牛病毒性腹泻粘膜病elisa方法的建立及血清学调查

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1、万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：力侈尔场时间：加，罗年，上月7日关于学位论文使用授权的说明本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：新疆农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位

2、论文，允许论文被查阅和借阅。本人授权新疆农业大学将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：力眵尔场时间：加J多年，z月夕日导师签名：∥·由彩色／时间：刖年嗍夕毋万方数据本文是自治区高技术发展计划项目“牛病毒性腹泻／粘膜病检测试剂盒研制与核酸疫苗构建，，的部分研究成果(项目编号：201010101)课题主持人：冉多良教授万方数据牛病毒性腹泻／粘膜病ELISA方法的建立及血清学调查摘要牛病毒性腹泻病毒(BVDV)为黄病毒科，瘟病毒属成员，是一种在世界范围内对造成家畜健康严重危

3、害的病原。该病能引起患畜高热、鼻内粘膜及口腔出血或产生大量粘液、母牛奶量减少甚至停止产奶、怀孕母牛流产或产死胎、畸形胎等症状。牛病毒性腹泻病毒与猪瘟病毒和羊边界病毒在血清学上有交叉反应。目前为止，还没有有效的预防和控制BVDV的措施。建立高效快速的检测方法，对于该病的早发现、早防制具有重要作用。本研究以纯化的BVDV为包被抗原，建立了检测BVD血清抗体的间接ELISA检测方法。经优化选择，确定了ELISA最佳工作条件：包被液为磷酸盐缓冲溶液，4"C包被过夜；包被抗原稀释度为1：200，4。C孵育过夜；封闭液为5％脱脂奶粉，37℃封闭2h：被检血清稀释度为1：100，37

4、。C孵育lh；HRP标记兔抗牛IgG稀释度为1：10000，37"C孵育30min，阴阳性界限值为0．320。试验结果表明，建立的牛病毒性腹泻病血清抗体ELISA检测方法具有特异性高、灵敏性好、变异性小的优点，与国外试剂盒相比符合率为91．3％。总之，本研究建立的牛病毒性腹泻病抗体ELISA检测方法，为新疆地区牛病毒性腹泻的监控奠定了基础。关键词：牛病毒性腹泻病毒；间接ELISA方法；血清学调查；建立万方数据EstablishmentofIndirectELISAAssayforBovineViralDiarrhea／MucosalVirusandItsSerologi

5、calInvestigationAbstractBovineviraldiarrheavirus(BVDV)isonememberoftheFlaviviridae，Pestivirus．Ifsaseriouspathogenseriouslyendangertothelivestock’healtharoundtheworldwide．ThisdiseaseCancausepatienthi曲fever，oralandnasalmucosalbleedingormucusoversecretion，reductionofmilkproductionevenoffpro

6、duction，pregnantCOWabortionorstillbirth，featusanomaliesandothersymptoms．BVDVhasserologicalcross·reactionswithCSFVandBDVoSofar,thereisnoeffectivepreventionandcontrolmeasuresofBVDV．Therefore，toestablisharapidandefficientdetectionmethodforearlydetectionofBVDVisveryimportantforearlypreventio

7、n．Inthisstudy,afterbeingpassagedinMDBKcells，BVDVWaspurifiedbyultracentrifugation，and．anindirectenzyme—linkedimmunosorbentassay(ELISA)fordetectingserumantibodyagainstBVDWasdevelopedandoptimalized．AfterbeingcoatedwithBVDVwhichWasdilutedwithphosphatebufferto1：200at4"Cfor12h，