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时间:2018-08-01
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1、ICAM1在实验性自身免疫性脑脊髓炎发病机制中的作用作者:赵亚朴王红刘慧敏王秀卿黄庆军【摘要】目的检测实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠血脑屏障中血管内皮细胞细胞间粘附分子1(ICAM1)的表达,并分析其表达与EAE发病的关系。方法取EAE组和对照组大鼠的脑组织,石蜡切片,免疫组化染色,图像扫描系统观测,图像分析软件进行灰度分析。结果EAE组大鼠脑血管内皮细胞上ICAM1的表达明显深于对照组。实验组的灰度值为141.47±6.88,而对照组为166.24±7.24,两组差异非常显著(P<0.01)。结论大鼠EAE时脑血管内皮细胞ICAM1的表达上调,提
2、示ICAM1是与EAE发生相关的重要粘附分子。【关键词】免疫组织化学法;ICAM1;血脑屏障;实验性自身免疫性脑脊髓炎【Abstract】ObjectiveToinvestigatetherelationshipbetweentheexpressionofICAM1inthebloodbrainbarrierandtheexperimentalautoimmuneencephalomyelitis(EAE).MethodsBrainofEAEaswellascontrolanimalsweretakenandembeddedinparaffin.Andthesec
3、tionswerestainedbyimmunohistochemicalmethod.Thenthesectionswereobservedby8NikonimagescanningsystemandmeasuredthegrayvaluebyIPPimageanalysissoftware.ResultsTheexpressionofICAM1intheepithelialcellofendangiumofEAErat'sbrainwashigherthanthatincontrol.ConclusionTheincreaseoftheexpressionofICA
4、M1intheepithelialcellofendangiumofEAErat'sbrainindicatedthatICAM1wasanecessaryadhesionmoleculeinthedevelopmentalprocessofEAE.【Keywords】Immunohistochemicalmethod;Intercellularadhesionmolecular1;Bloodbrainbarrier;Experimentalautoimmuneencephalomyelitis多发性硬化症(multiplesclerosis,MS)可能是一种与遗
5、传、病毒感染、地理环境等诸多因素有关的自身免疫性疾病[1]。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE)与MS在临床、生化、免疫及病理等诸多方面具有相同的特征,因此成为深入研究MS的理想动物模型。在免疫学的研究中,粘附分子在EAE发病中的作用越来越受到关注。那么,血管内皮细胞细胞间粘附分子1(intercellularadhesionmolecular1,ICAM1)在血脑屏障中的表达是否与EAE的发生有关?本研究采用免疫组化法检测了ICAM1在血脑屏障中的表达,以探讨其与EAE发病的关系。81
6、材料与方法1.1材料1.1.1实验动物及分组雌性Wistar大鼠50只,8~10周龄,体重(192±10)g,随机分为实验组(免疫抗原组)和对照组(完全弗氏佐剂/百日咳杆菌组)。实验组注射牛髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)+完全弗氏佐剂(Freund’sadjuvantcomplete,CFA)+百日咳杆菌;对照组注射生理盐水+CFA+百日咳杆菌,每组各25只。1.1.2试剂ICAM1羊抗鼠IgG多抗(SantaCruz)、SP通用型试剂盒(ZYMED)。1.2方法1.2.1制备动物模型MBP提取方法与动物模型制备方法沿用我们以往建立的方法[
7、2]。EAE的严重程度依据Kono等[3]的标准评定。1.2.2免疫组化法检测血脑屏障ICAM1的表达8取发病高峰期的EAE大鼠和对照组大鼠各7只,剥取大鼠的小脑,福尔马林固定,石蜡包埋,连续切片,每隔5张取2张,每份标本选出6张切片。使用ZYMED公司SP试剂盒,采用三步法进行免疫组化染色。用Nikon图像扫描系统进行观测。采用美国IPP图像分析软件进行灰度分析。每只大鼠取12张片子,沿矩形路线观测。1.2.3统计学方法数据资料用SPSS11.0统计软件包进行处理,采用两组间均数比较的独立样本t检验(双侧)进行统计学分析。
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