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1、产碱性蛋白酶菌株的分离摘要本设计为了研究碱性蛋白酶的性质和它的相关作用，以及产碱性蛋白酶菌株的获得。设计内容主要分为两部分：产碱性蛋白酶菌株的筛选分为初选和复选；酶活力的测定；第一部分分为三个实验设计对菌株进行富集、平板分离初筛、药瓶发酵复筛；第二部分通过透明圈法初步进行测定再在不同温度不同PH下对酶性质进行测定，为碱性蛋白酶的研究和治疗提供一定的理论及实验基础。对碱性蛋白酶的应用提供理论依据，及时的将理论转化为生产力，提高工业生产的效益。关键词：碱性蛋白酶；菌株；分离目录第一部分：文献综述1．碱性蛋白酶31.1简介31.2碱性蛋白酶的理化性质31.3酶的结构和活性中心31.4碱性蛋白酶的
2、专一性42.碱性蛋白酶的分类42.1命名42.2类型43.碱性蛋白酶的应用53.1碱性蛋白酶在食品中的应用63.2碱性蛋白酶在洗涤用品中得到广泛的应用。63.3碱性蛋白酶在羊毛制品中的应用63.4碱性蛋白酶在词料工业中的应用73.5碱性蛋白酶在其它领域的应用84.产碱性蛋白酶菌株84.1生产菌株的种类84.2碱性蛋白酶工程菌的选择85.碱性蛋白酶的研究前景9第二部分课程设计部分1.材料121.1土样121.2培养基121.3主要实验仪器122.实验方法122.1菌株的分离方法122.2酶活力的测定133设计143.1产碱性蛋白酶的分离143.2.碱性蛋白酶活力的测定144总结155设计体会
3、15参考文献16第一部分文献综述1．碱性蛋白酶1.1简介碱性蛋白酶(alkalineprotease)是一类适宜于在碱性条件下水解蛋白质肽键的酶类,是一类非常重要的工业用酶,广泛存在于动、植物及微生物生物体中,在猪的胰脏中最早被发现。碱性蛋白酶在食品、洗涤及制革等行业中有着广泛的用途。微生物蛋白酶均为胞外酶，它的处理技术相对简单、价格低、来源广、菌体易培养、产量高、高产菌株选育简单快速、具有动植物蛋白酶的所有特性，以与工业化生产。近几年，碱性蛋白酶的研究有很大的进展，取得了许多可喜的成果，及时的转化成生产力，有很大的社会和生产效益。1.2碱性蛋白酶的理化性质微生物的碱性蛋白酶的活性作用范围
4、在PH值7-11之间，在酪氨酸中最适范围为9-11之间，它可以水解肽键、酰胺键、醚键以及转酯、转肽等[1]。多数微生物产生的碱性蛋白酶耐热性差，我国生产的几种碱性蛋白酶耐热温度均在60℃以下。1.3酶的结构和活性中心碱性蛋白酶的分子量一般在2.0-3.4万之间，等电点多为8.0-9.0，能作用于多数肽链，水解肽键生成二肽类物质。其除酶本身的氨基酸残基外,不具有特定的活性基团,因此,一些金属离子(Fe2+,Mn2+,Mg2+,Zn2+等)对酶有激活作用。碱性蛋白酶属丝氨酸蛋白酶,具有蛋白质的基础生化性质,一些生化物质均能引起其变性失活,一些天然植物中也有蛋白酶抑制剂[2]。1.4碱性蛋白酶的
5、专一性碱性蛋白酶具有底物专一性,当它与底物结合时,依靠物理引力的作用,首先形成非共价的酶-底物复合物,接着丝氨酸轻基攻击底物,产生四面体中间产物,随后中间产物破裂,形成酶-产物复合物碱性蛋白酶的专一性强烈地受到切开位点两侧氣基酸残基,尤其是第1和第4位氨基酸残基的影响,较之血红蛋白或牛血清蛋白,它更容易酶解酪蛋白[3]。可将碱性蛋白酶分为四种类型,依据其对切开位点基侧氨基酸残基的专一性[4]:—、对如精氨酸、赖氨酸等碱性氨基酸残基具有专一性,该类酶与胰蛋白酶相似;二、如枯草杆菌碱性蛋白酶等,该类酶主要表现为对疏水性氨基酸残基或芳香族具有有较强的专一性;三、如溶解细菌细胞壁的蛋白酶,该类蛋白
6、酶表现出对小分子脂肪族氨基酸残基具有专一性;四、如葡萄球菌碱性蛋白酶,该类酶对酸性氨基酸残基存在专一性。2.碱性蛋白酶的分类2.1命名碱性蛋白酶一般按照其所产菌株的名称进行命名,如丹麦诺维(Novo)公司的卡斯柏格枯草杆菌碱性蛋白酶(Subtilisincarlsberg)是卡斯伯格枯草芽孢杆菌生产的,碱性蛋白酶SubtilisinNovo是由另一株枯草芽孢杆菌Novo生产的,Nagase公司将枯草杆菌N所产的碱性蛋白酶取名SubtilisinBPN[5]。2.2类型产碱性蛋白酶的微生物从生态上可以分成两类:一类是适于在中性pH条件下生长并产酶的细菌,如枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢
7、杆菌等;另一类是只在pH8-10的环境中生长和产酶的嗜碱微生物。碱性蛋白酶大致分为两种类型[6]:A型,由短小芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌生产,其性质和结构与枯草芽孢杆菌喊性蛋白酶一致,这类菌株只产碱性蛋白酶;B型,由枯草芽孢杆菌淀粉糖化变种或枯草杆菌NRRLB3411产生,与BPN或Novo枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶的性质和结构一致,这类菌株既产碱性蛋白酶,又产中性蛋白酶。A、B两型碱性蛋白酶在免疫学分析上没有交叉反应,抗枯草杆
