实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠视觉功能损伤的机制研究

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1、第二军医大学硕士学位论文实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠视觉功能损伤的机制研究ResearchonMechanismsofVisualDamageinaMiceModelofExperimentalAutoimmuneEncephalomyelitis姓名：张悦学科专业：神经病学研究方向：神经免疫疾病导师：管阳太教授培养单位：第二军医大学附属长海医院二0一三年五月illllIIIlUlIIItlliEIUl·Y2339768独创性声明卜本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标

2、注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。⋯一躲姗一一刀年明芦学位论文使用授权书声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)导师签名

3、：签字日期：只’日，目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯¨⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··5．1L—．L日lJ吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·7论文正文实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠视觉功能损伤的机制研究材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18讨论·⋯⋯·

4、··：···········⋯·⋯⋯············⋯·······⋯⋯··⋯⋯⋯·27结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33文献综述视神经炎与多发性硬化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40视觉图样形成的神经机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯47在读期间发表论文和参加科研工作情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5l实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠视觉功能损伤的机制研究摘要目的：动态观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmune朋cephalomyelitis，EAE)t]'鼠视网膜多巴胺能无长突细胞(dopaminergicamacrinecell，DAC)、眼特化区域分离(eye—specificsegregation)并1]离视网膜投射的变化结

6、合病理学、分子生物学等方法，研究EAE小鼠发病期视觉功能障碍的可能机制。方法：C57BL／6雌性小鼠随机分为对照组(20只)和EAE组(50只)。首先参照MendelI造模方法并加以改进，采用短肽链的髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35．55(MOG35-s5)作为抗原诱导C57BL／6d、鼠EAE模型。自免疫当天开始观察记录小鼠基本情况，根据Webster等【15J分级标准对小鼠进行神经功能评分。其次EAE组再随机分为5个亚组，每个亚组10只，各个亚组小鼠在抗原免疫后13d、18d、23d、28d、38d进行双眼玻璃

7、体内荧光染料注射，左眼注射Alexa．488(绿)，右眼注射Alexa．555(红)，注射量均为1．5ul。各组小鼠染料注射完成48h后，即抗原免疫后15d、20d、25d、30d、40d处死，取小鼠视神经切片进行苏木素．伊红(hematoxylin．eosin，HE)染色和LuxolFastBule髓鞘染色后光镜下观察组织形态学变化，统计视神经炎发病率：取脑组织固定后置于荧光显微镜下观察球后视通路、LGN和SC的变化情况；观察并记录整体观情况后，琼脂包埋脑组织振动切片机切片，收集LGN部分异侧投射面积最大的

8、3片和SC部分最靠近中线的4片，在荧光显微镜下观察眼特化区域分离情况并摄片，利用Matlab图象分析软件进行图像处理并计算切片的同侧(ipsilateral)ll艮睛轴突投射面积、同侧(ipsilateral)和异{贝,Y(contralateral)投射区域重叠的面积。用免疫荧光染色检测视网膜各时间点酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase，TH)表达，计数多巴胺能无长突细胞(dopa