高糖诱发氧化应激反应激活tnfr1受体促内皮祖细胞凋亡的实验研究

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1、中图分类号：R6S4.4@医，乂謦SICHUANMEDICALUNIVERSITY硕士学位论文高糖诱发氣化应激反应激活TNFR1受体促内皮祖细胞凋亡的实验研究院（系)、所临庆医举院研究生姓名谢___________玉学科、专业外科学导师姓名授,二〇—五年四月四川医科大学毕业硕士研究生学位论文独创性声明及发表承诺书本人声明所呈交的学位论文（己整理成发表形式）是我个人在四川医科大学导师指导下，由导师及四川医科大学提供一切科研条件的情况下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在

2、论文中作了明确的说明并表示了谢意。在即将毕业离校之际，本人郑重承诺：该论文将以四川医科大学的名义发表（论文作者为研究生及导师，作者所在单位为四川医科大学)，并在发表后立即将发表论文原件（期刊）寄与导师1册。学位论文日期:本人完全了解四川医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：四川医科大学有权保留并向有关部门或机构送交本人学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，允许有关部门或机构以电子出版物形式出版发行，并对外进行全文内容服务。本人授权四川医科大学可以将本人学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，进行数字化处理汇编、通过网络或其它途径进行交流传播，可以公布学位论文的全部或部

3、分内容，可以采用影印、缩印、扫描或其他复制手段保存和汇编学位论文，即四川医科大学具有本人学位论文的数字化制品复制权、信息网络传播权和汇编权。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》等数据库，并通过网络向社会公众提供信息服务。保密口，在.年解密后适用本授权书。本人提交的学位论文属不保密W(请在以上方框内打“v”)目录1高糖诱发氧化应激反应激活TNFR1受体促内皮祖细胞凋亡的实验研究……………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………41.3前言………………

4、……………………………………………81.4材料与方法……………………………………………………111.5结果……………………………………………………………211.6讨论……………………………………………………………371.7结论……………………………………………………………451.8参考文献………………………………………………………461.9英汉缩略词对照表……………………………………………522致谢……………………………………………………………533活性氧簇对创口愈合过程中血管新生的影响（综述）…………………………………………………………………55高糖诱发氧化应激反应激活TNFR1受体促内

5、皮祖细胞凋亡的实验研究摘要目的：糖尿病（Diabetesmellitus,DM）是因遗传和坏境因素共同作用而引起的高血糖以及碳水化合物、脂肪和蛋白质等代谢失衡的慢性疾病。它不仅引起糖代谢紊乱，而且引起血管病变。内皮祖细胞（Endothelialprogenitorcells，EPCs）在维持血管健康和促进受损血管的重建过程中起着重要作用。当前，在糖尿病血管新生受损的机制研究中，EPCs功能失调相关因素已经受到广泛重视，其中，氧化应激与EPCs功能失调关系密切。已有研究表明：糖尿病患者的高血糖环境可以使EPCs凋亡增多，数量减少，而且凋亡增加可能是糖尿病血管病变中EPCs减少的主要机制。细胞

6、凋亡是由基因控制的一种自主性、程序性的死亡过程，它可以由多种刺激因素引起并且主要通过死亡受体介导的途径介导凋亡，在死亡受体介导的凋亡途径中，肿瘤坏死因子受体(Tumornecrosisfactorreceptor，TNFR)是当前研究发现的最大的死亡受体家族,其凋亡信号传递过程中，主要是由TNFR1介导的。有研究报道高糖能诱导EPCs中TNFR1表达，这种效应能被抗氧化剂抑制。因此，本实验主要通过观察体外高糖是否通过氧化应激反应激活TNFR1及其下游的凋亡信号通路，进而对大鼠骨髓源性EPCs凋亡产生影响,来探讨高糖对EPCs的作用和影响。方法：用颈部脱臼法处死SD大鼠，将其置于75％酒精中

7、，浸泡并消毒15min。然后将消毒后的大鼠放置于超净工作台上，用动物解剖器械分离大鼠的股骨和胫骨，分离完成后，用含1%肝素的无菌PBS液冲洗骨髓腔，直到冲洗液变无色透明为止，收集好冲洗液，并用离心机进行高速离心，离心后收集试管底部的细胞，选择使用Ficoll密度梯度离心法进行大鼠骨髓源性单核细胞的分离；1分离后，将其接种于6孔板中，3天后进行首次换液，以后每隔3-4天换液，连续使用倒置显微镜观察细胞的形态变化并且使用激光