中枢神经系统细胞特异性ifn-γ信号通路在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用机制研究

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1、分类号民７４１密级学号Ｂ２９１４４？谈、５？ｉ啼捉乂掌ＳＨＡＡＮＸＩＮＯＲＭＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ＾目中枢神经系统细胞特异性ＩＦＮ－ｙ信号通路在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用机制研究＾ｉｄＨ＾＾＂４Ｂ作者了小丽指导教师黄原教授张光先教授胃－＇額—级学科名称生物学－ｉ二级学科名称动物学！．．访■Ｉ提交日期二〇—五年十一月Ｉ茸学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行研究工作所

2、取得的研巧成果。尽我所知，除文中己经注明引用的内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研巧成果，也不包含本人或他人己申请学位或其他用途使用过的成果。对本文的研巧做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明并表示谢意。一切相关的法律责任本学位论文若有不实或者侵犯他人权利的，本人愿意承担。玉作者签名：如叫日期：年ｎ月＾日学位论文知识产权及使用授权声明书本人在导师指导下所完成的学位论文及相关成果，知识产权巧属陕西师范大学。本人完全了解陕西师范大学有关保存、使用

3、学位论文的规定，允许本论文被査阅和借阅，学校有权保留学位论文并向国家有关部口或机构送交论文的纸质版和电子版，有权将本论文的全部或部分内容编入有关巧据库进行检索，可巧采用任何复制手段保存和汇编本论文。本人保证毕业离校后，发表本论文或使用本论文成果时奢名单位仍为陕西师范大学。保密论文解密后适用本声明？心／作者签名：＿了曰期Ｓ年月曰／摘要ＭＳ一１Ｔｌ）多发性硬化症（Ｍｕ山ｐｉｅｓｃｌｅｒｏｓｉｓ），是种由型辅助细胞（Ｔｈ和１７型辅助Ｔ细胞（Ｔｈｌ７）介导的中枢神经系统自身免疫性炎性脱髓

4、銷疾病。该病主要累及青壮年一，是造成青壮年神经系统功能性残障的最主要因素之。实验性自身免疫性脑脊髓炎（ＥｘｅｒｉｍｅｎｔａｌａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｅｎｃｅｈａｌｏｍｅｌｉｔｉｓＥＡＥ）ｐｐｙ，是为了研究多发性硬化症（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ＭＳ）而建立的动物模型，对该动物模型的研Ｉ－ＥＡＥ的疾病发究表明，Ｔｈｌ细胞的特征性细胞因子ＦＮＹ通过作用于免疫细施在（ｔｔ，ｃｅｎｒａｌｎｅｒｖｏｕｓｓｅｍ生发展中起着重要的作用但是其如何作用于中枢神经系统巧；ＣＮＳ）的细胞，尤其是在体

5、内情况下其作用效果研究的较少。因此，本研究利用髓銷少突胶质糖蛋白（Ｍｙｅｌｉｎｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＭＯＧ）免疫诱导的ＥＡＥ动物模型（Ａｓｔｒｏｃｔｅ）或，通过侧脑室注射特异性敲低星形胶质细胞ｙ小胶质细胞ＩＦ－Ｎ－）－（ｍｉｃｒｏｇｌｉａ）Ｎ丫受体（ＩＦＹ民１表达的方法阻断不同ＣＮＳ细胞ＩＦＮ丫信号通．．－路，研究ＣＮＳ不同细胞特异性ＩＦＮＹ信号通路在ＥＡＥ中的作用及其作用机制，Ｗ期为更好的理解ＭＳ／ＥＡＥ的病程机制并寻找新的细胞特异性祀点奠定基础。所取

6、得的主要研究结果如下：－１．利用免疫巧光双染技术发现，在小鼠脊髓切片中，ＩＦＮＹ民１在星形胶质细胞、－小胶质细胞Ｗ及少突胶质细胞中均有表达，神经元中不表达ＩＦＮ艮１Ｙ；２．利用免疫英光染色及实时夷光定量ＰＣ民技术发现在ＭＯＧ免疫诱导的ＥＡＥ－－相较于健康小鼠，ＩＦＮ民１呈诱导表达，提示ＣＮＳ的ＩＦＮ模型的脊髓和脑姐织中，丫丫信号通路可能参与了ＥＡＥ的病程发生；３Ｒ－．构建基于ｍｉ３０的星型胶质细胞或小胶质细胞／单核巨懂细胞特异性－Ｒ－ＩＦＮｙｌ敲低的慢病毒载体，体内体外实验验证，该慢病毒可

7、Ｗ有效的敲低ＩＦＮｙＲｌ的表达；４－．ＥＡＥ临床神经功能评分提示星形胶质细胞或小胶质细胞特异性沉默ＩＦＮＹ信号通路在ＥＡＥ诱导发病过程中具有截然相反的作用，星形胶质细胞特异性阻断－ＩＦＮ信号通路会减径疾病的严重程度，然而Ｙ，小胶质细胞特异性阻断该信号通路则会加重疾病病情；５，．通过Ｈ＆Ｅ染色，脊髓单个核细胞计数Ｗ及流式细胞分析发现星型胶质细－路减少了中枢神经系统的炎性细胞浸润胞特异性阻断ＩＦＮＹ信号通，从而使得脱髓銷程度减轻；６－．体内低了脊髓中致炎性细胞因子忙６和实验发现，阻

8、断星形胶质细胞降１－忙１７Ａ的表达，同时，趋化因子ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＬ２０和ＭＭＰ９等的表达湿－著降低，敲低ＩＦＮ。体外星形胶质细胞原代培养实验发现ｙＲＩ之后，星型胶质细－－－胞在比１７Ｗ及比１７和ＴＮＦ刺激下，相应正１７信号通路的趋化因子ＣＸＣＬ１和－－ＣＸＣＬ２Ｗ及ＣＣＬ２０的表达显著降低，而在Ｉ