对华北大黑鳃金龟幼虫具有活性的苏云金芽胞杆菌筛选与鉴定

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1、密级：论文编号:中囯农业科学院对华北大黑鲍金龟幼虫具有活性的苏云金芽胞杆菌筛选与鉴定ScreeningandIdentificationofGenefromBacillusthuringiensisIsolatesToxictotheLarvaeofHolotrichiaoblita硕士研究生：王小奇指导教师：张杰研宄员申请学位类别.•理学硕士专业：生物化学与分子生物学研究方向；微生物分子生物学与基因工程培养单位：植物保护研究所研究生院2015年5月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取

2、得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：王小奇时间：^年上月巧曰关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阋和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不

3、同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：i时间：年犮月巧曰中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目对华北大黑鳃金龟幼虫具有活性的苏云金芽胞杆菌筛选与鉴定专业生物化学与微生物分子生物学与论文作者王小奇领域分子獅研九万向基因工程指导教师张杰研宄员培养单位（研究所、中心）植物保护研究所姓名职称单位专业签名评青岛农业大学害虫生物防治^李长友教授农学与植物保护学院昆虫病理学阅中国农业科学院生物化学与郎志宏研究员人生物技术研究所分子生物学答i中国科学院刘钢研究员微生物学七4主微生物研究

4、所^席中国军事医学科学院王恒樑研究员微生物学生物工程研究所...——-^*1***1*1农业昆虫与口石旺鹏教授中国农业大学Vm害虫防治中国农业科学院生物化学与-辩郎志宏研究员生物技术研究所分子生物学中国农业科学院农业昆虫与委梁革梅研宂员植物保护研究所害虫防治员会议记录（秘书）耿丽丽2015年5月26日上午8:30论文答辩时间地点中国农业科学院植物保护研究所第一会议室Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationScreeningandIdenti

5、ficationofGenefromBacillusthuringiensisIsolatesToxictotheLarvaeofHolotrichiaoblitaM.S.Candidate:WangXiaoqiSupervisor:Prof.ZhangJieMajor:BiochemistryandMolecularBiologySpecialty:MicrobialMolecularBiologyandGeneEngineeringMay2015摘要华北大黑鳃金龟［Holotrichiaoblita（Falder

6、man）]是难以防治的地下害虫，给农作物造成严重的损失。苏云金芽胞杆菌（Bacillusthuringiensis，Bt）是一种已被广泛用于农业害虫防治的昆虫病原微生物，其在芽胞形成期可产生主要由cry和cyt基因编码的杀虫晶体蛋白。发掘Bt菌株资源是实现此类害虫绿色防控的重要手段，因此，为了获得对华北大黑鳃金龟具有较高杀虫活性的菌株，本研究以实验室分离的500株Bt菌株材料为基础，通过杀虫活性测定筛选对华北大黑鳃金龟幼虫有活性的菌株，进一步对菌株多样性分析、菌株晶体形态观察和蛋白表达分析、基因鉴定和华北大黑鳃金龟幼

7、虫感染Bt后中肠组织病理切片等方面进行了一系列的研究，其主要结果如下：对华北大黑鳃金龟幼虫有活性菌株的筛选：以实验室分离的500株Bt菌株为材料，通过杀虫活性测定筛选到了42株对华北大黑鳃金龟幼虫具有不同程度活性的菌株，其中有10株14天的校正死亡率大于60%，而261-1菌株7天校正死亡率就达到100%，其余菌株的14天校正死亡率在30%~60%之间。菌株多样性分析：利用本实验室建立的便捷的Bt菌株比较鉴别技术，对这42株菌株进行多样性分析，以42株菌株的基因组为模板，利用优化后的简并引物和PCR扩增体系进行扩增，

8、并利用HinfI对PCR产物进行酶切，通过电泳分析获得了33个菌株的RFLP图谱，分析比较显示它们属于14个不同的菌株类型，从而有效的去除了冗余菌株，结合菌株对华北大黑鳃金龟的杀虫活性数据，选择1126-1、P65-1、QDL47-1、261-1、FTL84、78-2、127-2、78-3、1198-1、S10A2、B8E12、QDL40-2、