t细胞来源exosomes调节妊娠丢失孕鼠母胎界面ctla-4及foxp_3表达的研究

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1、授予单位代码10089学号或申请号20123208HebeiMedicalUniversity硕士学位论文专业学位T细胞来源Exosomes调节妊娠丢失孕鼠母胎界面CTLA-4及FoxP3表达的研究研究生：王利飞导师：郝淑维教授崔澂教授专业：妇产科学二级学院：第四医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论

2、文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。..‘研究生签名导师签章二级学院领导盖章：1年•^月曰河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：外导师签章!辦r年3月扣曰目录中文摘要……………………………………………………………………

3、1英文摘要……………………………………………………………………4英文缩写……………………………………………………………………8研究论文T细胞来源Exosomes调节妊娠丢失孕鼠母胎界面CTLA-4及FoxP3的研究前言……………………………………………………………………9材料与方法…………………………………………………………10结果……………………………………………………………………14附图……………………………………………………………………16附表……………………………………………………………………21

4、讨论……………………………………………………………………22结论……………………………………………………………………24参考文献………………………………………………………………25综述调节性T细胞与Th17免疫失调与临床疾病关系的研究进展……28致谢…………………………………………………………………………41个人简历……………………………………………………………………42中文摘要T细胞来源Exosomes调节妊娠丢失孕鼠母胎界面CTLA-4及FoxP3表达的研究摘要目的：正常妊娠的发生和维持有赖于母体对胚

5、胎半同种抗原的免疫耐受，一旦该状态被打破将导致流产的发生。连续发生3次或3次以上的反复性妊娠丢失患者中，约50%并无明确临床病因，称为不明原因反复自然妊娠丢失（URSA）。研究妊娠过程中母胎免疫耐受形成的确切机制，诱导母胎免疫耐受的形成是治疗URSA的关键。目前国内外多采用丈夫或第三方淋巴细胞对患者进行主动免疫治疗，但是细胞需新鲜制备，且稳定性差、不易保存，具有明显局限性，不利于临床推广。本研究采用自发性流产动物模型，通过过继转输淋巴细胞及其来源Exosomes，分析T细胞来源Exosomes调节妊娠丢失

6、孕鼠母胎界面CTLA-4及FoxP3表达的变化，探究Exosomes诱导母胎免疫耐受机制。方法：1雄性无关个体脾细胞及其Exosomes的制备：摘眼球放血后断颈处死BALB/c雄鼠，无菌条件下解剖取脾组织，制备脾单个细胞悬液，采用蔗糖密度梯度离心联合超滤技术制取脾脏T细胞来源Exosomes。2建立妊娠丢失实验动物模型及实验分组：雌雄小鼠随机按2:1合笼交配；以CBA/J(♀)×BALB/c(♂)为正常妊娠对照组(Control组)，以CBA/J(♀)×DBA/2(♂)建立妊娠丢失动物模型。将流产孕鼠随机

7、分为3组分别为：妊娠丢失组（URSA组，孕第4日着床期尾静脉注射生理盐水），细胞治疗组（CellularTherapy组，孕第4日着床期尾静脉注射雄鼠脾细胞），非细胞治疗组(Non-cellularTherapy组，孕第4日着床期尾静脉注射Exsomes)。3各组胚胎发育情况的观察：于妊娠第14日处死各组CBA/J孕鼠，无菌条件下解剖，取胎盘组织，测量胎盘各径线计算胎盘体积，分别计数各组胚胎吸收及存活个数，计算各组胚胎吸收率及妊娠丢失率。4孕鼠母胎界面CTLA-4、FoxP3的免疫组化检测：制备孕鼠胎盘织

8、石蜡包埋切片，免疫组化染色后进行图像分析，CTLA-4、FoxP3表达强度1中文摘要以灰度值(GS)表示，数值大小与阳性表达强度呈反相关；以矩形走形计数200个细胞，计算各组阳性细胞表达百分率。5统计学处理：各组数据均通过SPSS13.0版本软件进行正态性、方差齐性检验。采用卡方检验比较各组孕鼠胚胎发育情况，采用F检验对孕鼠胎盘CTLA-4以及FoxP3的表达进行单因素方差分析（ANOVA），S-N-K法进一步对多个样本均数进