牛病毒性腹泻粘膜病病毒的分离及生物学特性研究

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5、摘要分离和鉴定新疆地区BVDV流行毒株，掌握该毒株的生物学特性。在新疆北疆部分地区采集牛病毒性腹泻（BVD）疑似病例的粪便，通过RT-PCR检测、细胞分离培养、间接免疫荧光抗体检测、免疫电镜观察及血清中和试验五种方法对BVDV进行分离和鉴定。对毒株的TCID50测定，对毒株分别进行抗乙醚、氯仿试验、抗胰蛋白酶试验、耐酸碱性试验、温度敏感性试验及核酸分型试验等理化特性检测。经RT-PCR诊断，病料在预期扩增286bp处出现了目的片段。将RT-PCR诊断后为阳性的粪便，接种于密度约为80%单层MDBK细胞出现了细胞病变，盲传5代至出现典型的细胞病变。将F5代

6、细胞培养物采用间接免疫荧光抗体检测，结果产生了与C24V标准毒株相同的特异性黄绿色荧光。免疫电镜观察到了大量BVDV粒子，形状呈球形，大小约20-40nm。血清中和试验中抗体阳性血清处理组细胞均未出现细胞病变，病毒完全被抗体阳性血清中和。根据以上结果确定为BVDV毒株。对BVDV分离株进行毒价和理化特性测定，结果表明该毒株TCID-4.550为10/0.1mL，对乙醚和氯仿敏感，对胰蛋白酶敏感，耐碱不耐酸，对温度敏感，经54℃60min完全被灭活。本研究成功分离到一株新疆BVDV毒株，掌握了该毒株的生物学特性，为今后该病的诊断和防控奠定了基础。关键词：牛

7、病毒性腹泻/粘膜病病毒；分离鉴定；生物学特性ⅠResearchontheIsolationandBiologicalCharacteristicsofBovineViralDiarrhoea/MucosalDiseaseVirusAbstractInordertoisolateandidentifyBVDVstrainsofXinjiang,graspthebiologicalcharacteristicsofthestrain.Gatheringfeceswhichsuspectedasbovineviraldiarrhea(BVD)inthenort

8、hernpartsofXinjiang.DetectedbyRT-PCR,cel