猪血清中ppv的分离与鉴定及培养条件的优化

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1、．＂．．．．—＇．游，考《聲＾逢全日制硕±专业学位论文猪血清中ＰＰＶ的分离与鉴定及培养条件的优化＇巧＇研究牛姓名吴海超指导教师肖朝庭自巧外指导赦师李暮良学位类型兽医祝壬，学科领域＇ＨｈＩ＾＾ｋ：研究方向畜禽疫病防控ＢＭｆｃ—Ｈ＇－二０五年六月’．－，Ｓ＾＾＾．：／ｙ．：：，：４ｖ＞；；：八＾‘：＞／ｙ：，分类号Ｓ８５５．３密级ＵＤＣ单位代码１０５３７朔斋祭來夫＃全日制硕±专业学位研究生论文

2、猪血清中ＰＰＶ的分离与鉴定及培养条件的化化Ｉｓｏｌａｔｉｏ打ａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＰＰＶｉｎｓｗｉｎｅｓｅｒｕｍａｎｄｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｖｉｒａｌｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ研究生姓名吴海鹿指导教师肖朝庭副指导教师学位类型兽民硕±学科领域预防兽民研究方向畜禽疫病防控论文答辩日期２０１５年６月６日答辩委员会主席程天印除玄评阅人邱立新、卿上田、余兴龙二—０五年六月独剑性声明本人声明所呈交的论

3、文是我个人在指导老师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南农业大学或其它教育机构的学位或化一书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名＇：嫁时间；之〇＆年反月。日关于论文使用授权的说明本人完全了解湖南农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和电子稿，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用

4、影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意湖南农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容，并同意将由此产生的收益捐赠给学校教育基金会用于发展研究生教育。（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）研究生签名：：方咬年时间１＾月／文日导师签名：时间；兴皆年月。日摘要摘要一猪细小病毒是种主要引起母猪繁殖障碍的病原，怀孕母猪感染猪细小病毒可能会出现返情、流产、产死胎、产木乃伊胎、产弱仔等临床症状。除了能引起母猪繁殖障碍外，猪细小病毒还能引起哺乳仔猪

5、非化胳性也肌炎、仔猪渗出性皮炎、育肥猪间质性肾炎等疾病，另外与猪圆环病毒共同感染能够加重仔猪多系统衰竭综合征。本实验室从一育祀猪早、中期生产水平较差的猪场收集不同年龄段的育肥猪血清２１４份，用ＤＮＡ提取试剂盒提取血清中的ＤＮＡ，设计猪细小病毒特异性引物对２１４份血清ＤＮＡ进行核酸检测，并选取其中７份经ＰＣＲ检测为猪细小病毒阳性的血清用ＳＴ细胞进行病毒分离，盲传３代后，将病毒液冻融王次，用猪细小病毒特异性引物对一７份血清接种的细胞液进行ＰＣ民鉴定，其中份血清检测到了目的条带。确定分离到一－

6、，命名为ＰＰＶ１６ＷＳ。通过观察细胞病变株猪细小病毒、测定血凝效价、分析部分全基因序列等方法研究病毒特性。结果显示，该病毒传至第５代能够出现较稳定的细胞病变８ＢＫ收，血凝效价能达到２，对其部分全基因组进行测序发现与Ｇｅｎａｎ录的传统的ＰＰＶ序列同源性较高，其中与２０１２年时乐分离的化株同源性最高，法到了９９．０％，１ＰＰＶ表明６ＷＳ是。本研究建立检测ＰＰＶ实时巧光定量ＰＣ民方法，为ＰＰＹ病毒的初步定量检测奠定，主要包括了基础。并对实验室分离株１６ＷＳ进行传代对其培养条件进行摸索：ＳＴ细

7、胞生长状态、病毒解育时间、细胞密度、病毒接种量、病毒收毒时间、培养体积、有无二氧化碳等条件，希望通过优化病毒培养条件来提高病毒滴度。结果显示：将生长６－４化的ＳＴ细胞传代１化后待细胞密度为６０％（６．７５ｘｌｃｅｓ／ｍ，进行分步接毒０．〇ｌｌｌ）时，７１２ｍ５解育比，接种量为０ｃｏｐｉｅｓ／ｍｌ，六孔板培养体积为ｌ，放置％二氧化碳培养箱培９养７２ｈ，病毒滴度最高，能够稳定在３．５９Ｘ１０ｃｏｐｉｅｓ／ｍｌ左右。：猪细小病毒分离关键词；鉴定；巧光定量ＰＣＲ；培养条件；Ｉ湖南农业火学硕」

8、－：（全ｎ制专业硕±）学位论文ＡｂｓｔｒａｃｔＰｏｒｃｉｎｅＰａｒｖｏｖｉｒｕｓ（ＰＰＶ），ｏｎｅｏｆ化ｅｐａ化ｏｇｅ打Ｓｃａｕｓｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｆａｉｌｕｒｅｏｆｓｏｗｓ，ｗｈｓｅｓｔｌｍｕｍｍｃａｔｏｎｅｍｂｏｎｃｅａｔｈａｎｄｔ．Ａｒｔｉｃｈｉｓｒｅｏｎｓｉｂｌｆｂｒｉ化ｏｒｎｉｆｉｉｒｉｄ