猪痢疾短螺旋体的分离、鉴定与血清抗体elisa检测方法的建立

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1、ISOLATl0N，IDENTIFICATl0NANDDEVELOPM[ENTANELISAASSAYFORSERUMANTIBODIESDETECTIONOFBRAcHYSPIRAb哩oDYsENTERlAEByKouYahuiSupervisor：Prof．Dr．LuChengpingProf．Dr．SunJianheADissertationSubmittedtoNanjingAgriculturalUniversityInpartialFulfillmentoftherequirementsFortheMasterDegreeofAgronomyCompletedinMay2012Co

2、mmencementinMay2012原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。⋯一c⋯雠：留碜坪驯埤加阳学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、

3、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密一(请在以上方框内打“4”)学位论文作者(需亲笔)导师(需亲笔)签名：占月17"日6月p日目录目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．IABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯III第一篇文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1猪痢疾短螺旋体及其诊断技术的研究进展1猪痢疾病的概况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．12B．hyo诊断技术的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．23综合防治⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．54本项目的研究意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7第二篇试验研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11第一章猪痢疾短螺旋体的分离与鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．111材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．112结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯173讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．25第二章猪痢疾短螺旋体ghlp30．7蛋白的克隆表达、纯化与间接ELISA方法的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．271材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．282结果⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯353讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．43第三章猪痢疾短螺旋体血清抗体的ELISA检测方法的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．451材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．452结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．463讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．51参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．53全文总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．55附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．61中文摘要猪

6、痢疾短螺旋体的分离、鉴定与血清抗体ELISA检测方法的建立摘要猪痢疾(SwineDysenterySD)是由猪痢疾短螺旋体(Brachyspirahyodysenteriae,B．hyodysenteriae,B．hyo)感染引起的，以大肠黏膜卡他性、出血性及坏死性炎症、腹泻、黏液性或黏液出血性下痢为特征的猪肠道传染病。本病呈世界性分布，一旦侵入猪群，长期存在不易根除，仔猪的发病率和死亡率都较高，育肥猪患病后生长速度下降，饲料利用率降低，给养猪业带来巨大的经济损失。目前，猪痢疾常用的诊断方法主要依赖于病猪临床症状和组织病变的观察、以及PCR检测技术，但由于不同感染猪群的临床症状和组织病变差异较

7、大，使临床诊断举步为艰；PCR检测只能确定样本中是否存在B．hyo的核酸，但不能获得活的病原体，因此迫切需要建立一套快速又准确的诊断猪群感染B．hyo情况的检测方法。利用PCR检测临床样本中B．hyo的保守的NADHoxidase(，z似)基因，同时选择鉴别培养基BAM．SR(BloodAgaroseMediumwithSpectinomycinandRifampicin，改良的含有壮观霉素和利福