趋化因子ccl28在母-胎界面的表达及其调节作用

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1、万方数据复旦大学附属妇产科医院博士研究生毕业论文趋化因子CCL28在母一胎界面的表达及其调节作用ExpressionandRegulatoryRolesofChemo酗neCCL28atMaternal-fetalInterfaceinHumanEarlyPregnancy研究生姓名学科及专业导师导师组成员孙婵妇产科学李大金教授杜美蓉副研究员二零一三年三月万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8第一部分CCL28在人早孕母一胎界面的表达及调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一12第二部分CCL28对蜕膜基质细胞生物学行为的调节作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27第三部分人早孕蜕膜CCRl0+Treg功能表型⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41第四部分CCL28对CCRl0+Treg的募集和调节作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．54结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯67参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯68致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯75附录l⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．76附录2⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．78综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯79万方数据孙婵博士学位论文中文摘要趋化因子CCL28在母．胎界面的表达及其调节作用博士研究生孙婵导师李大金中文摘要趋化因子是一类由67．127个氨基酸组成的细胞因子，通过与受体结合发挥多种生物学作用。一种趋化因子可以和一个或多个受体结合，一种趋化因子受体也可有多个趋化因子作为配体。通过配受体相互作用，构成了人体内复杂的趋化因子网络，共同执行着复杂的生物

4、学功能。对趋化因子的功能的研究最初开始于炎症；随研究深入，人们发现趋化因子不仅具有趋化白细胞向炎症局部游走的作用，还参与机体发育，肿瘤发生及进展等过程。我们课题组已经解析了CXCLl2／CXCR4、CXCLl6／CXCR6和CCL2／CCR2在母一胎界面的生物学功能，及参与母一胎免疫调节的机制。基于母一胎界面可作为特化的粘膜局部，我们在此选择了上皮性趋化因子CCL28及其受体CCRl0，研究其在母胡台界面和母一胎免疫调节中的作用。第一部分CCL28在人早孕母．胎界面的表达及调控目的分析证实母．胎界面存在CCL28及其调控。方法收集人早孕期绒毛和蜕

5、膜组织，采用免疫组织化学方法检测CCL28在早孕母．胎界面的表达。分离培养蜕膜基质细胞、蜕膜腺上皮细胞和滋养细胞，采用细胞免疫化学方法检测CCL28的表达。采用RT-PCR、In—cellwestern和流式细胞术进一步证实CCL28在蜕膜基质细胞的表达。对原代培养的蜕膜基质细胞，用促炎性细胞因子或雌、孕激素处理，研究这些因素对CCL28表达的调控作用。结果早孕绒毛和蜕膜组织均能检测到CCL28的表达。原代培养的蜕膜基质细胞、蜕膜腺上皮细胞和滋养细胞均表达CCL28。RT-PCR和In．cellwestern进一步证实了CCL28在蜕膜基质细胞的

6、表达，流式细胞术结果显示90％以上的蜕膜基质细胞表达CCL28。促炎性细胞因子IL-1p、TNF—c【、IFN吖和IL．17A上调CCL28的表达。雌激素和孕激素对CCL28的表达无影响。结论母．胎界面可表达CCL28，促炎性细胞因子上调CCL28在蜕膜基质细万方数据孙婵博士学位论文中文摘要胞的表达。第二部分CCL28对蜕膜基质细胞生物学行为的调节作用目的检测蜕膜基质细胞CCL28受体CCRl0和CCR3的表达，解析其对蜕膜基质细胞生物学行为的调节作用。方法流式细胞术分析来自正常早孕和不明原因复发性流产的蜕膜基质细胞的CCRl0和CCR3的表达。

7、CCK8法研究CCL28对蜕膜基质细胞增殖和活力的影响，侵袭实验检测CCL28对蜕膜基质细胞侵袭能力的影响，AnnexinV和PI染色后流式分析CCL28对蜕膜基质细胞凋亡的作用。细胞因子处理蜕膜基质细胞后，流式细胞术分析CCRl0和CCR3在蜕膜基质细胞的表达。ELISA比较正常和不明原因复发性流产的蜕膜基质细胞的IL．1B、TNF．G【和IL．17A的分泌。结果不明原因复发性流产蜕膜基质细胞的IL．1B、TNF一0【和IL一17A的分泌水平高于正常蜕膜基质细胞。不明原因复发性流产蜕膜基质细胞的CCRl0和CCR3的表达均高于正常蜕膜基质细胞。

8、CCL28对蜕膜基质细胞的增殖和活力无影响；通过其受体CCRl0和CCR3促进蜕膜基质细胞的侵袭，CCL28主要通过CCR3受体促进DS