猪繁殖与呼吸综合征病毒rna与非结构蛋白互作的研究及nsp12多克隆抗体的制备

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1、分类号：0786学校代码：10712UDC：____578____研究生学号：2013051522密级：公开灶衣林科教大学届攻读硕士学位研究生学位（毕业）论文猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA与非结构蛋白互作的研究及nspl2多克隆抗体的制备学科专业微生物学研究方向分子病毒学研究生刘冰清指导教师陈红英完成时间2015年5月中国陕西杨凌研究生学位（毕业）论文的独创性声明本人声明：所呈交的硕士学位（毕业）论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究结果；论文中的研究数据及结果的获得完全符合学校《关于规范西北农林科技

2、大学研究生学术道德的暂行规定》，如果违反此规定，一切后果与法律责任均由本人承担。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究结果，也不包含其他人和自己本人已获得西北农林科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文的致谢中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：44时间：於(月曰导师指导研究生学位（毕业）论文的承诺本人承诺：我的硕士研究生二所呈交的硕士学位（毕业）论文是在我指导下独立开展研究工作及取得的研究结果，属于我现

3、岗职务工作的结果，并严格按照学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》而获得的研究结果。如果违反学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，我愿接受按学校有关规定的处罚处理并承担相应导师连带责任。关于研究生学位（毕业）论文使用授权的说明本学位（毕业）论文的知识产权归属西北农林科技大学。本人同意西北农林科技大学保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；同意西北农林科技大学将本学位（毕业）论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出

4、版，并享受相关权益。本人保证，在毕业离开（或者工作调离）西北农林科技大学后，发表或者使用本学位（毕业）论文及其相关的工作成果时，将以西北农林科技大学为第一署名单位，否则，愿意按《中华人民共和国著作权法》等有关规定接受处理并承担法律责任。任何收存和保管本论文各种版本的其他单位和个人(包括研究生本人)未经本论文作者的导师同意，不得有对本论文进行复制、修改、发行、出租、改编等侵犯著作权的行为，否则，按违背《中华人民共和国著作权法》等有关规定处理并追究法律责任。(保密的学位论文在保密期限内，不得以任何方式发表、借阅、复印、

5、缩印或扫描复制手段保存、汇编论文）研究生签名：时间：2〇丨厂年（月日Classificationcode:Q786Universitycode:10712UDC:578Postgraduatenumber:2013051522Confidentialitylevel:Non-ConfidentialThesisforMaster’sDegreeNorthwestA＆FUniversityin2015INTERACTIONOFPRRSVNONSTRUCTURALPROTEINSWITHRNAANDPREPARATIO

6、NOFPOLYCLONALANTIBODIESAGAINSTNSP12Major:MicrobiologyResearchfield:MolecularVirologyNameofPostgraduate:LiuBingqingAdviser:ChenHongyingDateofsubmission:2015.5YanglingShaanxiChina猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA与非结构蛋白互作的研究及nsp12多克隆抗体的制备摘要猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染引起的，给养猪产业带来

7、了经济上毁灭性的灾难。近几年来，我们对该病毒编码的结构蛋白功能已有了突破性的认知，但有关非结构蛋白功能还了解很少。FL12质粒包含PRRSVNVSL#97-7895毒株基因组全长cDNA。本文以FL12质粒为模板，通过构建pTriEx-nsp12表达载体，大2+量表达病毒非结构蛋白nsp12（nsp,nonstructuralprotein），经Ni亲和层析获得高纯度蛋白，作为制备抗血清的抗原。实验遵照适合的免疫流程免疫家兔，制备nsp12抗血清。斑点杂交和Western印迹实验检测结果显示我们获得了nsp12的高

8、效价抗体，并且可以检测到nsp12在PRRSV感染的MARC145细胞（非洲绿猴肾细胞MA104派生细胞系）中的表达。同时显微镜观察pTriEx-nsp12-GFP质粒在293T（人胚肾细胞派生细胞系）及MARC145细胞中的表达定位情况发现，nsp12主要分布在细胞质的部分区域，可能定位于某些细胞器。在对PRRSV反向遗传系统构建过程中，我们采用两条策略构