穿心莲内酯对大鼠肝微粒体cyp450酶活性的体内外影响研究

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1、分类号UDC密级编号硕士学位论文穿心莲内酯对大鼠肝微粒体CYP450酶活性的体内外影响研究EffectofandrographolideonCYP450inratlivermicrosomesactivitybothinvivoandvitro学位申请人：袁红昌指导教师：邱相君教授一级学科：生物学二级学科：生理学学位类别：理学硕士2015年05月独创性声明本人声明，所呈交的论文是我个人在导师指导下完成的研究工作及取得的研究成果。据我所知，文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含

2、为获得河南科技大学或其它教育机构的其他学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：日期：摘要摘要目的1.分别建立检测大鼠肝微粒体中甲苯磺丁脲、奥美拉唑、非那西丁、咪达唑仑和美托洛尔原型及代谢产物的高效液相色谱（HPLC）方法，评价大鼠肝微粒体中CYP2C9、CYP2C19、CYP1A2、CYP3A4和CYP2D6酶的活性，研究穿心莲内酯对肝微粒体中CYP450五个亚型酶活性的体外影响。2.建立同时检测大鼠血浆中甲苯磺丁脲、奥美拉唑、非那西丁、咪达唑

3、仑和美托洛尔的超高效液相色谱-质谱（UPLC-MS）的方法，研究穿心莲内酯对5种探针药在大鼠体内的药代动力学的影响，为临床合理用药提供理论依据。方法1.以甲苯磺丁脲、奥美拉唑、非那西丁、咪达唑仑和美托洛尔这5个药作为底物，采用AgilentZORBAXSB-C18色谱柱分离，色谱流动相均采用乙腈-水-0.1%三氟乙酸体系。采用差速离心法制备肝微粒体并且测定肝微粒体浓度。大鼠肝微粒体分别加入以上五个底物，在37ºC条件下孵育一定时间后，终止反应，经有机相提取后，用建立的HPLC方法测定底物及其代谢物的浓度，根据米氏方程分别

4、计算五个底物的Km值。然后分别以五个底物Km值附近浓度作为底物浓度，分别将不同浓度的穿心莲内酯加入到上述体系中，以计算半数最大抑制浓度（IC50）。2.雄性SD大鼠12只，将其随机分成2组（对照组和穿心莲内酯组），每组为6只。其中对照组给予生理盐水灌胃，剂量为5ml/kg，1天给药1次，连续给药七天；穿心莲内酯组给予穿心莲内酯灌胃，剂量为10mg/kg，1天给药1次，连续给药七天。第七天最后一次给药30min后，2组动物同时灌胃给予甲苯磺丁脲1mg/kg、奥美拉唑10mg/kg、非那西丁5mg/kg、咪达唑仑10mg/k

5、g以及美托洛尔20mg/kg；在给予5个探针药后不同时间点尾静脉分别进行采血0.3ml，分离血浆。用建立的UPLC-MS方法同时测定血浆中5个探针药的浓度；用DAS3.0程序分别计算5个探针药的主要药代动力学参数（Cmax,CLz/F,Tmax,t1/2,AUC(0-t),AUC(0-∞)），用SPSS17.0软件比较2组主要药代动力学参数的差异。结果1.100μM的穿心莲内酯可以明显抑制大鼠肝微粒体CYP450五个亚型酶的活性，穿心莲内酯对大鼠肝微粒体中5个底物的半数最大抑制浓度（IC50）分别是2.654μM、1.1

6、13μM、9.608μM、16.40μM和20.67μM。2.穿心莲内酯可以增加甲苯磺丁脲、奥美拉唑、非那西丁、咪达唑仑和美托洛尔的血药浓度以及生物利用度。与对照组相比，穿心莲内酯组可使甲苯磺丁脲的清除率下降、峰浓度增加以及生物利用度升高，而半衰期和达峰时间则无统计学差异；穿心莲内酯使奥美拉唑、非那西丁和美托洛尔峰浓度和生物利用度升高，而半衰期、清除率和达峰时间则无统计学I摘要差异；穿心莲内酯对咪达唑仑的主要药动学参数均无统计学差异。结论1.本研究建立的HPLC分别检测大鼠肝微粒体中甲苯磺丁脲、奥美拉唑、非那西丁、咪达唑

7、仑和美托洛尔及其的代谢物方法，专属性高，分离完全，检测时间快，适合CYP450酶五个亚型酶药代动力学研究。2.建立的同时检测大鼠血浆中甲苯磺丁脲、奥美拉唑、非那西丁、咪达唑仑以及美托洛尔的UPLC-MS的方法，检测时间快、分离完全、灵敏度高，适用于甲苯磺丁脲、奥美拉唑、非那西丁、咪达唑仑以及美托洛尔的同时检测及其药代动力学的研究。3.穿心莲内酯在体内外均可以抑制CYP450酶的代谢，因此，临床穿心莲内酯与CYP450五个亚型酶底物合用时，应密切关注穿心莲内酯对相应底物代谢的影响并进行治疗药物监测。关键词：穿心莲内酯；微粒

8、体；CYP450酶；UPLC-MS；药代动力学；药物相互作用论文类型：基础研究选题来源：学校自选项目IIABSTRACTABSTRACTOBJECTIVE1.TodevelopHPLCmethodsforthedeterminationoftolbutamide，omeprazole,phenacetin,midaz