流感病毒通过mir-29c抑制宿主抗病毒免疫应答的研究

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1、流感病毒通过miR-29c抑制宿主抗病毒免疫应答的研究InductionofthecellularmiR-29cbyinfluenzavirusinhibitstheinnateimmuneresponse作者姓名：张晓阳专业名称：预防兽医学指导教师：段铭副教授学位类别：农学硕士答辩日期：2015年6月2日本研究由国家自然科学基金（项目编号：31172337）资助TheresearchwassupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina（3117

2、2337）中文摘要流感病毒通过miR-29c抑制宿主抗病毒免疫应答的研究A型流感病毒（influenzaAvirus，IAV）是单股负链RNA病毒，其首先侵染的是宿主的呼吸系统，临床表现从轻微的上呼吸道感染到严重的肺炎。MicroRNA(miRNA)属于非编码RNA家族，在转录后水平调控靶基因表达。目前在各种生物中已经确定了成千上万种miRNA，其参与了细胞分化、增殖、凋亡和病原感染等诸多生物学进程的调控。人的miR-29家族包括miR-29a、miR-29b及miR-29c。最近的研究显示，miR-2

3、9能够调节机体的天然免疫和适应性免疫，但其在IAV感染过程中对于宿主免疫反应的作用机制尚不明确。我们前期miRNA组学的结果表明，当机体感染IAV后，miR-29家族的表达显著上调，尤其是miR-29c。围绕miR-29c我们进行了如下的研究。第一，首先分析了先前的关于IAV不同时相感染A549细胞的miRNA表达谱数据，并应用Real-timePCR对表达差异显著的miR-29c进行了验证。预测得到了miR-29c的潜在靶基因集合，并对此进行生物信息学数据挖掘，其中由于A20是一个重要的机体炎症和抗病

4、毒信号通路的调节蛋白，对于维持机体的免疫稳态具有重要作用，据此筛选出miR-29c/A20互作对作为研究的切入点；第二，利用双荧光素酶报告基因技术、Real-timePCR以及WesternBlotting实验对miR-29c与A20之间的相互作用机制进行了确证，并证明IAV能够有效增加A20mRNA的稳定性，且通过过表达和表达抑制的系列实验证明IAV通过诱导miR-29c的表达促进了细胞A20的表达；第三，在功能学实验部分，先利用荧光素酶报告基因和WesternBlotting技术证明miR-29c/

5、A20能有效抑制NF-κB信号通路的激活。我们通过Real-timePCR方法对miR-29c/A20互作对在IAV感染A549细胞内TNF-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、以及IL-8等细胞因子的mRNA表达变化进行分析，证明miR-29c能通过上调A20的表达来抑制IAV诱导的NF-κB下游抗病毒和促炎细胞因子的表达。综上所述，IAV的感染可以通过上调miR-29c进而增加A20的表达来抑制宿主天然抗病毒免疫。I关键词：流感病毒，miRNA，A20，天然免疫IIAbstractInductio

6、nofthecellularmiR-29cbyinfluenzavirusinhibitstheinnateimmuneresponseInfluenzaAviruses(IAVs)arenegative-sense,single-stranded,segmentedRNAviruses,whichprimarilytargetsrespiratoryepithelialcellsandproducesclinicaloutcomesrangingfrommildupperrespiratoryinfect

7、iontoseverepneumonia.MicroRNAs(miRNAs)representafamilyofsmallnoncodingRNAscontrollingtranslationandtranscriptionofmanygenes.Thesemoleculesnegativelyregulatesgeneexpressionbybindingcompletelyorpartiallytotargetprotein-codingmRNAsattheposttranscriptionalle

8、velfordegradationortranslationalinhibition.ThousandsofmiRNAshavesincebeenidentifiedinvariousorganismsandplayessentialrolesingeneexpressionregulationofmanycriticalcellularprocessessuchasdevelopment,differentiation,prolifera