酵母菌的分离及培养条件的优化

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1、第二组实验设计型实验酵母菌的分离及培养条件的优化一、目的要求1、掌握培养基的配置及灭菌方法，能够正确的配制培养基并在高压灭菌锅内进行灭菌。2、熟知培养基成分的选择原则，能够对培养基的成分和配比进行优化设计。3、掌握固体斜面、平板的制备技术，能够通过划线、涂布等方法分离菌种。4、熟知影响酵母菌生长繁殖各种培养条件，能够对摇瓶培养条件进行优化设计。5、了解酵母菌培养过程的代谢变化规律。掌握酵母菌培养过程参数的测定和分析方法。二、基本原理酵母菌是单细胞真菌生物，具有很高的营养价值，特别是含有较多蛋白质、B族维生素、核酸和矿物质，同时也能产生一些保健功能活性物。因酵母属于简单的单

2、细胞真核生物，易于培养，且生长迅速，被广泛用于现代生物学研究中。是遗传工程研究过程中常用的受体菌种。从自然界或商品中分离纯的酵母菌株，通常采用平板或斜面涂布划线法。这两种方法简单有效，是实验室分离纯化菌种常用到的方法。在发酵过程中定时地取样测定，包括对菌体进行镜检、测定不同时期发酵液的菌体浓度、残留的还原糖等参数，动态地了解发酵过程中过程变量的变化，分析菌体生长、基质消耗、产物生成的速度，研究发酵动力学，为生产中优化培养条件提供数据依据。三、实验材料（一）菌种：从安琪酵母中分离的酵母菌（二）培养基基础培养基YPD：酵母浸粉1%蛋白胨2%葡萄糖2%固体培养基再加琼脂2%优化

3、N源培养基：酵母浸粉1%(NH4)2SO42%葡萄糖2%；酵母浸粉1%(NH4)2SO44%葡萄糖2%；酵母浸粉1%NH4NO32%葡萄糖2%；酵母浸粉1%NH4NO34%葡萄糖2%；酵母浸粉1%NaNO32%葡萄糖2%；酵母浸粉1%NaNO34%葡萄糖2%；（三）仪器设备超净工作台，756型分光光度计，旋转式摇床，恒温培养箱，全自动灭菌锅，三角瓶、涂布器、移液管、平皿等玻璃仪器。（四）试剂酵母浸粉、蛋白胨、葡萄糖、琼脂(NH4)2SO42%、(NH4)2SO44%、NH4NO32%NH4NO34%、NaNO32%、NaNO34%等；裴林试剂甲液、裴林试剂乙液；NaOH溶

4、液、HCl等。四实验内容1、分离单菌落（1）实验物品灭菌仪器：包扎9个移液管、9个涂布器、9个装有9ml蒸馏水的试管、16个平板、液体：3g酵母浸粉1%、6g蛋白胨2%、6g葡萄糖2%，配成300ml溶液，取240ml溶液平均分装两个三角瓶中，然后每个三角瓶放入2.4g琼脂，剩下60ml为液体培养基，然后将以上设备拿去灭菌（2）划线涂布超净台上：1、把240ml的培养基分别倒入15个平板，每个平板为12~13ml，平板分别标10-2~10-10，还有倒一个斜面2、取1ml的菌原液进行稀释梯度为10-3~10-103、划线涂布划线为原液从10-2~10-7；涂布从10-3~

5、10-10用对应的稀释梯度液，10-2用原液涂布2、种子培养挑取单菌落接至种子瓶，进行种子培养培养条件：将250ml三角瓶装培养基60ml放入摇床，将转速为180r/min,温度为30度培养时间:12月4号早上10:37到12月5号早上8:47十个小时左右氮源的优化方案1.常见的有机氮源:(NH4)2SO4.NH4NO3.NaNO32.准备7个三角瓶分别装入以下培养基然后定容至50ml1.酵母浸液0.5g(NH4)2SO41g葡萄糖1g2.酵母浸液0.5g(NH4)2SO42g葡萄糖1g(2)1.酵母浸液0.5gNH4NO31g葡萄糖1g2.酵母浸液0.5gNH4NO32

6、g葡萄糖1g(3)1.酵母浸液0.5gNaNO31g葡萄糖1g2.酵母浸液0.5gNaNO32g葡萄糖1g3.对比试验:酵母浸液0.5g蛋白胨1g葡萄糖1g4.配置完毕调PH值PH等于5为准确包三个移液管然后将以上培养基一起拿去灭菌接种培养将种子液按9%的接种量接种到以下发酵瓶中（NH4）2SO42%+5ml种子液（NH4）2SO44%+5ml种子液NH4NO32%+5ml种子液NH4NO34%+5ml种子液NaNO32%+5ml种子液NaNO34%+5ml种子液蛋白胨+5ml种子液培养时间9：20条件180r/min30℃的摇床测种子液的OD值将种子液稀释10倍，以YP

7、D培养液为标准液测其OD值测得OD值17.2%T取样两小时后（11：20）PH值均为6OD值:稀释10倍原液(NH4)2SO42%0.117A1.018A(NH4)2SO44%0.105A0.863ANH4NO32%0.097A0.889ANH4NO34%0.061A0.830ANaNO32%0.130A0.845ANaNO34%0.143A0.836A对照0.178A1.180A测发酵瓶的PH值OD值及残糖量一小时后（12：30）PH值均为5OD值稀释原液（NH4）2SO42%0.210A1.066A（NH4）2SO44%