免疫抑制宿主巨噬细胞toll样受体的表达变化

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1、免疫抑制宿主巨噬细胞Toll样受体的表达变化【摘要】　　目的：检测小鼠腹腔巨噬细胞TLRs表达情况及糖皮质激素甲基强的松龙对TLRsmRNA表达的影响.方法：应用RTPCR检测正常小鼠腹腔巨噬细胞TLR113的表达；并以甲基强地松龙为免疫抑制剂，诱导小鼠免疫抑制后检测腹腔巨噬细胞TLRsmRNA表达变化.结果：已发现的TLR113在正常小鼠腹腔巨噬细胞均有表达；小鼠腹腔巨噬细胞经糖皮质激素处理后，部分TLRs在mRNA水平上可被上调.结论：Toll样受体是抗真菌先天免疫的重要组成部分.甲基强的松龙对巨噬细胞有毒性作用

2、，甲基强的松龙注射后可导致小鼠腹腔巨噬细胞明显减少.【关键词】小鼠；泼尼松龙；免疫抑制法；Toll样受体　　【Abstract】AIM:Totesttheexpressionoftolllikereceptor113(TLR113)mRNAintheperitonealmacrophagesofnormalmiceandthechangeofTLRsmRNAexpressioninperitonealmacrophagesofimmunosuppressedmice.METHODS:TheexpressionofTL

3、R113mRNAintheperitonealmacrophagesofnormalmiceinedbyRTPCRtechnique.ImmunosuppressedmiceRNAintheperitonealmacrophagesofimmunosuppressedmiceacrophagesofnormalmice.SomeofTLRsRNAleveliceportantponentpartsofinnateimmunitytofungalinfections.Prednisolonehasatoxiceffect

4、tomacrophagesanddecreasestheperitonealmacrophagesofthemice.　　【Keyice;prednisolone;immunosuppression;tolllikereceptor　　0引言　　Toll受体在果蝇的发育和抗真菌免疫中具有显著作用.实验证实TLRs(tolllikereceptors)表达异常会使免疫炎症反应不能正常发生，降低机体对病原微生物的清除能力［1］.糖皮质激素(glucocorticoids,GC)可有效控制炎症和抑制免疫反应［2］.近20年来

5、，由于应用糖皮质激素而致机体免疫机能低下的患者患侵袭性曲霉菌病日趋增多.体内外实验显示糖皮质激素在免疫和炎症应答中有促进和抑制作用，甚至出现双向作用［3］.为了解糖皮质激素对TLRs表达的影响，我们以甲基强地松龙为免疫抑制剂，在诱导小鼠免疫抑制后检测腹腔巨噬细胞TLRsmRNA的表达情况.　　1材料和方法　　1.1材料　　Balb/c小鼠24只，雌性，6～8周龄，体质量20～25g（第四军医大学实验动物中心）.总RNA提取试剂TRIZOLReagent（Gibco公司），MMLVReverseTranscriptase

6、和ReverseTranscriptionSystem(Promega公司)，TaqDNA聚合酶和dNTPs(TaKaRa公司)，不完全RPMI1640(LifeTechnology公司)，甲基强的松龙，40mg/支(比利时法玛西亚普强公司).　　1.2方法　　1.2.1糖皮质激素诱导小鼠免疫抑制及腹腔巨噬细胞计数　　将免疫抑制组小鼠12只皮下注射甲基强的松龙100mg/kg·d，共3d.正常对照组小鼠12只皮下注射同体积注射用水.第4日脱颈处死小鼠，浸泡于750mL/L乙醇1min，剪开腹部皮肤，暴露腹部，用注射器吸取5

7、mL无血清RPMI1640培养液注入腹腔，轻揉腹腔1～2min,用吸管吸取腹腔巨噬细胞悬液，移入离心管中计数.　　1.2.2细胞总RNA的提取　　收集腹腔巨噬细胞悬液，2000g离心10min，弃上清，RPMI1640洗涤1次.用TRIZOLReagent一步法提取巨噬细胞总RNA.　　1.2.3TLR1~13PCR引物　　根据GenBank公布的TLR1～13（除TLR10）已知序列设计引物，由上海生工生物工程技术服务公司合成（表1）.表1基因名称和序列（略）　　1.2.4RTPCR扩增TLR1～13基因及内参照βa

8、ctin基因按照说明书，以RandomPrimers为引物，将从小鼠腹腔巨噬细胞中提取的总RNA逆转录合成cDNA.分别用TLR及内参照βactin两组引物进行PCR扩增，反应条件为：95℃5min，95℃30s，55℃30s，72℃30s，循环32次，延伸7min.　　1.2.5扩增产物检测取10μ