一株高产碱性果胶酶菌株的分离、产酶条件的优化和酶液的初步分离提纯

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1、2010—D5教改聚焦一椿高产碱性呆欣胯菌株的分青、严胯条件的他伯和酶浪的初步分离捉绝牛永梅摘要：从公园的花土中分离出一株相对高产碱性果胶酶的菌株，经16srDNA鉴定为枯草芽孢杆菌，命名为TCCCC11286。在初步的酶学性质研究中表明，它耐高温耐碱，最适作用温度为45~C，到60℃仍有酶活，最适作用pH为8．0。经过培养基的初步优化，菌株TCCCC11286对于富含铵根离子的化学物质和淀粉具有很好的利用能力。本实验还对酶的分离纯化进行了初步研究。关键词：枯草芽孢杆菌优化分离纯化Abstract：Abacterialstrainrelativily

2、highlyproducing1．2试剂alkalinepectateIyasewasobtainedfromthesoilofvariaseflowersPolygalacturonicacidBeijingBiodeeBiotechnologyinthePark．Thebacteriumwasprimarilyidentifiedasastrainthat十六烷基三甲基溴化铵北京奥博星生物技术有限任公司belongstoBacillussp．basedon16srDNAanditwasnamedas果胶天门峡富达果胶工业有限公司TCCCCI128

3、6．Studyonthecharacteristicsofalkalinepectinase聚乙二醇天津天泰精细化学品有限公司showedthatitwashishtemperatureresistantandalkaliproo~TheT．T．R．C．highestactivityoftheenzymewasat．pH8．0and45℃．evenmore甘氨酸天津市珠江卫生材料厂itWR8moreactivityat6o℃．Undertheoptionalfermentation无水葡萄糖国药集团化学试剂有限公司conditions，strainT

4、CCCCI1286couldmakegoodUSeofcornstarch可溶性淀粉天津市四通化工厂andchemicalsubstancesfulofNH4~．Furthermore，wepreliminarily酵母粉OXOIDLTD，BASINGSTOKE，HAMPSIRE，ENGLANDseperatedandpurifiedthepectinase．TPYPr0NEOXOIDLTD．，BASINGSTOKE，Keyword：Bacillussp．optimizationseparationandpurification．HAMPSIRE，E

5、NGLAND果胶酶(pectinases)是一类能分解植物组织中果胶质(由D一AgarJapan半乳糖醛酸以仪一1，4糖苷键连接形成的直链状的聚合物)的酶磷酸天津市北方天医化学试剂厂系，按底物专一性、对糖苷键作用机理、切断方式等，大致可分9Na0H天津市北方天医化学试剂厂种组分。碱性果胶酶是指在碱性范围内具有较高活性的果胶酶，(NH4)_-．S04天津市风船化学试剂科技有限一般多指聚半乳糖醛酸裂解酶(polygalaeturonatelyase，PGL)[1]。公司果胶酶广泛应用于食品工业的果汁加工，果酒澄清，饮用酶制剂，1．3培养基生物农药，而碱性

6、果胶酶除在植物病毒的纯化、纸浆漂白等方面(1)LB培养基(s／L)：蛋白胨2O、酵母粉10、NaCI20于12l℃得到应用外，已成为绵织物处理过程中至关重要的生物制剂。用下灭菌20rain果胶酶可以用于不能进行碱精练的织物(如绵和羊毛混纺织物)(2)种子培养基()：蔗糖20、蛋白胨10、玉米浆30、rd~SO,1、处理[21，而且处理后的织物损伤小，织物柔软丰满，对环境的污染K,_HPO~18．4、KIL,PO,6、pH=7于121℃下灭菌20min少，操作人员的工作环境和设备的腐蚀情况均比碱精练好蚓。(3)发酵液(e1)：乳糖20、蛋白胨3、CaC

7、h．3、果胶20、酵母膏自1972年日本学者K0kiHorikoshi首次用嗜碱细菌制得碱3、MgCl20．2、pH=7．0-7．5于121~C下灭菌20min性果胶酶以来【7J，至今已分离鉴定出几十种碱性果胶酶，但其中(4)筛选培养基()：果胶5、酵母膏5、蛋白胨5,MgSO42、能应用于工业化生产的不多，仅NovoNordisk公司在1999年研制K,_HPO~1、琼脂20、pH=7．7．5于121℃下灭菌20rain出用基因工程菌生产的碱性果胶酶Bio-Prep，以及于2003年推出(5)斜面培养基(g／L)：葡萄糖lO、蛋白胨5、牛肉膏5、N

8、aCI5、的一种碱性果胶裂解酶ScourzymeL，但高昂的生产成本限制了其琼脂条20、pH=7．0于12l