那曲羊粪ＧＳ９０西藏日喀则草甸止－－－ＧＦＳ２０ＧＦＳ６７扎旗鸡粪便ＧＦＳ９１玉米田０－２０〇１１±层８扎旗芹菜地±（月）ＧＦ－Ｓ２３拉萨湿地污泥ＧＦ－Ｓ７２据末ＧＦ－Ｓ９４西藏昂仁±壤－ＧＦ－Ｓ３０ＧＦＳ７６玉米田王＋朽木ＧＦ－Ｓ＋湿地边柳树木质部１０８西藏那曲草甸止玉米苍－－ＧＦ－Ｓ３２牛牛粪ＧＦＳ７７羊粪ＧＦＳ＋树林主１１５麦田±烂草ＧＦ－Ｓ３３压成板ＧＦ－Ｓ７８西藏吉隆草甸±１．１．２碳源和培养基的配置１（）碳源供试碳源为玉米稽杆和滤纸。稻杆处理方法；选取当年秋收后的玉米诘杆洗净烘干剪成１ｃｍ小段灭菌备用。一，滤纸处理方法：用１％醋酸浸泡昼夜用规液检查确无淀粉后２％苏，再用打Ｏ＊１０ｃｍ。水（ＮａＨＣ，洗至中性，干燥后剪成ｌ：）冲条状 玉米稳巧低温巧巧苗剂降解效果的研．究Ｊ（２）培养基奥梅梁斯基（Ｏｍｅｌｉａｎｓｋｙ）培养基（基础液体培养基）：硫酸按ｌ．Ｏｇ、硫酸、、、、氨二巧ｌ．Ｏｇ氯化钢０．２ｇ硫酸镶０．５ｇ碳酸巧２．０ｇ蒸溜水１０００ｍｌ。１．２测定项目及方法（１）滤纸崩溃法Ｈ角瓶富集培养：在无菌条件下取３ｍｌ菌液接种到盛有３０ｍｌ奥梅梁斯基培养’Ｃ恒基的２５０ｍｌＨ角瓶中，３，摇床上震荡培养２００ｒｌＯ每个Ｈ角瓶放条滤纸条），（ｐ混培养，淘汰３ｄ内无变化的菌系。试管传代培养：将Ｈ角瓶富集培养选取出来的复合菌系１ｍｌ接种巧盛有９ｍｌ奥一一碳源且紧贴试管内壁梅梁斯基培养基的试管中，滤纸为唯，半在液面上，在恒’Ｃ条件下培养７－ｌＯｄ到新鲜的奥梅梁斯基培养基中，连续培养温培养箱ｌＯ，再转接８代：，淘汰由于不稳定而失活的复合菌系，第９代观察并记录滤纸破损程度无变化记为：滤纸液界面变薄记为（＋）；滤纸液界面变透明记为（＋＋）；滤纸液界面断裂记为（＋＋＋）；培养液淡黄色记为（＋＋＋＋）；培养液颜色加深且液面下滤纸蓬松记为（＋＋＋＋＋）。（２）福杆培养法：选取传代培养中优秀的菌系（４ｄ内出现变化処行测定降解率试验，加入３０ｍｌ奥梅梁斯基培养基于２５０ｍｌＨ角瓶中，然后加入处理过的稻杆（剪成１ｃｍ小段）Ｉｇ，１２ｒＣ髙压灭菌２０ｍｉｎ。么后在无菌条件下加入３ｍｌ菌液，在恒温’，ｌＯＣ，３次重复３培养箱培养温度为每个菌种，从第１０代开始培养，连续培养代，每代测其失重率，根据失重率淘汰部分效果不好的菌系。失重率Ｙ＝（Ｗ－Ｗ）／Ｗｘｌ〇〇％式中：Ｙ表示稻杆降解率（％）；Ｗ表示接〇｜〇〇种前培养基中的精杆重（ｇ）；Ｗｉ表示烘干后降解剩余物重（ｇ）。２数据处理及统计分析用相关参数计算ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ２０１０进行数据统计分析及作图。３结果与分析３．１复含菌系的滤纸崩演试验复合菌系在Ｈ角瓶富集培养时，大部分菌系２４小时内出现断裂，进而成不规则３ｄ，３３ｄ形状，后大部分培养液成糊状淘汰个内无变化的菌系，其余的进行试管传８代培养，目的是考察稳定性和降解效果，淘汰掉５个在转接到代Ｗ内出现退化现９９，象的菌系，其余进行第代培养，表２是复合菌系第代滤纸随天数断裂情况从表２中可看出，部分菌系第？ｄ时滤纸液界面开始变薄，第５ｄ时断裂；１５ｄ时出现 内蒙古巧业大学硕±学位论文液界面下滤纸蓬松。表２巧纸巧裂巧巧Ｔａｂ．ｌｅ２Ｐａｐｅｒｂｒｅａｋａｇｅ编号３４５６７８９１５—ＣＦＳ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋４－Ｈ－Ｈ－３＋＋－ＧＦ＋－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋４＋＋Ｓ１６＋４ＧＦ－Ｓ车＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋１８——ＧＦ５２０——＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－－－ＧＦＳ２３－＿＋＋＋＋＋４Ｈ＋＋＋＋－Ｈ－Ｈ－＋Ｈ＋＋－ＧＦＳ３０－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＧＦ－Ｓ＋＋＋＋＋－ｆ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋３２＋＋＋ＧＦ－Ｓ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋Ｋｆ３３＋－—ＧＦＳ３４—＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋Ｇ—＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－Ｈ－ＨＨ－ＦＳ３日＋＋—ＧＦ５＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋４．＋Ｈ－Ｈ－４３＋＋ＧＦ－Ｓ４４＋＋＋＋４＊＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－－－－－Ｎ－ｎ＋＋＋＋＋＋＋＋＋Ｈ１ＧＦＳ６７４ｉＧＦ－Ｓ７２＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＧＦ－Ｓ７６－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－－－－－ＧＦＳ７７＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＨＨ＋＋＋＋Ｈ４－Ｈ－－－－－－＋＋＋－ＭＨ－－Ｈ－－＋＋＋＋ＧＦＳ７８ｆ＋ＨＨ．－－－－－ＧＦＳ８－＋＋＋＋＋４＋ＨＨ＋＋＋＋＋＋＋＋０－■＂＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋？４ＧＦＳ８５＋＋１ＭＩＧＦ－Ｓ８－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋６－－－ＧＦ—Ｓ８－＋＋＋＋ＨＨ＋＋＋－Ｈ－Ｈ－＋＋＋＋７－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋４＊＋＋４ＨｆＧＦＳ８８＋＋？ＧＦ—Ｓ８９牛＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋４Ｈ－Ｈ－－ＧＦＳ９０＋＋＋－ｆ＋＋＋＋＋＋＋＋４＋＋＋＋＋＋４４＋＋４－—＋＋＋＋＋４－Ｈ＋＋＋４＋＋＋＋＋４＊ＧＦＳ９Ｉ４ＩＩＭ－ＧＦＳ———＋＋＋＋＋＋＋９４ＧＦ－Ｓ５＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋１１ Ｏ玉米巧奸低温巧解菌剂降解效果的研究Ｊ３．２稽巧液态发辞时的降解率表３是复合菌系Ｗ玉米稻轩为唯一碳源连续培养Ｈ代的降解率，选取降解率高于－－－２０％且稳定性较好的复合菌系，其中降解率大于２０％的菌系有ＧＦＳ１６、ＧＦＳ１８、ＧＦＳ７２、－２０ＧＦＳ７７．３％２０．９８％、２２．９４％、２３．０６％ＣＫ１２．５６％，其降解率分别为、，均和（）相比－－－Ｈ代复合菌系的降解情况可知，复合菌ＧＦＳ１８、ＧＦＳ７２、ＧＦＳ７７差异性显著；比较Ｈ代之间差异性不显著，说明降解性能稳定。表３括巧巧态发時时的巧巧率Ｔａｂｌｅ．３Ｔｈｅｄｅｒａｄａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｓｔｒａｗｓｉｎｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｌｉｕｉｄｇｑ编号９ＦｌＯＦＩＩＦ平均值ＧＦ－Ｓ＋３１９．５０％ａ１５．８９％ｂ１６．１２％ａｂ１７．１７１．１７％ｂｃｄｅｆ－ＧＦＳ１６１９ａ．．８５％ａｂ２３．５３％１７５５％ｂ２０．３１±１．７４％ａｂｃｄ－ＧＦＳ１８２２．０２％ａ１８．８６％ａ２２．０６％ａ２０．９８±１．０６％ａｂｃ－Ｓ３２１．ＧＦ７．８０％ａ１１．７３％ｂ１３６１％ｂ１４．３８±１．７９％ｅｆ－ＧＦＳ巧巧．％ｃ．６３．．ｄ．４４％ａ１１３１１６％ａｂ１５４６±２１４％ｅｆＧＦ－＋Ｓ３５巧．．２ｄｅｆ．６１％ｂ２１２６％ａ巧４％ｂ１７．３７１．９５％ｂｃ－ＧＦＳ４３１６．５７％ａ巧．３３７．％ｂｃｄ．１９％ｂ２０５％ｂ１７．±１６２ｅｆ＂－ＧＦＳ４４１７．１２％ａ１２．５６％ｂ１１．６３％ｂ１３．７７±Ｌ７％ｆ－ＧＦＳ７２２３．６６％ａ２１．０７％ａ２４．ｌｌ％ａ２２．９４±２．ｌｌ％ａｂＧＦ－Ｓ７７２２．４３％ａ．８７％ａ２６．８８％ａ２３．０６２．０５％ａ１９±ＧＦ－Ｓ８５巧．３３％ｂ２３．２８％ａ１７．０７％ｂ１９．５６±１．９％ａｂｃｄｅＧＦ－Ｓ８８巧．６３％ｂ１７．２３％ａ１４．６３％ｂ１３．５６±０．７６％ｃｄｅｆＧＦ－Ｓ８９１６．２３％ａｂ１４．２３％ｂ１７．ｌｌ％ａ１４．５６＋０．８跳ｃｄｅｆＧＦ－Ｓ９０１义５０％ａ１２．６２％ａ１３．５４％ａ１３．２２±０．３％ｆ－Ｓ９ＧＦＪ１１．４１％ｂ１５．７３％ａ口．１０％ｂ１３．０８±１．３４％ｆ－ＧＦＳ１１５２３７．７２％ｂ１７．６６紳１９．５±１．８１％ａｂｃｄｅ．１２％ａ１ｃｋ１３．７３％ａ１２．３１％ａ１１．６４％ａ１２．５６±０．６２％ｆ＂：表中小写字母巧示５％盛著水平注。Ｎｏｔｅ：Ｌｏｗｅｒｃａｓｅｌｅｔｅｒｓｉｎｄｉｃａｔｅｄ化ｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔａｔ５％ｌｅｖｅｌ． 巧巧古巧化大学硕±学位论义＾４结论一（１）在１（ＴＣ条件下，本试验共有３５株玉米稻轩复合菌系，淘汰复合菌系在转接几代后存在降解能力退化现象，并结合降解率比较分祈得到降解能力较强的复合菌３－Ｓ７２－－、ＧＦＳ、Ｓ７７。个，编号为ＧＦ１８ＧＦ（２）在复合菌系第９代滤纸培养时，部分菌系第３ｄ时滤纸液界面开始变薄，第５ｄ１５ｄ时断裂；时出现液界面下滤纸蓬松。３一碳源连续培养Ｈ代的降解率（）利用玉米程杆为唯，其中峰解率大于２０％的菌系ＧＦ－Ｓ巧ＧＦ－Ｓ－－有、１８、ＧＦＳ７２、ＧＦＳ７７，其降解率分别为２０．３％、２０．９８％、２２．９４％、．．５６％相比差异性显著２３０６％，均和ＣＫ０２）；比较Ｈ代复合菌系的降解情况可知，复－Ｓ－－合菌ＧＦ１８、ＧＦＳ７２、ＧＦＳ７７三代之间差异性不显著，说明降解性能稳定。／／／ ２玉米哲轩低温降解菌剂降解效果的研究Ｊ第Ｈ章复合菌系液态发酵条件下的生长特性及降解效果第二章对复合菌系进行复筛和选育，根据稳定性和对稻轩的降解效果选出３个降解效果较好的复合菌系，本章通过对复合菌系在液态条件下生长特性和降解效果一的测定，进步了解菌系的生长情况。１试验材料与方法１．１试验材料－－（１）复合菌系：复筛得到的降解效果好的复合菌系，编号为：ＧＦＳ１８、ＧＦＳ７２、ＧＦ－Ｓ７７〇稻巧和培养基同上。（３）滤纸：ＷｌｌａｔｍａｎＮｏ．１滤纸。１．２主要试剂配制（ｌ）ＤＮＳ试：准确称取酒石酸钟納１８２．Ｏ０Ｃ加热）剂ｇ溶于蒸馈水中（低于５，待溶－二硝基水杨酸６．、、５．解后加入３，５３ｇＮａＯＨ２１ｇ苯酶５．化、无水亚硫酸钢化，揽拌使么溶解１０００ｍｌ。，冷却后加水定容到，贬存于栋色试剂瓶，室温放置两周后使巧．８０巧樣酸缓冲液．ｍｌ但）州４：Ａ液；取Ｃ６＾Ｗ）７Ｈ２０２１．０１４ｇ，定容到１０００；Ｂ液：称取ＮａＧＨＡ．２也０２９．４１２ｇ定容至１０００ｍｌ。取Ａ液２７１．２ｍｌ，Ｂ液２２８．８ｍｌ’定容至１０００ｍｌ，４Ｃ冰箱内保存。化殻甲基纤维素钢－－（３）（ＣＭＣＮａ）：ＱｌＣＮａｌ．５ｇ，定容于１００ｍｌｐＨ４．８巧樣酸缓冲液中。（４）０．５％水杨昔溶船称取０．５０ｇ水杨昔，定容于１００ｍｌｐＨ４．８括樣酸缓冲液中。１．３试验没计在２５０ｍｌ兰角瓶中加入３０ｍｌ奥梅梁斯基培养基和稻杆（剪成１ｃｍ小段）１．００ｇ，‘’１２１Ｃ高压灭２０ｍｉｎｌＯ菌，在无菌条件下加入３ｍ菌液，恒温培养箱（ｌＣ）培养。每个菌种多次重复，接种后每２４ｈ测其菌液生长量、Ｈ值化测定纤维素酶活；每ｐ；每４７２ｈ破坏性取样不接菌为对照测定失重率和纤维素含量的变。每个处理每次测量均Ｈ次重复。１．４试验方法１．４．１生长量曲线的测定＞３ｍｌ０ｍｎ波长。接种后每隔２他取培养液，测定６０下的吸光度通过此方法确定 ．内蒙古巧业大学硕±学位论文菌系的生长密度，０Ｄ值越大茜落数量也多。１．４．２ｐＨ值变化的测定如测定是在无菌条件下移液器直接吸取化２ｍｌ培养液用微量ｐＨ计上测定。１．４．３酶活力测定方法－每隔Ｉｄ分别测定纤维素全酶（ＦＰＡ），外切酶（Ｃ，），内切酶（Ｃｘ）和６葡Ｐ’ｎｉ萄糖巧酶（Ｃｂ）活力，采用Ｄ肥法，研巧降解菌巧的酶活力随培养时间的变化关系。１．４．３．１粗酶液的提取将培赛液于３０００ｒ／ｍｉｎ离也１０ｍｉｎ，取其上清液即为粗酶液。酶活力定义为１ｍｌ酶液１分钟水解底物生成１ｙｍｏｌ还原糖量为１个酶单位（ＩＵ）。１．４．３．２葡萄糖含备标准曲线（１）葡萄糖标准溶液（Ｉｍｇ／ｒａｌ）＋’准确称取３２）Ｃ下烘干至恒重的无化１００，（１０水葡萄糖ｇ用蒸链水定容至１０００ｍｌ。（２）荀萄糖标准曲线测定表４巧商糖标准溶巧光密巧測定流程Ｔａｂｌｅ．４ＴｈｅＯＤｖａｌｕｅｏｆｇｌｕｅｏｓｅｓｔａｎｄａｒｄｓｏｌｕｔｏｎｉ项目空白１２３４５葡萄糖浓度（ｍｇ／ｍｌ）００．２０．４０．６０．８１蒸饱水（ｍｌ）２１．８１．６１．４１．２１ＤＮＳ试剂（ｍｌ）３３３３３３沸水浴（ｍｉｎ）ｌＯｒａｉｎ冷却定容２５ｍｌ比色５４０ｎｍ４规ＤＮＳ试按表定的量和方法，分别吸取葡萄糖标准使用溶液、缓冲溶液和剂于各管中（每管做Ｈ次重复），混匀，沸水浴ｌＯｒａｉｎ冷却定容后将用１０ｍｍ比色杯，在分光光度计被长５４０ｎｍ处测量吸光度。Ｗ荀萄糖量为横坐标，吸光度为纵坐 １４玉米稳巧低溫時解菌剂降解效果的研究＿标．９９９０，绘制标准曲线得线性回归方程，线性回归系数应在０Ｗ上时方可使用。１．４．３．３纤维素酶活力的测定（１滤纸酶活力的测定：每个样品Ｈ次重复，且具有空白对照，空白对照的粗酶）ｆＭｌ液在加完Ｄ肥试剂后加入。具体操作步骤如下：表５ＦＰＡ巧活的測定流程Ｔａｂｌｅ．５ＴｈｅＯＤｖａｒｌｕｅｏｆＦＰＡａｓｅ巧ａｎｄａｄｓｏｌｕｔｉｏｎ项目添加量与时间１缓冲液．８ｍｌ粗酶液０．２ｍｌ底物滤纸ｌ＊６ｃｍ’５０Ｃ沸水浴６０ｍｉｎＤＮＳ３ｍｌ沸水浴ｌＯｍｉｎ流水冷却定容巧ｍｌ比色５４０ｎｍＣ）：、活性的测定每个样品Ｈ次重复，空Ｐ）内切酶（，且具有空白对照白对照的ｓｓｔｉ粗酶液在加完ＤＮＳ试剂后加入。具体操作步骤如下：表６ＣＸ酶活的測定流程Ｔａｂｌｅ．６Ｔｈｅ抓ｖａｌｕｅｏｆＧｘａｓｅ巧ａｎｄａｒｄｓｏｌｕｔｉｏｎ项目添加量与时间％ＣＭＣ－化底物１１．８ｍｌ粗酶液０．２ｍｌ’５０Ｃ沸水浴３０ｍｉｎＤＮＳ３ｍｌ沸水洛ｌＯｍｉｎ流水冷却定容２５ｍｌ比色５４０ｎｍ 内蒙古巧业大学硕±学位论文＾－％（３Ｓ葡萄糖昔酶（ＣＪ活性的测定：将底物换成化５水杨巧溶液ｎ），时间为ｅＯｍｉ，步骤和顺序同（１），４：５０ｍｇ，（）外切酶（Ｃ，）活性的测定将底物换成脱脂棉时间为６０ｍｉｎ，步骤和顺序糖量，根据葡萄糖量计算出内切酶的酶活力１．５棺轩的降解率同上單１．６木质纤维素巧余量的测定将降解后的稍巧烘干粉粹后过１ｍｍ筛，按照纤维素分析仪ＡＮＫＯＭＡ２００ｉ的（）方法测定木质素，继而算出木质纤维素残余量的变化。、纤维素、半纤维的含量２数据处理：Ｕ统计分析ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ２０１０进行数据统计分析及作图。３结果与分祈３．１液态发酵条件下微生物生长量的动态变化２４小时测量的吸光值６００ｎｍ，可图１是复合菌系每隔（）Ｗ说明菌系的生长情况，一－－－Ｆ１、Ｓ７２、ＧＦ由图可知，ＧＳ８ＧＦＳ７７复合菌系的生长曲线趋势基本致，均为先快一段时间后下降的趋势。接菌后，速增长后平稳，ＯＤ值急剧增加直接进入对数期－－０３ｄ，６ｄ，１０１２ｄ，说明菌系适应力强后进入缓慢增长期达到离峰后下降，说明（）。在生长的后期由于稻轩底物的减少，进入了衰弱期 ６玉米稳巧低温降解菌剂降解效果的研究Ｊａ巧ｒ－０．３。２５当賓Ｓ０２＞〇－０．巧——Ｍ？巧２－＆１－Ｊｉ■■■ＧＦＳ１８－Ｗ—＊—亦巧７０－．０５＾０１２３４５６７８９１０１１１２巧１４巧测定时间（ｄ）Ｔｉｍｅ图１复合苗系的ＯＤ值Ｆ．０ｖａｉｇ１Ｔｈｅ０ｌｕｅｏｆｔｈｅｃｏｍｐｏｓｉｔｅｓｔｒａｉｎｓ３．２液态发薛条件下ｐＨ值的动态变化图２是Ｈ株复合菌系每隔２４ｈ菌液的ｐＨ值变化，ＰＨ值的动态变化说明了茜系的调节情况。＊：！ｊ６■———？■巧巧２－－＊－１ＷＳ８瓦５■一＊巧巧７良Ｉ￣￣＇—＞￣■—＇￣＇■￣＇—＇—＇￣＇￣■￣＊—■￣＊￣—■＇０已１２３４６７８９１０１１１２１３１４巧测定时间（ｄ）Ｔｉｍｅ困２复合菌系的ｐＨ值Ｆｉｇ．２ＴｈｅｐＨｏｆｔｈｅｃｏｍｐｏｓｉｔｅｓｔｒａｉｎｓ由图可知复合菌系降解稻巧的过程中的１５ｄ内都经历了先降低后升寓，最后稳，－ｄ。ｄＨ急２３定在中性偏碱的变化趋势菌系在接入菌第Ｉｐ剧下降，在降解第下降到－－－、．．．，最低，ＧＦＳ１８、ＧＦＳ７２ＧＦＳ口分别由７３２降至６３２、６．６、６１２８ｄ后趋于稳定， 内蒙古农业大学硕±学位论文＾－７ｐＨ值徘徊在７．５之间。３．３液态发醇条件酶活的动态变化纤维素的降解是稻杆降解的关键，ＦＰＡ是全酶，是外切酶（Ｃｉ），内切酶（。）－和ｅ巧萄糖脊酶（Ｃｂ）活为协同作用的结果，結杆降解过程中纤维素酶活力的变化如图３，可看出，纤维素酶活均在加入菌剂后上升，随着时间的増加而下降，其中Ｃｘ酶呈现双峰变化趋势，复合葫系中各种纤维素降解菌开始被诱导产生纤维素降解酶，，因而酶活逐渐增大随着底物稻杆的不断降解，纤维素浓度逐渐降低，导致纤维素降解酶活有所降低。５５！．？ｒＡｈ＊＂：置品［－＂ｆ。巧饥［ｎｌｉｌＡ＼。巧．ｓｎＴ．巧工１ｌ；Ｌ—＾。＇。了．ＳｆＴ去１ＩＩｉｋｉｌｌＭＩＭ．．槪ｆｔＩｒｉＭＩｔ■１．ＡｍＩ．ｌ■１■ＫｆｈＭＬＬＭＬ．巧？４６８１０１２Ｈ化２４？８ｙ化＊志巧Ａ定巧巧（＊出ｎ？‘－５．１４ｒｆ－＂■巧－，ＷＳ打ｉ，４ＳＡ王ｓｃｊ－－ＷＳＷ－ａｓｉｓ，．＊［工画Ｈ肉％：ｔ議ｉｉｉｉ２？６Ｓ巧口Ｗ巧４ＳＳ巧口Ｈ巧＝。》Ａ适巧ｒ，１（ｄ＞Ｔｉ—图３复合菌系酪活的变化Ｆｉｇ．３Ｃｈａｎｇｅｓｉｎａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｃｏｍｐｌｅｘｓｔｒａｉｎｓ－Ｓ７２在所测定时间内、、复合菌系ＧＦ，ＦＰＡＣＣｘ酶在第ｌＯｄ达ｉ到最高酶活，－分别为０．８２、１．４Ｋ１．３３ＩＵＣ．２５ＩＵ；ｂ酶在第６ｄ达到最高酶活，为１：复合菌系ＧＦ１８的纤维素酶活ＦＰＡ、〇＞酶活在第８ｄ达到最高，分别为０．８２、１．３５ＩＵ，Ｃ、Ｃｘ酶活ｌ－在第ｌＯｄ最高．、１．，分别为１３１３５ＩＵ合菌系ＧＦ７７的纤维素酶活Ｃ、Ｃ；复ｉｘ在第ｌＯｄ达到最高，分别为１．２３、１．２６ＩＵ，ＦＰＡ、Ｃｂ酶活分别在第６ｄ和第８ｄ达到最窩， Ｊ！玉米括轩低温降解菌剂降解效果的硏究分别为０．８０、１．３２ＩＵ。３．４巧态发薛条件下稳轩降解率的动态变化图４是玉米枯杆在发酵条件下随培养天数的增加降解率的变化，可知，稻杆降解率随培养时间而增加，且施加外源菌系的程杆降解率始终极显著高于ＣＫ，经过－－１５ｄ的Ｓ７２－培养，ＧＦ、即Ｓ１８、ＧＦ７７复合菌系的稻杆降解率分别达到〇２５．６０／〇、２１．２０％２４１％、１．，与ＣＫ（１３．５３％）相比，分别提离了１２．０７、７７．６、７．８８个百分点。在整个分解过程中－，复合菌系ＧＦＳ７２始终高于其他两个茜系，显著提高稻轩的腐解－速度，说明ＧＦＳ７２效果较好。３０－０ＷＰ化．望０巧＾－５－ｉｉ一－》－－＾ＦＳ７２－召－Ｉ／／丈丕－ｃ？２？５．０巧Ｃ？－－＇＾ＧＦ？Ｓｌｏ？ＳＵ？－－？Ｘ／ＣＫ０．。．巧ｊＩ？，０３６９１２、１５测定时间（ｄａｙ）Ｔｉｉｎｅ图４复含巧系降解率的变化Ｆ．ｉｇ４Ｃｈａｎｇ巧ｉｎｔｈｅｄｅｇｒａｄａｔｉ加ｒａｔｅｏｆｔｈｅｃｏｍｐｏｓｉｔｅｓｔｒａｉｎｓ３．５液态发薛条件下稳轩木质纤维素残余量的动态变化图５是玉米稻轩在发酵条件下随培养天数的增加木质纤维素残余量的变化，由图５可知，随着时间的推移’玉米稻杆木质纤维素残余量呈下降趋势。施用外源菌系处理的木质纤维素残余量相比ＣＫ降解更快，说明施加的复合菌系很快适应了新环境，促进稍巧降解。木质素前６ｄ降解缓慢，之后迅速降解，可能是木质素结构复’杂一，前期复合菌系降解枯杆使结构疏松，有助于进步加速降解木质素。 内蒙古农业大学硕±学位论文＾－７２－－、．到４５ｄ时Ｓ、ＧＦＳ１８、ＧＦ７７ＣＫ纤维素残余量分别从由图５可知，ＧＦ培养前的〇．４５降解到化３２、０．３２、０．巧、化３９ｇ；半纤维素残余量分别从化２７ｇ降解ｇ到０７、０．１９、０．１８、０．２０；木质素残余量分别从０．０９降解到０．０６、０．０５、０．０６、．１ｇｇＨ个复合菌纤维素和木质素与ＣＫ相比差异性显著－８。，ＧＦＳ７２化０ｇ经方差分析，半纤维素差异性显著。—￣０５０－三８ｒ［ＩＩ！．。－如ＶＩＥ、．則ｕ２．験ｂ扛０＇二；哉；．１８；ｔ二賊Ｉ－０…巧幻Ｓ—ＣＩ．３ｒ弓＿一ａ－疆０．巧ｉｉ３；…．―－—？＊，＾—Ｉ－—－…ＩＡ—＞—？—…ｉ．巧０．＂０９２０３６１０３６９２１５１奶定时巧（ｄ）Ｔｉｍｅ热定巧巧ｄＵｉｍｅ（０．的５ｆ０．的另ｉ＝？０．０６５的．二揣．。〇．化Ｓｚｒｒｒ？；ｆＸ■＊０■．０５＾Ｉ〇．。扣Ｃ０３６９１２１５測定巧巧（ｄ）Ｔｉｍｅ围５爱合茜系木质纤维素残余窒巧变化ｒｍｔｍｃｅｏｓｅＦｉｎａｔｉｏｎｏｆｒｅｍｎａｎｔｏｆｃｅｌｕｌｏｓｅ，ｈｅｉＩｌｕｌ？ｌｉｉｎｉｎｃｏｒｎ．５Ｔｈｅｒｅｓｉｄｕａｌｕａｎｔｉｔｙｄｅｔｅｇｎｉｇｑｓｔｒａｗｓ４结论‘ｌ（１）对选出的Ｈ个复合菌系在液态条件下对其生长特性进行测定：在〇Ｃ条，后期有下降的趋势，可件下，Ｈ株复合菌系的生长曲线在接菌后直接进入对数期能是因为培养后期碳源的不足导致菌系的衰老死亡；ｐＨ值在培养巧期迅速下降，随。后稳定在７．２左右，说明菌系具有良好的适应和调节能力ＰＡＣＦ－（２）Ｆ、、Ｃｘ、Ｃ酶活在添加菌剂后均先升离后下降，ＧＳ７２最高酶活ｌｂ－拉１、１０、１．２ＩＵＧＦＳ１８．．３Ｋ１．３５．３５ＩＵ分别为．８２、１．４１、１．３３５，最高酶活分别为０；－、１、２６、２Ｕ；ＧＦＳ７７最商酶活分别为０．８０．２３１．１．３ＩＩｉＩ＜． ２〇玉米艳巧低温降巧苗剂巧巧巧果的研究＿－－（３）ＧＦＳ７２、ＧＦ－Ｓ、１８ＧＦＳ７７培养１５ｄ降解率分别为２５．６０％、２１．２０％、２１．４１％，－－－显著高于ＣＫ！ＧＦＳ７２、ＧＦＳ１８、ＧＦ７７、ＣＫ纤维素残余量分别从培养前的０．４５ｇ降解到０．３２、０．３２、化扣、０．３９ｇ；半纤维素残余量分别从０．２７降解到化１７、化１９、ｇ０．１８、０．２０ｇ；木质素残余量分别从０．０９ｇ降解到０．０６、０．０５、０．０６、０．０８ｇ，其中纤维素、木质素残余量显著高于ＣＫ。 内蒙古农业大学硕±学位论文＾第四章模掛还田方式下稳轩降解菌的括巧降解效果研究第Ｓ章的内容，主要是研究液态发酵条件，在水分充足条件下，各复合菌系对，且有主壌ｗ及其他微生物的参与程杆的降解效果，但由于田间不稳定因素多，可能在应用过程中部分菌系不能很好的发挥其降解作用，造成田间实际降解效果与实一验室降解效果之间存在差异。本章进行了模拟田间实际效果研究，从而进步确定不同复合菌系在不同处理条件下的降解效果。１材料与方法１．１试验材料１丄１试验菌剂－－－－选取编号为ＧＦＳ７２、ＧＦＳ１８、ＧＦＳ７７菌进行模拟还田试验，并对ＧＦＳ７２、－Ｓ。ＧＦ１８进行上壌微生物多样性试验１丄２玉米稳巧同上章。１丄３±壌±样采集及处理：±壌采集自包头市主默特右旗西沟口镇北只图村（内蒙古农业大学科技园区－），采用蛇行路线采样法取０２０ｃｍ的耕层±壤。将采集的主壌样品放在阴凉处，阴千，剔除植物残体、石块及其他杂物，混匀。１丄４培养基Ｈ＝细菌营养琼脂ｐ７．２＝真菌ＰＤＡｐＨ６．５放线菌改良高氏（Ｇａｕｓｅ）Ｉ号培养基；可溶性徒粉２０ｇ，ＫＮＣＭ．Ｏｇ，ＮａＣ１０．５ｇ，？．至Ｋ２ＨＰ〇４〇．５ｇ，ＭｇＳ〇４７Ｈ２〇０．５ｇ，Ｆ巧〇４ＴＦｂＯａＯｌｇ，定容ｌＯＯＯｍＩ。琼脂１８．０ｇ，ｍ％＝蒸墙水１０００ｍｌ。每３００ｌ培养基中加３重铭酸钟１ｍｌ。ｐＨ７．４。１．２试验设计准确称量５００ｇ±壤于灭菌的试验瓶中（５００ｍｌ），加入５ｇ己灭菌的玉米稻巧（剪－－－成４ｃｍ小段），埋±深度２ｃｍ，施用菌剂，ＧＦＳ７２、ＧＦＳ１８、ＧＦＳ７７菌量分别 Ｊ２玉米括巧低溫巧解菌剂降解效果的研究６７６约４Ｘ１０、１〇、５Ｘｌ〇ｃＵＰ／ｍｌ，分别加入６ｍｌ、１２ｍｌ、６ｍｌ试验朗＾实验中最佳（’Ｃ菌剂量按比例添加），ｌＯ。放入恒温培养箱，温度为定期称重，保持主壤含水量’为２０％。上除主壤外均１２１Ｃ，２０ｍ虹灭菌，并在无菌条件下操作。设置：ＣＫＯ：±壌；ＣＫ１：止壤＋稻杆；ＧＦ；±壌＋稻杆＋复合菌，每个处理３次重复。１．３样品米集样品于Ｏｄ、１５ｄ、３０ｄ、４５ｄ后每个处理取Ｈ瓶进行破坏性取样，挑出稻轩冲洗，去陈抱子茜丝称重测量枯轩降解率、木质纤维素残余量的变化。取部分王壤过２ｍｍ筛阴凉处风干后测量主壤腐殖质组成的变化、主壤酶活性；部分过１ｍｍ筛用’‘于止壌微生物数量的测定４Ｃ－８０Ｃ保存（保存）和止壤微生物多样性的测定（）。１．４测定方法１．．４１模拟还田试验降解效果１１．４．１．括軒的降解率同上章。１．４丄２木质巧维素残余量的测定同上章１．４丄３±壤腐殖质碳的测定±壤总有机碳－、腐殖质姐分碳采用重絡酸钟氧化外加热法测定。１．４丄４±壌酶活的测定’’止壤酶活：±壌纤维素酶用ＤＮＳ法３７Ｃ７２ｈＤＮＳ法Ｃ２他，；转化酶用３７，；（）（）＂’过氧化氨酶用高铺酸钟滴定法Ｃ比－３ｈ（４，）；腺酶用苯酷钢次氯酸巧滴定法（３７Ｃ，）；‘４—Ｐ５８３磯酸酶用比色法（３７Ｃ．２４ｈ。）１．４．２±壤微生物多样性－Ｓ７２、ＧＦ－Ｓ。选取ＧＦ１８复合菌系的主壤做±壌微生物多样性的试验１．４．２．１±巧微生物区系组成多样性 内蒙古农业大学硕±学位论支＾（１）±壌悬浮巧的制备，放入盛有４５ｍｌ无菌水的１００ｍｌＨ角室温称取５±壌样品，震荡培养３０ｍｉｎ。ｇ－｜±此为１〇１壌悬液，吸取１ｍｌ此上壌悬液于９ｍｌ的无茜水中，在旋窝震荡仪上幹＇２±壤悬液旋混勾，制成１〇。ｔＸ此类推依次稀韓成不同稀释度的上壌悬液。细菌、纤维素分解菌的分离与计数王壤微生物数量的测定采用、真菌、放线菌稀释平板计数法。（２）±壤琴液接种及培养，细菌、真菌、放线菌、每个稀释度做３次平巧。培养结束选择合适的稀释度，＝根据公式升算巧应平板中微生物菌落数。公式为：每克干±菌落数菌落平均数Ｘ５８—［Ｗ稀释倍数Ｘ１０／千上所占百分比。表７±谋微生物数量测定方法Ｔａｂ．Ｋｍｉｃｌｅ７Ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｏｒｏｂｉａｌｎｕｍｂｅｒ微生物类群稀稽度培养温度培养时间—４＊．－２ＳＣ２－细蘭１０１０３ｄ‘——，１‘’－真蘭０１０巧Ｃ３－５ｄ１２—４－放线巧—２Ｃ－１〇１０８７ｌＯｄ１．４．２．２ＤＧＧＥ（１）±壌细菌总ＤＮＡ的提取及检测本试验选用ＴｉａｎＧｅｎ公司的止壤基因组提取试剂盒（型号为Ｎ２７２１，按照操作）说明书上的具体步骤对±壤进行ＤＮＡ的提取。°－吸取５叫在１％琼脂糖凝胶电泳进行检测，出现条带为成功，祥品放置２０Ｃ保存。（２）±壤细菌ＤＮＡ进行ＰＣ民扩增细菌１６Ｓ也ＮＡ的Ｖ３区ＰＣＲ扩増，引物为：３４１ｆ＋ＧＣ夹：’５－ＣＧＣＣＣＧＣＣＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＣＡＣＧＧＧＧＧＧＡＣＴＣＣＴＡ’ＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧ－３５１８ｒ；’’－５－３ＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＧＧ ２４玉朱稳巧低溫巧巧菌荆炼巧效果的研究＿（３）细菌ＰＣＲ反应体系和程序采用５０ＰＩ的反应体系，具体如下；３４１ｆ＋ＧＣ（１０ｎｍｏｌ／Ｌ）１ｕＩ５１８ｒ（１０ｕｍｏｌ／Ｌ）１ｎＩｐｒｅｍｉｘＴａｇＴＭ巧ＵＩ止壤ＤＮＡ稀释５倍ＩｎｉｄｄＨ２０２２ｕ１ＰＣＲ扩増反应程序？’①９４Ｃ变性５ｍｉｎ’②９４Ｃ变性３０Ｓ’⑨５６Ｃ退火４０Ｓ＞３５循环’－④７２Ｃ延伸３０Ｓ’⑤７２Ｃ延伸１０ｍｉｎ（４）细菌ＰＣＲ产物的琼脂糖凝胶电泳定性检测吸取５叫用１％的琼脂糖凝胶电泳进行检测，利用ＴｉａｎＧｅｎ公司的ＭａｋｅｒＩＩ作为标准，目标片段出现在２３０ｂｐ左右。（５）ＤＧＧＥ巧术分离ＰＣＲ产物￣６０％７配制浓度为８％聚丙婦醜胺，变性剂梯度为４０％（表）。每板１５ｍｌ，灌胶前加入７５＾ａｌＯ％过硫酸较（现配现脚和Ｍ的ＴＥＭＥＤ，均匀缓慢灌入胶板中，垂直插入梳子ｘＴＡＥｂｕｆｅ，待胶体凝固后将胶板置于装有电泳缓冲溶液（Ｉｒｌ的装置中。）每个梳化加样量为ＰＣＲ产物４５此和６＊ｌｏａｄｉｎｂｕｆｅｒｓ咕ＰＣＲ产物溢ｇ（防止点样时‘出，于６０Ｃ（提前预热），７５Ｖ电压下进行１６ｈ，用ＳＹＢ氏ＧｒｅｅｎＩ颜色。染色结束）ｅ－ｌｉＲ后，用ＧＤｏｃＸＲ凝胶成像系统ｏａｄ观察凝胶上的条带并拍照。巧）巧８巧性巧巧巧液的Ｒ制Ｔａｂｌｅ８Ｐｔｉｎｏｆｎａｔｕｅｌｏｌｕｏｎ．ｒａｒａｏｄｅｒｉｎｇｓｔｉ＾ｇ６０％变性梯度巧胶４０％巧性梯度巧胶巧素巧．２ｇ１６．化去离子甲巧胺２４ｍｌ１６ｍｌ＾ＴＡＥ２ｍ５０Ｘｌ加１聚巧巧胺游胶（３７．５：１）２０ｍｌ２０ｍｌ巧ｄｄ拓０定驾至１０加１定容至ｌＯＯｎｌ 内蒙古农业大学硕±学位论文＾（６）序列测定及比对°对ＤＧＧＥ图谱上优势条带进行切胶，然后加入３０灭菌的去离子水在４ＣＴ过夜保存ＩＬ作为ＤＮＡ模板３４１ｆ５１８ｒ，ＰＣＲ，取ｍ引物为不带夹子）和的反应体系，（和反应条件和上面的细菌一ＰＣ民的反应体系和反应条件致。所得到产物连接－（ＴａＫａＲａ公司的ｐＭＤＴＶｅｃｔｏｒ）、转化ＴｉａｎＧｅｎＴＯＰｌＯ，１９（大肠杆菌）按照说明书进行，培养过夜后，Ｌ＾，，挑选白色克隆用ｌｕｌ菌液Ｍ１３为引物ＰＣＲ挑选阳性克隆子送北京擎科公司测序，将所得ＤＮＡ序列与ＮＣＢＩ网站－＇ｈｔｔｌｉｎｏｖ／：／／ｗｗｖｎｃｂｉ．ｎｎ．ｉｈ．ｇ数据库中的己有序列进行ＢＬＡＳＴ序列比对。（ｐ）’’－ＭＣＧＣＣＡＧＧＧＴＴＴＴＣＣＣＡＧＴＣＡＣＧＡＣ－３１３＋；５’－Ｍ１３－：５ＧＡＧＣＧＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＴＣＡＣＡＣＡＧＧ斗（７）ＤＧＧＥ结累分析ＤＧＧＥａｎＯｎｅ４５Ｂ－ＵＳＡ电泳图片采巧卿ｔｉｔｙ．．２ｉｏＲａｄ（，）分析软件进行分化来比较各个止壤样品的微生物多样性的一些基本指标。根据各个样品ＤＧＧＥ图谱条带的－Ｗ数目及强度，计算各个±壌样品的丰富度（ｒｉｃｈｎｅｓｓ，Ｓ），化ａｎｎｏｎｉｅｎｅｒ指数Ｈ，（）－ｗ丰富哟Ｓ）：ＤＧＧＥ指纹图谱中每条泳道的条带数。Ｓｈａｎｎｏｎｉｅｎｅｒ多样性指数（Ｈ）：－ｗＳｈａｎｎｏｎｉｅｎｅｒ指数＇Ｈ＝－ＩＰｉＩｎＰｉ／式中：ＰＨＮｉＮ；式中；Ｐｉ：第ｉ个ＤＧＧＥ条带出现的概率Ｎｉ：第ｉ个ＤＧＧＥ条带的扩增量；Ｎ：微生物群落ＤＮＡ的ＤＧＧＥ条带的扩增总量。３结果与分析３１．复合菌系对玉米程巧降解率的影响由图６可知，且施加，程杆降解率随培养时间而增加外源菌系的程杆降解率始－－－终极显著富于ＣＫ１，经过４５ｄ的培养，ＧＦＳ７２、ＧＦＳ１８、ＧＦＳ７７复合菌系的枯杆５１．５０％、３７．５９％、３４．７４％，与ＣＫ１（３１．１２％）相比降解率分别达到，分别提高了－－＞ＧＦ－２０．３８、６．４７、３．６２个百分点。从整体看，降解率ＧＦＳ７２＞ＧＦＳ１８Ｓ７７，经方－差分析，Ｈ个复合菌系湿著提高程杆的腐解速度，其中ＧＦＳ７２降解效果最好，盈著高于其他两个复合菌系。 ２６玉米稳巧低温降解窗剂降解效巧的研究＊■ＵＷ／Ｖ■－＇／Ｖ兴、一既＊■ｉ－ｉｓ－■巧打７．ｉ１０＊？－－Ｓ８ｎ＊＾Ｆ１．．＊－ａ！Ｑ。巧。品ｌｉ品品；Ｉ图‘６复合窗系对玉米棺巧降解率的影晌（１０Ｃ）Ｆ．ｉｏｎｒａｔｅｓｏｆｃｏｒｎｓｔｌｋｒｉｇｕｒｅ１Ｄｅｇｒａｄａｔａｓｗｉｔｈｔｗｏｇｏｕｐｏｆｍｉｃｒｏｂｅｓ注。；表中小与字母表示５％显著水平Ｎｏｔｅ：Ｌｏｗｅｒｃａｓｅｌｅｔｅｒｓｉｎ出ｃａｔｅｄ化ｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔａｔ５％ｌｅｖｅｌ．３．２复合菌系对玉米棺巧木质纤维素组成成分的影响７可知，由图，随着时间的推移玉米稻杆木质纤维素残余量呈下降趋势，其中玉米枯杆纤维素、半纤维素残余量前１５ｄ降解趋势较快，然后缓慢降低。施用外源菌系处理的木质纤维素残余量相比ＣＫ１降解更快，说明施加的复合菌系很快适应了－４５ｄ迅止壤环境，促进稻杆降解。木质素前３０ｄ降解缓慢，３０速降解，可能是木质一。素结构复杂，有助，前期复合菌系降解稻杆使结构疏松于进步化速降解木质素－－４５ｄ－，ＧＦ１７７ＣＫ１由图７可知，时Ｓ７２、ＧＦＳ８、ＧＦＳ、纤维素残余量分别从培养前的２．４４降解到１．１２、１．３５、１．３０、１．４９ｇ；半纤维素残余量分别从１．３２ｇ降ｇ解到０．７２、０．８７、０．８２、０．９７ｇ；木质素巧余量分别从０．４２ｇ降解到０．２７ｇ、０．３１ｇ、－０、。Ｓ，大．２９０．３６ｇ整体降解速率为添加菌的大于ＣＫｌ，其中ＧＦ７２降解速度最快于其他两个复合菌系；经方差分析，到４５ｄ时Ｈ个复合菌系的残余量均与ＣＫ１相比差异显著。＼＼＼＼＼巧巧 内蒙古农业大学硕±学位论文＾１－．４０２．说、？—■—ＧＦ＆巧￡化９０＿＿＿－焉＾ＧＦＳ７７—、［＊＾ＧＦ．＇Ｓ７７－－－－０—誦．７０ＸＣＫ１０．巧７。Ｊ一｜一ｇ米ｏａＩ＾＂＇——１——．！－－－！．Ｔ？０５００．６０１１０１５３０４５５３０４Ｓ０１ｄ）口ｅＴｉ拋运时间（＜３ｉｍ挪定时巧（川ｅ０—．４５ｉｈ－＼＜—＇＾—？－Ｓ７２＾ＣＧＦ—Ｓ—－Ｓ■拉１８Ｆ－一０．２５１—ＡＧＦ－Ｓ７７Ｉ－——乂ＣＫｌ－０．２０Ｉ；ｓ０赛３走时问（ｄ）Ｔｉ誌图７复合菌系对玉米稳巧的木质纤维素残余里的影响ｅｔｅｒｅｌｌｉｉｌｏｓｅ，ｌｉｉｎｉｎｃｏｒｎｒｍｎｏｆｍｎａｎｔｏｆｃｅｌｌｕｌｏ巧．ｈｅｍｉｃｅｇｎｉｎａｔｉｏＦ．ｒｅｓｉｄｕａｌｕａｎｔｉｔｙｄｉｇ７Ｔｈｅｑｓｔａｌｋｓ３．３复合菌系对±壌腐殖质组成的影响（ＣＫＯ４５ｄ表可知，不同处理的ｉ壤表９是培养Ｏｄ）和±壌腐殖质碳狙成，由－ＡＣＦＡ日胡敏素碳。ＧＦＳ７２胡敏酸（ＣＨＭ）含量差异显著胡敏酸碳（ＣＨ）、富里酸碳（巧２．８５、１．８８、２．５３ｇ／ｋｇ，与ＣＫ０相比分别增碳、富里酸碳和胡敏素碳的含量分别为〇〇〇理相比分别增加９５．７４％、６７．８６／〇、６７．５５％。加１０２２／〇、６６．３７／〇、；５６．７８％，与化１处．１±壌腐殖质组成中胡敏酸碳与富里酸碳比值ＣＦＡ／ＣＨＭ）是说明±壌腐殖质组（６２【］比值越大越好。表９还看出，各处理止壤腐殖质中胡敏酸碳成性质的重要指标，－剂的比值均高于ＣＫ１和ＣＫ０，有利于提与富里酸碳比值为１．２５１．巧，施加外援菌验培养４５ｄ时未达到显著差异。。高王壌肥力，但在本试 ２８玉米艳巧巧温巧解苗剂降巧效果的研究＿表９Ｓ合苗系对培养４５ｄ时±壞腐巧康组分楼的巧响Ｔａｂ．９ｆｆｅｃｔｓｏｎｓｏｕｍｕｓＣａｆｔｅｒ４５化ｙｓｌｅＥｉｌｈ腐殖质组分碳ＨｕｍｕｓＣ打ａｃｔｉｏｎｓ处理腐殖质胡敏酸碳富里巧碳Ｃｈ，胡敏素碳胡敏酸碳／化ｅａｔｍｅｎｔ总碳Ｃｉ（ｇ／ｋｇ）富里酸巧Ｃ＂Ｃ？Ｃｈａ（ｇ／ｋｇ）（ｇ／ｋｇ）Ｃｍ（ｇ／ｋｇ）ＣＫＯ３．巧４１．４１ｄ１．１３ｂ１．１８ｂ１．巧ａＣＫｌ４．１３ｄ１．．５０ｃｄ１１２ｂ１．５１ｂ１．３４ａＧＦ－Ｓ７２７．２６ａ２．８５ａ１．妨ａ２．５３ａ１．５２ａ－ＧＦＳ１８４．９５ｃＬ朗ｂｅ１．３０ａｂ１．８５ｂ１．３８ａ－ＧＦＳ口５．．．３６．２９ｂｃ１．９凯ｃ１４１ａｂ１９６ｂ１ａ注：表中小写字母表示５％显著水平。Ｎｏｔｅ：Ｌｏｗｅｒｃａｓｅｌｅｔｔｅｒｓｉｎ出ｃａｔｅｄ化ｅｓｉｎ巧ｃａｎｔａｔ５％ｌｅｖｅｌ．ｇ３．４复合菌系对主壤酶活性的影响６＾６止壌酶活性的变化特点反映了玉米枯巧分解转化的方向和强度［１。从图８可、、Ｗ看出，添加稻巧后，上壌氧化氨酶、转化酶腺酶憐酸酶、纤维素酶活性均表－现为先升髙后下降的趋势，培养１５３０ｄ时达到峰值。这说明，程杆的添加提供了新鲜的碳源，大大刺激了微生物的繁殖，提高了±壤酶的活性，并且施加复合菌系处理高于对照，施复合菌系的两个处理间酶活性相近，表明施加复合菌系有助于提离±壌生物活性－（±壌酶活有下降趋势。±壤酶活性变化动态则各有将，培养１５３０１时点，±壤转化酶和±壤纤维素酶活均是前１５ｄ上升速率最快且１５ｄ时达到最高，此－Ｓ７２－－后下降。１５ｄ时ＧＦ、ＧＦＳ１８、ＧＦＳ７７的±壤转化酶分别为４６．９４、４３．７１、〇４－－、４４．８７ｍ／比ＣＫｌ３１．９９ｍ／．７３％、３６．６／〇、４０．２６％ＧＦＳ７２、ＧＦＳ１８ｇｇ，分别（ｇｇ）高４６；ＧＦ－Ｓ７７别为的巧维素酶活分１．４３、１．３６、１．３Ｉｍ／ｇ，分别比ＣＫ１０．８２ｍ／高７４．４３％、ｇ（ｇｇ）〇－６５．８５％、５９．７６／。。止壌碱性磯酸酶、±壤腺酶和主壌过氧化氨酶在１５３０ｄ天时酶活－相对较高，其中ＧＦＳ７２磯酸酶、脈酶在３０ｄ时最高，分别为５７．４１、３．１９ｍｇ／ｇ，比同时期的ＣＫ１高７０．３５％、２７．６０％、５ｄ２．２０ｍｌ／比，过氧化氨酶在１时最高，为ｇ，－同时期的ＣＫ１分别高１８．９１％ＧＦＳ１８的磯酸酶、脈酶和过氧化氨酶均在１５ｄ时最；〇、５４．９１ｍ／、２．８３ｍ／、２．１１ｍｌ／，ＣＫ１．８８／〇高，分别为ｇｇｇｇｇ比同时期的分别高出５６〇－／１５，．５１％、１４．０５／〇；ＧＦＳ７７过氧化氮酶、腺酶在１５ｄ时最高，分别为２．９４、２．１８ｍｇｇ比同时期的ＣＫ１高２０．００％、１７．８４％３０ｄ时最高，为４９．３５ｍｌ／，比同时，稱酸酶在ｇ期的Ｃｉａ分别高４６．４４％。 内蒙古农业大学硕±学位论文＾＿＿！｜ｉｉ＇＇＂、二真式ｒｉ二置哉护－一－＜／－－－乂ｂ■ＣＫｌ１０Ｉ？ｒＣＫｌ１０．５ＩＯｄＩ５ｄＢＯｄ４Ｓｄ０３々乂斯苦巧词（ｄ）Ｔｉｍｅ巧巧州Ｔｉｒ＾ＩＩ＾＊３－４．５２ＩＩ２一口３——－ｃＩ＂？ＧＦＳ７２ｇ善＜；—－—？ＧＦＳ１８＼—？—－Ｓ由巧ｌＳ：■霉１‘２－－＾Ｇ－Ｆ５７７＿１－５？＿＊＾巧巧７。１－－＊ＣＫｌＩＷ４ＷＭ撫４ＳｄＩ邮ｗ端ｅＩ１６—ＧＦ－Ｓ７２ＡＬ４—￣５＊ＧＦ－Ｓ１８．；！ｒ＂、＇＂ｂ咧。．６／Ｃ、化４＇；、Ｉ，￡Ｉ？０．２－．０－Ｔ如１５ｄ３０ｄ４５ｄ繫青时周州Ｔｉｍｅ图８复合菌系对止巧酶活的巧晌Ｆ．ｉｉｄｒｉｄ行押ｄｉｇ８Ｔｈｅｓｏｉｌｅｎｚｙｍｅａｃｔｖｉｔｅｓｕｎｇ４５ａａ４５ａｓｙｙ３．５±壌微生物适传多样性分析３．５．１±填微生物数量的变化图９是止壌微生物数量随培养时间变化，可知，加Ｘ菌剂后，曲线呈先升高后。、、下降的趋势，且高于不添加菌剂的±壤复合菌细菌真菌放线菌均在培养３０ｄ ３０玉米括巧低温降解菌剂降解效果的研究７４５－达到最大，ＧＦＳ７２分别为１Ｉ－．３８ｌ〇ｃＵＦ／、７ｌＣＬＦ１１ｇ．２５〇／ｇ、（Ｕ６１〇佛Ｆ／ｇＧＦＳ８；分４５别为１．４５ＷｃＵＦ／ｇ、７．４８１〇ｃＵＦ／、９１１１〇ｇ．ｃＵＦ／ｇ，经方差分析，均显著高于ＣＫ１。一…一………．――………＂在…＇―ＩＴＩ＇Ｉ：－＾６ｆＳ７？〇６蚕０．５Ｉｇ－－－＊ＧＦ－ＳｌＳＨ５－－ＧＦＳ１８．．：？．０；５５．４｝；：ｉ０１５３０巧０１５３０４５Ｉｆ姬宏巧商ｄＪＴｉｍｅ劑定时间ｆｄ）Ｔｉｍｅｊ＾？＂ｒ＂＂ａｆｌ夺…＾｝ｌｌ＊－－ＳＡｒＦ－Ｓ７２叫＋化ＳＸＢ！０１５３０４Ｓ酒（）１定时间ｄＴｉｍｅ＿＾图９±壤微生物数贵的测定Ｆｉ．９Ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｅｔｅｍｇｄｒｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｏｉｌｍｉｃｒｏｂｉａｌｎｕｍｂｅｒ３．５．２±壤ＤＮＡ提取经１．０％琼脂糖凝胶电泳检测，结果表明：±壌样品ＤＮＡ无断裂的ＤＮＡ片段，条带单一且清晰，片段较亮，说明提取的ＤＮＡ浓度较高。 内蒙古农业大学硕±学位论文＾ｉｍＰＨｉｍＢＭｉｍ图１０主壤部分样品ＤＮＡ礙胶电泳图Ｆｉ．１０Ｇｅ！ｅｌｅｃｒｏｈｏｒｅｓｉｓｏｆＳｏｉｌＤＮＡｇｔｐ３．５．３±壌细苦ＰＣ艮产物的琼脂糖凝胶电泳定性检测一＾一图１１可苗看出，，步ＤＧＧＥ实验。，条带单且清晰无杂带可适用于下旧１１±巧部分样品细菌ＰＣＲ电泳图巧．１１Ｔｈｅｔｒ長ｅｌｅｃｒｏｐｈｏｅｓｉｓｏｆｓｏｉｌｂａｃｔｅｒｉｕｍＰＣＲ３．５．４ＤＧＧＥ圆谱分析主壌细菌群落ＤＧＧＥ图１２中可看出，，电泳条带数量较多条带亮度巧强。各处理间存在一定的差异，但也拥有大量巧同菌群。对團谱进行微生物多样性指数分祈，Ｈ指数，由表１０可知，加入椿轩为新鲜碳源后丰富度和化ａｎｎｏｎ均增加，加入＿菌剂的±壌多样性指数高于ＣＫ－１。对±壤细菌ＰＣＲＤＧＧＥ指纹图谱作相似性聚类分一，结果如图１２所示析，整个聚类图可＾划分为兰大类。〇０）单独类，０反１的兰＾一一－－－个处理聚集类，ＧＦＳ１８的１５ｄ与ＧＦＳ７２的三个处理聚集Ｆ类，ＧＳ１８的４５ｄ一和３０ｄ聚集在类。选择较亮的条带进行基因序列分析，分析结果见表Ｈ。 ３２玉米括巧低温降解菌剂降解效果的研究表１０±巧细菌微生物多巧性指巧Ｔａｂｌｅ．０Ｍｃ１ｉｒｏｂｉａｌｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｓｏａｃｔｅｉｌｂｒｉａ微生物多样性指数泳道１２３４５６７８９１０－－－－－－－处理ＣＫＯＣＫｌ１５ＣＫｌ３０ＣＫｌ４５７２１５巧３０巧４５－－１８１５１８３０１８４５丰富度１９２７２３２７２８３２２９２８３０３１ＳｈａｎｎｏｎＨ２．７６４３．１３１３．０４４３．：！—６９３．２２９３．：３６３３．１９７３．２４４３．２６４３．３３１？ｒ。細；＊巧靡賢扇霖欄ｒｉ＇茂诗＇；ｓｃ巧巧ａ换弄，‘沪ＣＫＯｊ齡．Ｉ切柳＾‘拉—一＾遍抗…；、枯以—丰Ｇ－Ｓ－。ＴＦ１８Ｉ．單羣转：Ｋ遍－如，Ｃ份１＊一ｒ：；１？＊？＾Ｉ心：—…，，？＾！＾广—－’９—Ｊｉ５。—气ｆＳ吝——劝气師Ｌ＿—ＧＦ－Ｓ７２．５＾醫圍１Ｓｈ画＾画Ｈ麵－謂画圍瞧圓ＩＬＩ心窓ＳＫＰ？漏ｊ画資琴＾＿。＾孫驴蝶．１二＜，￡：崩碱＾．图１２主琪细菌ｔｅｓｒＤＮＡＤＧ化聚类图Ｆ．ｉｇ１２Ｓｏｉｌｂａｃｔｅｒｉａ６ＳｒＤＮＡＤ说Ｅｃ１１１１巧ｅｒｉｎｇｃｈａｒｔ本研充分析了图１２中的７１条细菌群落ＤＧＧＥ特征条带，对切割后的ＤＧＧＥ条带进行连接转化，将连接效果检测呈阳性的菌液送至北京擎科公司迸行测序。将测序结果在ＮＣＢＩ数据库中进行比对，得到各序列的同源信息，如表ｎ所示。上壤中细菌类群主耍包括变形菌口（／Ｖ０，ｗ６？ｃ，ｅｒｉ。）、厚壁菌口（ｆｉｖｗｃｗａ）、拟杆菌口公－。Ｃ化ｒｏ５（＇沁化）。 内蒙古农业大学硕±学位论文＾１１ｒ表典型±巧样品细菌１６ＳＤＮＡ比对序列特征Ｔａｂｌｅ．１１Ｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｓｏｉｌｂａｃｔｅｒｉａｌ１６ＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅＰｈｙｌｏｇｅｎｔｉｃ条带ＤｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｉｄｅｎｔｉｔｙｇｒｏｕｐＡｃｅｓｓｉｏｎＮＯ．Ｂａｃ化ｍｖｕ８ｉ別Ｂａｃ化ｗｉｄｅｎｓ１ｉｄｅｓｆｇｃＵｕｓＡＴＣＣ４８２，ｃｏｍｐｅｇｅｎｏｍｅｌＯＯ％ＮＣ００９６１４．１—ｃｋ化ＰｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｈａＮＣ２ＡｉｄｏｖｏｒａｘｅｂｒｅｕｓＴＰＳＹ，ｃｏｍｅｎｏｍｅ９０％０１１９９２．１ｐｇ＿－Ｃｈｓｔｒｉｄｉａｌｅｓｅｎｏｍｏｓ．ＢＶＡ８３ｓｔｆ．ＵＰＵ９５，ｇｐ３ｃｏｍｐｌｅｔｅｇｅｎｏｍｅ９２％ＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓＮＣ＿０１３８９５．２－ｂ幻ｃ化ｒｉｃ４ＣｏｍａｍｏｎａｓｔｅｓｔｉＣＮＢ２ｃｏｍｌｅｔｅｅｎｏｍｅ５％Ｐｒｏ化ｏｔＮＣｔｏｓｅｒｏｎ，９０１３４４６．２ｇｐ＿ｔＰｒｔｔｉ５ＳｈｉｅｌｌａｓｏｎｎｅｔＳｓ０４６，ｃｏｍｐｌｅｅｅｎｏｍｅ９９％ｏｅｏｂａｃｅｒａＮＣ００７Ｉ３８４．１ｇｇ＿ｉｅｉ６ｃｏｍｌｅｅｎｏｍｅｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ６ＳｈｇｌｌａｓｏｆｗｅＳｓ０４，ｐ別ｇ９９％ＰＮＣ００７３８４．１＿ＣｒｔｉｔＦｉｒｍｉｃｕｔｅ７ｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｓａｃｃｈａｏｌｙｃｕｍＷＭＩ，ｃｏｍｌｅｅｅｎｏｍｅ９５％ＮＣ０１４３７６．１ｐｇ＿ｉｉｔ８ＥｕｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｅｃｌｅＴＣＣ３３６５６ｃｏｍｌｅｔｅｅｎｏｍｅ９５％ＦｒｍｃｕｅＮＣｔａＡ，０１２７８１．１ｐｇ＿ＨｅｌｉｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｏｄｅｓｔｉｃａｌｄｉｍＩｃｅｌ，ｃｏｍｐｌｅｔｅ９ｅｎｏｍｅ９６％ＦｉｒｍｉｃＷｅｓＮＣ００３３７２ｇ—１．－ｃｔｅｒｏｉｔＢｃ％ｆｔＢａｄｅｅｓＮＣ１０ｔｃ化ｒｏｉｄｅｓｈｅｉｃｏｅｎ啟ＰＩ０８，ＣＯ饥ｅｅｅｎｏｍｅ９Ａ％０４９３３．ｇ１１ｇｐ＿ｖｒｉｔｅｏｔＣｅｌｌｉｂｏａｏｎｉｃｕｓＶｅｄａ１０７ｅｎｏｍｅ９３％Ｐｍｂａｃ化ｉａ１１，ｃｏｍｌｅｔｅＮＣ００９９５．ｊｐｐｇ１１—１２Ｒａｈ打ｅ！ｈａｕｏｔｉｌｉｓＨＸ２ｍｋｔｅｎｏｍｅ８８％Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ，ｃｏｐｅＮＣ０１７０４７．１ｇｇ＿１３ＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｍＷＭＩ，ｃｏｍｐｌｅｔｅｇｅｎｏｍｅ９９％ＦｉｍＵｃｉｉ化ｓＮＣ—０１４３７６．１－－ｉｉｍｉｉｔ１４Ｒｏｓｅｂｕｒ幻ｆｔｏｎｉｉ２！８３ｉｅ打ｏｍｅｃｕｅｓｊｎｓＡ，ｃｏｍｐｅｔｅ９８％ＦＮＣ０１５９７７．１ｇ—Ｎｏｖｏｓｐｈｉｎｏｂｉｕｍｓ．ｍＹｍａｉｎｃｈｒｏｍｏｓｏｎｔｅｉｇｐ１５ｃｏｍｌｅｔｅｒｅｌｉｃｏｎ９９％Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ０巧５８０ｐｐＮＣ，１＿－ＰＳｈｔｉ１ｉｎｏｂｉｕｍｓ．ＳＹＫ６ＤＮＡｃｏｍｌｅｔｅｅｎｏｍｅ９９％ｒｏｔｅｏｂａｃｅｒａ６，ｐＮＣ０１５９７６．１ｐｇｐｇ—Ｚｓ．ｙｍｏｍｍｏｂｉｌｉｓｓｕｂｓｍｏｂｉＵｓ之Ｍ４，ｃｏｍｌｅｔｅｏｍｐｐ１７ｇｅｎｏｍｅ９８％ＰｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａＮＣ００６５２６＊２＿ ３４玉米稳巧低温降解菌剂降解效果的研究４结论－－－（１）探讨其中两姐玉米程杆低温降解复合菌系ＧＦＳ７２、ＧＦＳ１８、ＧＦＳ７７接种于±壤模拟还田福杆的促腐效果’Ｃ。结桌表明：在ｌＯ条件下，施加复合剂ＧＦ－Ｓ７２－－。、、ＧＦＳ１８、邱Ｓ７７提高玉米释巧的降解效果４５ｄ降解率分别为５１．５０％、－－－３７，显、１、．５９％３４．７４％著高于ＣＫ１４５ｄＧＦＳ７２ＧＦＳ８ＧＦＳ７７量分；纤维素残余２、、别从培养前的．４４ｇ降解到１．１２１．３５１．３０ｇ，半纤维素残余量分别从１．３２ｇ降解到０．７２、０．８７、０．８２ｇ，木质素残余量分别从０．４２ｇ降解到０．２７ｇ、０．３１ｇ、０．２９ｇ，思著高于ＣＫｌ。（２）腐殖质碳组成、主壌酶活均高于未添加复含菌系的主壌。（３）－Ｓ７２ＧＦ－１８本试验研巧了施加ＧＦ、Ｓ菌剂后主壤微生物多样性，从细菌、真菌、放线菌Ｈ大菌种数量上看，施加复合菌显著高于不施加复合苗的±壤。利－ＤＧＧＥ用ＰＣＲ技术研巧±微细菌微生物多样性，结果表明施加括巧复合菌剂的止壤ＤＮＡ丰富度和Ｓｈａｎｎｏｎ指数高于ＣＫ０（原始±壌）、ＣＫ１（不加菌）。通过切胶回收条带、连接转化及测序分析后，主要有细菌类群主要包括变形茜口’’＇戶《化〇６。。似７。打ｆ、。，厚壁菌１］ｗｉｉｃＭｅｓ）拟杆菌＾（加。化／Ｗ冰ｔｅｓ（）（） 内蒙古农业大学硕±学位论文＾第五章讨论－－１本试验对己经筛选出来的３５个菌系，进步选出呈个稳定性强、降解效果好的，复合蘭系，进行液态发酵试验和模拟还田试验目的是对其降解特性和降解效果进。行研究，为菌剂的开发提供技术支撑２液态发酵条件ｆ测定了三个复合菌系的生长曲线、ｐＨ值、纤维素酶活、稻巧降解°，Ｃ液态发酵率、木是巧维素组成化．动态变化复合菌系在培养过程中在ｌ〇条件下，Ｌ－－－施加复合？Ｕ可ｊＵ夹速适应新的环境，ＧＦＳ７２、ＧＦＳ１８、ＧＦＳ７７培养１５ｄ降解率分〇－－２５６０１４１％Ｋ７２、－１、２Ｌ２０２．，显ＧＦＳＧＦＳ８、ＧＦ７７、ＣＫ别为．／〇％、著高于Ｃ；纤４５降解到０．３２、０维素残余量分别从培养前的化．３２、０．３３、０．３９半巧维素残余ｇｇ；量分别从化２７降解到化１７、化１９、化１８、化２木质素残余量分别从化０９ｇ化；ｇ降解到、０．０８０、．．其中纤维素、木质素残余量显著离于ＣＫ。在国内对中．０６化０５、００６：６７ｆｌ高温稻杆降解菌报道较多，钱玉婷在常７ｄ降解率为２９．％％刘爽温条件下培养；°ｔＷ在中低温条件１５Ｃ）下培养１５ｄ降解率为５８％。本试验在试验过程中严格控制温（’可Ｗ适应北方低温环境条件的稻杆降解复合菌系度（ｌＯＣ，目的是找到。）３模拟还田试验中，试验复合菌系对玉米梧巧的４５ｄ内降解率的变化。研究发现施－加外援菌系能够快速增加稻杆失重率，加快括巧的降解，其中ＧＦＳ７２４５ｄ降解率分别为５１．５０％，效果显著。ｓ°ｆ］３５Ｃ条件下培养Ｈｄ，能分解稻行５１６％、小麦洁轩４４７％、玉李培培等人．．米４５－：賴巧０．８％。在１２５Ｘ范围内，刘爽等人在程轩翻埋及覆盖还田盆鉢模巧实验研究６９ｔｌ－表明，程巧失重率达５０６９％穆春，组合菌对水稻和玉米稻巧的降解效果较好；＇ＰＷＹＭ－雷等人的菌剂１在２０ｄ后降解率为３６．９％。－可见，研巧多集中在高温和中低温１５２５Ｃ，对于１（ＴＣ条件下研究玉米（條件下稻杆复合菌系的报道较少。４试验研究了±壤微生物多样性，从细菌、真菌、放线菌Ｈ大菌种数量上看，施加Ｒ－ＤＧＧＥ技术研究主微生物多样性复合菌显著高于不施加复合菌的±壤。利用ＰＣ，结果表明施加趕轩复合菌剂的±壤ＤＮＡ丰富度和Ｓｈａｎｎｏｎ指数高于ＣＫ０（原始止壤），主要包括变、ＣＫ１（不加茜）。通过切胶回收条带、连接转化及测序分析后形菌口Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、厚壁菌ｎ（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）、拟杆菌口巧ａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）。（５对于趕杆纤维素降解菌的研究越來越受到重视，这堅菌系的利用可Ｗ将稻杆资源充分利用，具百广阔的发展前景。但是，关于试验中纤维素降解菌群还有许多研究 ６玉米稳巧低溫巧解菌剂降解效果的研究Ｊ需要进一步开展：ＧＦ－Ｓ７２（１），本试验模拟低温田间的玉米稽杆降解效果．其中效果显著后期应继续应用于大田进行试验，为稻巧还田提供理论依据。（２）对试验中的高效复合菌系的主要优势菌系组成成分的研巧。一（３）对试验中的高效复合菌系进步加工成制剂，便投入生产。 ．内蒙古农业大学硕±学位论文＾王年的时光轮眼而逝，在这巧究生这段曰子里收获了化多，有努力耕扭的收■苦辣都在这段里体现获，有试验成功的喜化，酸對日子。首先我感谢我的老师们，是他们对我的愚指导，让我顺顺利利的完成研究生生涯。高聚林老师让我学会了什么是认真，他严谨治学的态度，精益求精的工一习的嫁样一作作风．本研究从研的选题，每次开会的修订、开题、，是我终身学。到最后的完成，都是在导师指导下完成的在试验过程中，得到孙继颖、王志刚、、倒、王振、苏治军和胡树平等课题组的老师们的帮助他们不仅于晚芳干朝鲁，从试验、生活上帮助了我，而且教会了我怎么做人。在此，我跟我的老师们说声谢谢．男外我感谢巧有玉米中的同学们一块儿使的团队精，大家互相帮助，有劲神让我感动．感谢萨如拉师姐提供是试验菌剂，感谢＋格尔师姐在试验上的帮助，心＇感谢宿舍的姐蛛们的关和爱折，谢谢化们。 ８玉米稳巧低温降巧茵剂降巧效果的研究Ｊ参考文献１高利伟，马林，张卫峰，等．中国作物程巧养分资源数量估算及其利用化况口］．农业工程２００９２５７－：１７３１７９．报，，（）２张洁，方汉．玉米程种利用存在问题及解决对策ｍ．玄牧与饲料科学，２０１４，３５（５）：１０１．３刘海静．小麦巧种高效降解菌的筛选及应用效果的研究脚．中国农业科学院，２０１２．４胡雪竹，宛莉，等．程种厌氣发酵条件优化的研究机天津农业科学，２０１０，１７（４）：１０８．５ＰｅｔｅｒｓｓｏｎＬ，Ｒｖｉｅｎｌ，ＯｋｓｍａｎＫ－Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄ化ｅｒｍａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｐｏｌｙ（ｌａｃ＂ｅａｃｉｄ）／ｃｅｌｌｕｌｏｓｅｗｈｒｉｉ－ｉｓｋｅｒｓｎａｎｏｃｏｍｐｏｓｉｔｅｍａｔｅａｌｓＪ．ＣｏｍｏｓｔｅｓＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏ，２００７；ｌ２８．［］ｐｇｙ６韩讳，轰俊华，李瑚，王欣英进田程巧配施外源巧维素酶效应研究．生态环境，２００５，１４（６）：９３６－９４０．一业的影响分析业机械学７辜松．．，刘立意，小松崎将覆盖作物对上壤物理特性及旋耕作农５＊报．２００５．３６：４１４５．（）８张晶，巧种还田上壤中与奸维素降解相关的微生物的分子生态学研究．［Ｄ】．上海：上海交通大学０７．＞２０９ＬａｗｆｏｒｄＨＱＲｏｕｓｓｅａｕＪＤ．Ｃｅｌｌｕｌｏｓｉｃｆｕｅｌｅｔｈａｎｏｌ．Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｄｅｓｉｇｎｓｗｉｔｈｗｄ－ｒｅｃｍｏｍｏｎａｉｌｔｅＡｎｄｏｍｂｉｎａｎｔＺｓｍｏｂｉｌｉｓＪｌｉＢｉｏｈｉｙｐｙ［．Ａｐｅｄｃｅｍｓｔｒａｎｄ］ｐｙＢ－ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００３．４５（３）；１０５１０８，４５７４６９．１０陈洪章．程种资源生态高值化理论与应用［Ｍ］．２００６．北京化学工业出化社．１１左玉辉，徐曼，张亚平等．农村环境调控［Ｍ１．２００８．北京郝学出化社．１２窝祥照，马文奇，马常宝等．中園作物祐种资源利用现状分析阴．华中农业大学学００２２－２４４报三。４．，爬）２００６－．微生物处理利用诘杆的研究进展化中国沼气３５１３陈子爱，邓小晨．．２４０）：３１．－１４石．我国农作物祐种的综合利用技术进展町中国沼气２００５２３１１１４．磊赴由才杂晓利，，：，口）物枯巧的综合利用－１５王殿有．农作．农业科技与装备［Ｊ．２０１０２：６７６９．］（）１６吴妓：，朱钟麟．程种覆盖还田对主壤理化性质及作物产量的影响．西南农业学报２００６－１９６ｙ１９２：ｌ％．］，，（）１７韩讳，轰俊华，李讽，王欣英．还田转巧配施外源纤维素酶效应研究．生态环境－，２００５１４６：９３６９４０．，（）一理及旋业机械学１８辜松，刘立意，小松峰搏．覆盖作物对上壤物特性耕作业的影咱分析．农２００５＂报．３６５４１４５．．（）：１９张晶，程种还田上壤中与纤维素降解相关的微生物的分子生态学研究．［Ｄ］．上海：上海交通大学三００７．２０黄茜，黄風洪，江木兰等．木席素降解茵的筛选及混合菌发酵降解转巧的研究［Ｊ］．中国生物工程２００８－杂志．２８口）：６６７０．，－．２００６２１２２２１管叔琪．安徽农学通报１：．，汪建来农作物程巧综合利用的难点与对策，口），２２韩讳，轰俊华，李观，王欣英．还田程巧配施外源巧维素酶效应研究饥．生态巧 内蒙古农业大学硕±学位论文＾６９３６－９４０２００５１４．境：，，（）．业科技２３胡海生枯种还田的作用与方法口．现代农．２００８（６：１巧．］，）－２４汪耽汪讳．我国程巧资源开发利用综述机．资巧开发与市场２００８２４１１１１１：００９０２．，，，（）２５洪餐来滿幼璋，黄锦法，等．巧种全量直接还田对上壤肥力及农田生态巧境的影响研究Ｊ］．新江［２００３２９－大学学报（农业与生命科学化）６：６２７６３３，，，（）桐赵紫巧元仿李保国．枯种还田对王壤氛素转化的影响２６李贵．植物营养与肥料学报，，黄，－２００２８２；１１．６２６７，（）２７秦于縛．玉田对东北徽农业科，列子琪，曾庆亚，等米程巧还黑上地生态效益的影响Ｊ．安［］－学２０１２４０１８：９７１１９７１４．，，（）、２８元卿．程Ｉ巧原位降解菌选育与应用及其上壤菌辞分子多态性变化Ｄ．南京：南京农业欠［］００４．学，２２９奠朝凤，王建新，陈兴位．农作物祐巧综合利用现状与还田技术［Ｊ］．科技创新导报，２００８，（０９）：２５．田田．玉米巧巧还財间和还方式对上壤肥力和作物产量的影响机３０颜丽．上壤通，农杨，赁靖－２００４０２１４３４８．报：１，，（）胡县农作物程种利用现化及综合利用对策Ｊ３１咸阳．建．，冯亚军，颇开联等安徽农学通巧上半月［］２０５－１刊）１０，（０）：１２７２８．，关于程杆发巧饲料研究与开发若干问题的思考‘‘３２王建华．．全国生物肥料．生物饲，白韵如首届＂大会专题报告１－１１９９８０５料研讨会，；ｉ生物－３３文少白李勤奋等．１；１．得降解纤维素的研究概化２００２６：２３１２３６．，中国农学通报，，阳）ｓｒｕｃｕｒｅｎｄｎｃｔ－３４ＴｈｕｒｓｔｏｎＣＦ．Ｔｈｅｔｔａｆｕｉｏｎｏｆ扣ｎｇａｌｌａｃｃａｓｃｒｏｂｉｏｏ１４０１．防Ｍｉｌ９９４１：９２６［化ｇｙ，，３ｒｓｓｏｎＩｖＫｖｉｅｎＩａｎｄＯｋｓｍａｎＫ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｏ５Ｐｅｔｅ，ｄ化ｅｒｍａｌｒｏｐｅｒｔｉ份ｏｆｌｌａｃｉｃｃｉｄ／ｃｅｌｕｏｅｐｔａｌｌｓｐｙ（）ｏｔｅｍａｔｅｒｉａｓ－ｗｈ．ｏｍｏｓｅｓｉｓｋｅｒｓｎａｎｏｃｏｍｐｓｉｌＪＣｐｉｔＳｃｉｅｎａｎｄＴｅｃｈｎｏｏ２００７：．［］ａｌｇｙ１２８，３６崔代生物技术导论．北：９８．礼嘉．现［Ｍ］京高等教育出版社１９，３７刘科．诘种饲料加工与应用技术［Ｍ］．北京：金盾出版社，２００１．３８史英．巧巧降解的微生物学机理研究及应用进展，蒋爱芹，我传超，等Ｊ．微生物［］学杂－志２００２２２１：４７５０．，，（）．３９韩继福．，王建兵，高宏伟应用微生物接种剂和酶制劑调制玉米转巧的研究Ｊ安徵农业大学学［］－２００２：２９２：１７报１７３７．，，（）４０．２０〇２．枯巧史央爱巧，戴传超，陆冷降解的微生物学机理研究及应用进展．，巧Ｊ微生物学杂［］－：志．２２１）４７５０．（止壤和环境微生物学－４１．北：北陈文新．１９９０．［Ｍ］京京农业大学出化社為１９４．４２刘、北京梯．程杆坪维素高效降解真菌的筛选Ｄ鉴定及其汗维素诲基因克隆．业：中国农种学［］院，２０腑．一４３刘东波高培基－．纤维素诺卡＆菌的个新菌Ｕ］微生物学报１９９０３１，，０：７０７２，（，）４４钱玉婷．转巧常温降解菌的筛选及其生长特性研究．．Ｄ南京农业大学２００９．［］， ４０玉米巧巧低温降解菌剂降解效果的硏究４５及其对玉米程种降解效果的影响加工过郭红伟．木质奸维素酶高产菌株的簿选［Ｊ．生物］程，２０１２，１０５：３９．（）４６董硕．低湿坪维素酶的研究进展乂物技术通报２０１１３７．［化义４７顾玉珍－．２００２９７９８，李宁巧助降解微生城菌剂应用效果巧究满农业科枝，斯．；激生物菌前对小麦枯种还田效果实验－４８李玉春瑞伟皇传华．东农业科学，２００氏６５２５３．，列，，等（）；４９于建光，常志州，黄红英，等．转巧腐熟剂对上壤微生物及养分的影响．业坏化科学学２０－报，１０之％３）；５拍５７０．５０刘保平，王宏燕．降解枯巧的真巧促进玉米苗期生长．旦届全国农业环境科学学术研讨会论文００９－集，２，（１０）；８６０８６６．５１张庆华．转种降解菌的筛选及模拟田间应用效果分析肿微生物学杂志，２０１０７６：１０１．，（）玉田中业－．转Ｊ．山西科学２０１３４３巧３５７．５２顾振新巧腐热剂在米转种还的效果［］农，，１）：（５３刘爽．中低温程巧降巧菌的绵选及其祐种降解效果巧究［Ｄ巧堅农业科学院之０１１．５４裴宇航降解祐种微生物菌种的筛选义搞笑菌群的构建田］．天津理工大学，２０１２．５５郭红伟．木质幹维素酶高产茵株的筛选及其对玉米巧巧降解效果的影喻饥．生物加工过程之０口．１０（５）４０．５６積春雷玉米祐种腐ＹＭ－．解复合菌系１的构建及其降解性能研究网．河北农业大学０１３．，２５７主上－周礼惜．．９８０５：３７３８．，张志明壤酶的测定方法壤通报机，１，５８赵全坡９８６３３８－岩．上壤礎酸酶测定方法的探讨，上滚通报［Ｊ］１１７：１１４１．，姜，，（）＂５９王建华，白韵如．关于巧种发酵饲料研究与开发若干问题的思考．全国首届生物肥料，生牺ｎ大会专题报告８－饲料研讨会，１９９；１０１５６０－玉粪伟．长期施肥对小麦米作杨系统上壤腐殖质组分殘和氮的影响．，颜晚元，等植物营养与肥００９－料学振２，１５（巧：１２４５１２５２张晋京０８３１２２９－６１，窦森．主壤胡敏素研究进展．生态学报机；２０１２３化，口化６２江泽普，黄绍民，韦广泼，等才同免讲模式对水稿产量及上壤理化性化的影响化中国农学通２３２３说－３６５１．报必）０７：，（）－６３闻颖．五种农药对止壤转化酶乐性的影响化中国环境种学２〇〇４２４：５８８５９１．，袁星，，０）６４黄玉棒獎后保．氮沉降对杉木人工林上壤呼吸与主《巧维素酶活性的影响阴．福建林学院学２００９２２－：９７１０２．报，，％）６５耿玉清，白翠霞．上壤裤酸醉活性及其与有机碍组分的相关性［Ｊ］．北京林业大学学２０朋１１－１３９１４１報，：．口），６６則淑英，不同施肥对西北半干旱区上壤腺酶和主策氮素的影响及其相关［Ｊ］．水上保持学报．２０１０２４１：２２０．，（）６７北羊草革原主要植物群落上策过氣４氣轉活性的研究［Ｊ．鲁萍．东］应用生态学，郭鑑肋与２－１３６乂７５６７９．报，２００，（）培培一田程种的促腐效果阱中国农业大学学报６８李裸宝文．纽程种分解巧群的稳定化及对还，， 内蒙古农业大学硕±学位论文＾＾２０－１１６５４５４９１：，（）汾刘夾．中低溫祐巧降解巧的筛选及其程种降解效果研究网．中国农业科学院２０１１．，７０ＹＭ－巧春取玉米程巧巧解复合菌系１的构建义其降解性能研究［Ｄ］．河北农业大学２０１３．， ２玉米巧巧低溫陈解菌剂降解效果的研究Ｊ作者简介１９８高琳，汉，９８６日出．２００８９，女族年月生于内蒙古呼和法特市年月考入天津衣学晚园爸系，学习林学专业，２０１２年从天津农学院毕业并获待农学学去学位，同年考入內蒙古一农业大学农学院攻读作物栽培学与拼作学专业巧去学位。硕去研究生巧间从第作者发表论文《玉米稽种低温降解菌系的生长特性义降解效果的研究》将在《內蒙古农业科枝》刊出。