高产乳糖酶酵母菌筛选、培养基优化及酶的分离提纯

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1、内蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：煎盔叠日内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属内蒙古农业大学。本

2、人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：日期：摘要洲帅㈣IIIl

3、㈣l㈣1㈨lY2600748选取分离自内蒙古锡盟地区酸马奶酒中的14株酵母菌，通过定性、定量测定其产酶能力研究了其产乳糖酶特性。经初筛复筛后筛选出一株高产乳糖酶菌株J2，并对其培养基通过单因素及正交试验进行了优化。在优化所得

4、培养基条件下对J2产酶及生长规律进行了研究，在此基础上对粗酶液进行了酶的分离纯化的研究。初筛高产乳醣酶菌株利用x，gal和ONPG发酵管定性试验，结果表明两种定性方法结果一致，最终获得8株产酶菌株为J2、J8、J13、J14、J16、J20、J21、J24。此外，两种方法一致也表明ONPG微量生化鉴定管法同样可以用于鉴定真菌是否具有产乳糖酶能力。复筛通过测定8株阳性菌胞内及胞外酶活力，结果显示J2与J2l发酵上清液酶活力达到140．9U／ml，55．24U／ml，而其它菌株酶活力均较低。同时运用冰浴超声波、．80℃冻融三次及．20℃过夜三种方法破壁对J2与J21的产酶方

5、式进行了研究，以排除破壁方法的影啊。结果表明J2、J21的产酶方式确为胞外分泌。通过对MI培养基碳源、氮源和金属离子种类及添加水平进行单因素试验后做了正交试验，得到最利于产酶配方为：乳糖与蔗糖以l：I加入，含量共为1％，尿素与蛋白胨以3：7加入，含量为O．5％，酵母粉1％，MgS04为O．05％。培养基优化后J2的产酶能力从140U／mL提高到了400U／mL以上，增加了将近3倍。后又在优化所得培养基中对J2的产酶及生长规律作了研究。结果表明J2在24h后开始产酶，36h达最高，至60h后发酵液中酶活力基本降为0。通过对不同饱和度的硫酸铵盐析效果的测定后，确定55％饱和

6、硫酸铵为最佳饱和度。粗酶液经55％硫酸铵盐析后，过SephadexG．100层析柱。经此二步纯化后粗酶液分别被纯化了1．28倍和1．75倍。关键词：酸马奶酒；乳糖酶；酵母菌：培养基优化；分离纯化Screeningofyeasthigh-yieldinglactase，mediumoptimizationandseparationandpurificationoflactaseAbstraet14strainsofyeastseparatedfromkoumissinXiMengregionofInnerMongoliawasselectedtostudytheirabi

7、lityofproducinglactasethroughqualitativereactionandquantitativemeasurementinthispaper．Asaresult．theyeastJ2wasscreenedasthestrainofhighyieldenzymelactase．Thentheculturemediumwasoptimizedbysinglefactorandorthogonaltest．Basedontheoptimizedmedium，theenzymeproductionandgrowthruleof22wasstudie

8、d．Another，themethodseparatingandpurificatingoftheenzymefromcrudeenzymeliquidalsobestudied．Ininitialscreeningthestrainsofhigh—yieldlactasejX—galandONPGfermentationtubequalitativetestwastried．Theresultsshowedthattwomethodsofqualitativeresultsareconsistent．eightstrainsofyeas