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《猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒双重rt-pcr方法的建立和初步应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒双重RT-PCR方法的建立和初步应用?94?生物技术中国畜牧兽医2011年第38卷第6期猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒双重RT—PCR方法的建立和初步应用陈静.张小飞,范红结.,黄显明(1.南京天邦生物科技有限公司,江苏南京211102;2.南京农业大学动物科技学院,江苏南京210095)摘要:根据GenBank上已发表的猪瘟病毒(CSFV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的全基因序列,进行对比分析,分别设计合成两对能特异性扩增CSFV,BVDV的引物.经过条件优化后,建立了检测CSFV和
2、BVDV的双重RT—PCR方法,扩增两种病毒的片段,大小分别为938,650bp.应用该方法对11批牛睾丸细胞,7批胎牛血清,6O个ItE次的猪瘟细胞苗,10份全血样及10份组织样进行检测.通过试验证明,所建立的方法具有良好的特异性和敏感性,为防止猪瘟细胞苗的污染及进行CSFV和BVDV鉴别诊断提供了有效方法.关键词:CSFV;BVDV;RTPCR;检测中图分类号:$858.28文献标识码:A文章编号:16717236(2011)06009404猪瘟(classicalswinefever,CSF)是由猪瘟病
3、毒员,BVDV不仅可以感染牛,还可以感染猪,引起的(csFV)引起的一种高度接触性烈性传染病.猪不临床症状和病理变化与猪瘟相似(Paton等,1994).分年龄,性别和品种均易感染,一年四季均可发生.BVDV与CSFV的核苷酸同源性约为6O,氨基酸中国每年因猪瘟造成的经济损失达数十亿,目前针同源性约为85(谢西锋等,2001),在血清学上存对猪瘟的主要治疗措施是疫苗免疫接种.在交叉反应(Thiel等,1991),因而血清学方法难以牛病毒性腹泻病毒(bovineviraldiarrheavi一区分,用常规的病原
4、检测方法难以对BVDV和CSrus,BVDV)与CSFV均属黄病毒科,瘟病毒属成FV进行鉴别检测和诊断.——猪瘟细胞苗的生产需要牛睾丸细胞(NBTE)和收稿日期:201011_17胎牛血清来繁殖猪瘟病毒,如果NTBE或胎牛血清作者简介:陈静(1982--),女,江苏人,硕士生,研究方向:兽医微中含有BVDV,则有可能将BVDV这种外源病毒带……..J土三.………入猪瘟细胞苗中,造成猪瘟细胞苗的污染.另外通信作者:张小飞,男,研究员,硕士生导师.Email:xiaofei0804…………'～'…一一..…'''
5、'国…用含BVDV抗体的胎牛血清也会干扰猪瘟病毒的12ToyamaH,NishibayashiE,SaekiM,eta1.FactorsrequiredforthecatalyticreactionofPqqC/Dwhichproducespyrrol.quino¨nequinone[J~.BiochemBiophysResCommon,2007,354(1):29O～295.PreparationofRabbitAnti--gooseIgG?_HRPandPreliminaryApplicationLIUF
6、ei～,TANGWei—jie,HANQing—lin,ZHA()Ting—ting,GAOLi—qin,YANXiao—ling(1.CollegeofVeterinaryMedicine,SichuanAgriculturalUniversity,Ya'an625014,China;2.KeyLaboratoryofAnimalDiseaseandHumanHealthofSichuanProvince,Ya'an625014,China;3.BureauofAnimalHusbandryofDaying
7、,SichuanProvince,Daying629300,China)Abstract:TostudyonpreparationofrabbitantigooseIgG—HRP,theexperimentationisolatedIgGfromthegooseeggyolk,andthemethodwasemployedtOdilutewithwatern—octylicacid—ammoniasulfateinitialextraction,outsaltdialysisandDEAEA50chromat
8、ography.ProteinnucleicaciddetectorandSDS-PAGEindicatedthelgGconcentration;thepurifiedIgGwaslabeledwithHRP:effectofGPVVP3genevaccinewasdetectedwiththelabeledantibody.Theresultsindicatedthattheinitialext
