苏云金芽胞杆菌sigmak因子的表达纯化及其调节子鉴定

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1、密级:论文编号:中囯农业科学院学位论文苏云金芽胞杆菌SigmaK因子的表达纯化及其调节子鉴定ExpressionandPurificationofSigmaKProteinandIdentificationofItsReguloninBacillusthuringiensis硕士研究生杨敏指导教师宋福平研究员申请学位类别理学硕士专业生物化学与分子生物学研究方向微生物分子生物学与基因工程培养单位植物保护研究所研究生院提交日期2015年5月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含

2、其他人已经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：构敏时间：20/5年夕月又g日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：物敏时间：年夕月屬日导师签名:时间：別5*年夕月义8日中国

3、农业料学院硕士学位论文评闽人、答辩委员会签名表论文题目苏3•金芽胞杆菌SigmaK因子的表达纯化及其调节子鉴定生物化学与微生物分子生物学论文作者杨敏专业研究方向分子生物学与基因工程指导教师宋福平研宄员培养单位（研究所、中心）植物保护研究所i姓名职称单位专业中国军事医学科学院王恒樑研究员微生物学评生物工程研究所阅人北京农学院生物化学与郭巍教授植物科学技术学院分子生物学答辩中国科学院主刘钢研究员微生物学微生物研宄所丨席中国军事医学科学院王恒樑研究员微生物学生物工程研究所石旺鹏教授中国农业大学农业昆虫与害虫防治中国农业科学院生物化学与z郎志宏研宄员%答生物技术研究所分子生物学辩中

4、国农业科学院梁革梅研究员农业昆虫与害虫防治f於委植物保护研究所口贝会议记录（秘书）耿丽丽论文答辩时间地点2015年5月26日，上午8:30,植保所第一会议室密级:论文编号:中国农业科学院学位论文苏云金芽胞杆菌SigmaK因子的表达纯化及其调节子鉴定ExpressionandPurificationofSigmaKProteinandIdentificationofItsReguloninBacillusthuringiensis硕士研究生：杨敏指导教师：宋福平研究员申请学位类别：理学硕士专业：生物化学与分子生物学研究方向：微生物分子生物学与基因工程培养单位：植物保护研究所研

5、究生院提交日期2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationExpressionandPurificationofSigmaKProteinandIdentificationofItsReguloninBacillusthuringiensisM.S.Candidate：YangMinSupervisor：Prof.SongFupingMajor：BiochemistryandMolecularBiologySpecialty：MicrobialMolecularBiologyandGen

6、eticEngineeringMay2015摘要苏云金芽胞杆菌（Bacillusthuringiensis，简称Bt）属于芽胞杆菌属的蜡样芽胞杆菌群（B.cereusgroup），是一种特殊革兰氏阳性细菌，在产生芽胞的同时产生由杀虫蛋白组成的具有规则形状的伴胞晶体(主要由cry和cyt基因编码)。因其对靶标生物高效、对环境安全友好等特点而成为目前应用最广泛的微生物杀虫剂。在芽胞形成过程中，不同的Sigma(σ)因子在时空上级联K起始基因转录，σ由sigK基因编码，是Bt芽胞晚期重要的Sigma因子，芽胞晚期主要涉及芽胞外壁形成、芽胞的成熟和释放、母细胞裂解、晶体的形成等重要

7、细胞发育过程，目前对这些细K胞过程所知仍然很少。因此本研究主要明确Bt中σ因子的调节子，为解析母细胞生长过程的晚期调控网络进而为阐明芽胞形成晚期细胞过程的分子机制奠定基础。以芽胞形成晚期全局调控因子gerE突变体作为对照，分别提取sigK和gerE突变体在T7、KT10时期的总RNA进行DNA芯片分析，明确受σ控制的基因或操纵子。结果表明T7时期有KK158个受σ下调的基因和138个上调的基因。T10时期有878个受σ下调的基因和1317个上调K的基因。利用σ因子结合位点的一致序列，分析T7和T10下调基因的启动子