牛病毒性腹泻粘膜病荧光定量rt-pcr检测方法的建立

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1、分类号：S855.3学校代码：10758密级：公开学号：09020274硕士学位论文牛病毒性腹泻/粘膜病荧光定量RT-PCR检测方法的建立TheMethod-basedFluorescentQuantitativeRT-PCRforDetectionofBovineViralDiarrhea/MucosalDisease研究生姓名郭春娟导师姓名及职称冉多良教授学位门类级别农学硕士专业名称临床兽医学研究方向动物分子病毒学所在学院动物医学学院新疆·乌鲁木齐二〇一二年六月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工

2、作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于学位论文使用授权的说明本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：新疆农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，允许论文被查阅和借阅。本人授权新疆农业大

3、学将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日本文是自治区高技术发展计划项目“牛病毒性腹泻/粘膜病检测试剂盒研制与核酸疫苗构建”（项目编号：201010101）的部分研究成果课题主持人:冉多良（新疆农业大学）牛病毒性腹泻/粘膜病荧光定量RT-PCR方法的建立摘要牛病毒性腹泻/粘膜病(Bovineviraldiarrhea/mucosaldisease，BVD/MD)，由牛腹泻/粘膜病毒引起的，是黄

4、病毒科、瘟病毒属的成员之一，在牛的病原学上具有很重要的地位。目前为止，还没有有效的预防和控制BVDV的措施。因此，建立高效快速的检测方法，对于该病的早发现，早防治具有重要作用。本文根据BVDV5'-UTR区的高保守性的特点，通过引物、探针设计和反应条件的优化，分别建立了检测BVDV的通用型RT-PCR方法、通用型荧光定量RT-PCR方法、同时检测BVDVⅠ型和Ⅱ型病毒的双重荧光定量RT-PCR方法。其次，通过引物设计和搭桥法PCR扩增，获得BVDV内标荧光PCR扩增模板，并构建了含内标物的BVDV通用型荧光定量RT-PCR方法

5、。上述方法具有较好的特异性、灵敏度与可重复性，内标物的构建还可对反应过程进行监测，确保检测结果的准确性。上述方法的建立，达到对该病快速、灵敏、准确检测的目的。关键词：牛粘膜腹泻病病毒；RT-PCR；荧光定量RT-PCR；诊断方法建立ITheMethod-basedFluorescentQuantitativeRT-PCRforDetectionofBovineViralDiarrhea/MucosalDiseaseAbstractBovineviraldiarrhea/mucosaldisease(Bovineviraldia

6、rrhea/mucosaldiseasetheBVD/MD)，causedbyBovineviraldiarrhea/mucosalvirus,thisvirusistheFlaviviridae,oneofthememberofthePestivirusgenus，havinganimportantpositionontheetiologyofthecattle.Sofar,thereisnoeffectivepreventionandcontrolmeasuresofBVDV.Therefore,toestablishar

7、apidandefficientdetectionmethodforearlydetectionofBVDVisveryimportantforearlyprevention.Inthisstudy,accordingtohighlyconservedcharacteristicsoftheBVDV5'-UTR,primersandprobeweredesigned,Throughoptimizedofreactionconditions,Establishedthegeneralpurposeofthedetectionof

8、BVDVbyRT-PCR,universalfluorescentquantitativeRT-PCRmethod,simultaneousdetectionofBVDVtypeⅠandtypeⅡvirusdualfluorescencequantitativeRT-PCRm