检测五种腹泻相关病毒多重rt-pcr方法的建立和2013年9月～2014年10月广州地区腹泻病原谱调查

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1、分类号密级ＵＤＣ编号硕壬学位论文检測五轉化泻相关病毒多重ＲＴ－ＰＣＲ方法的建立和￣２０。年９月２０Ｈ年１０月广州地区腹泻病原谱调査ｍ加－化ｔｅｃｔｅｄＤｅｖｅｌｏｍｅｎｔａｎｄａｌｉｃａｔｉｏｎｏｆａｉｐｌｅｘＲＴＰＣＲｍｅ化ｏｄｐｐｐ－Ｉｎｖｅｓｔ！ｏｆｄｉａｒｒｈｅａ５ｔｅｓｏｆｄｉａｒｒｈｅａｒｅｌａ化ｄｖｉｒｕｓａｎｄ阱村ｏｎｙｐｐａｔｈｏｇｅｎｓｉｎＧｕａｎｇｚｈｏｕｆｒｏｍＳｅｐｔｅｍｂｅｒ２０口化Ｏｃ化ｂｅｒ２０１４罗欣导师巧名掉小燕时究贵、亩宁教巧

2、专业名巧瞄床栓验诊断学．培养类型学术型论文巧巧日期２０１Ｓ年３月南方医科大学２０１２级硕去学位论文检測五种底泻相关病毒多重ＲＴ－ＰＣＲ方法的建立和？２０１３年９月２０１４年１Ｄ月广刑地区底泻病原谱调查ｌｉｃｏｍｌｔ－ＤｅｖｅｌｏｍｅｎｔａｎｄａａｔｉｏｎｆａｕｉｌｅｘＲＴＰＣＲｐｐｐｐ－ｍｅｔｈｏｄｄｅｆｅｃｔｅｄ５ｔｙｐｅｓｏｆｄｉａｒｒｈｅａｒｅｌａ化ｄｖｉｒｕｓａｎｄＩｎｖｅｓ村ｇａｔｉｏｎｏｆｄｉａｒｒｈｅａｐａｔｈｏｇｅｎｓｉｎＧｕａｎｇｚｈｏｕｆｒｏｍＳｅｐｔ：ｅｍｂｅｒ

3、２０１３化Ｏｃｔｏｂｅｒ２０１４０１２ＺＸ００４－课题柬源：国家重大科技专项课题（２１０２１３和２０１－００４１３ＺＸ０００４８０５）学位申请人罗欣导师姓名车小詞、富宁Ｉ专业克称临床检验诊断学培养类型学术型培养层次硕去研究生所在学院第二临床医学院答辩委主席吴玉章答辩委成贝赵卫裘宇容温旺荣陈茶２０１５年０５月１０日广州硕去学位论文检测五种腹泻相关病毒多重ＲＴ－ＰＣＲ方法？的建立和２０１３年９月２０１４年１Ｄ月广州地区腹泻病原谱调查硕壬研究生：罗欣指导教师：究员富宁教授

4、摘要据ＷＨＯ统计，全球每年约有２０亿腹泻病例，较差的卫生状况导致发展中国家腹泻更为普遍。２０００年至２０１０年全球儿童死亡病因统计分析，腹泻疾病是Ｗ继肺炎和围产期疾病之后导致５岁Ｗ下儿童死亡的第Ｈ大原因。全球腹泻致死。率不断下降，但是腹泻发病率仍然很髙在发展中国家，腹餐仍然是引起死亡一Ｐ１。和伤残的主要原因之在我国，感染性腹泻在法定传染病中报告发病率位居３一一前位。作为公共卫生问题么的感染性腹泻仍然是类全球性的、危害很大的疾病，不可掉Ｗ轻也。建立快速检测和筛査腹泻病原谱的方法，研究腹泻病病原体的种类和流行病学，将有助于控制腹泻病原体在全球范围内

5、的流行与传播。３、、腹泻的定义为每日排便次或Ｗ上，且大便性状有改变（呈稀便水样便。粘腺便或腺血便等），可伴有呕吐、发热和呼吸道症状等临床症状腹泻病因复。杂与感染性腹餐相关的病原体种类繁多，，可分为感染性腹泻和非感染性腹泻包括多种细菌、病毒、寄生虫和真苗，其中Ｗ前两类病原体最为常见。常见细菌感染性腹泻病原体有致病性大肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、沙口氏菌、弯曲茜、志贺氏菌、霍乱弧菌和艰难梭菌等；常见病毒感染性腹泻病原体有轮状病毒、诺如病毒ＧＩ／ＧＩＩ型、星状病毒、腺病毒４０／４１型和札如病毒等。早期、快速、高通量及特异灵敏的实验室检测技术对腹泻

6、病原体的鉴定、临床诊断与Ｉ摘要正确用药、尽快控制病情及流行病学研究均极为重要。腹泻病原体检测方法中，经典的病原体检测技术为分离培养技术。细菌、！＇、病毒的分离，培周期长，不同细苗病毒所需培养条件不同，操作繁琐，对技术人员要求髙，某些病毒目前没有合适的培养方法，包；免疫学检测技术括乳胶凝集试验、酶免疫测定、放射免疫测定、免疫胶体金法，免疫层析法等，己广泛应用于临床检测中，但其对特异性单克隆抗体准确识别的严格要求及多数体系缺少集成性等限制了诊断的快速与高通量、；分子生物学方法，能更准确，尤其是低浓度的病毒感染灵敏地检测标本中的病毒核酸

7、，最大的优点在于可Ｗ进一步对病毒进行基因型的研究，不会受到制备分型单克隆抗体的限制，对流行病学研究具有重要意义。上述的方法中，分子生物学检测方法，其在灵敏度和特异性方面具有明显的优势。并且，随着基因若片技术的逐渐成熟，由简单的单一反应只能扩増并检测一ＰＣ艮方法一种核酸的，逐渐发展为次反应能扩一－ＰＣ民方法。因此増并检测多种病原体核酸的多重ＲＴ，利用种特异、灵敏、高通量的检测方法，Ｗ最大程度覆盖检测腹泻病原体，将为腹泻疾病的临床治疗和流行病学研究提供有效的参考。本研究包括Ｗ