趋化因子配体21在骨癌痛大鼠脊髓的表达及其作用

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1、徐州医学院硕士学位论文趋化因子配体21在骨癌痛大鼠脊髓的表达及其作用姓名：柳娇申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：申文2012-04徐州医学院硕士学位论文趋化因子配体21在骨癌痛大鼠脊髓的表达及其作用中文摘要目的探讨趋化因子配体21(CCL21)在骨癌痛大鼠脊髓的表达及其作用。方法第一部分：健康雌性SD大鼠42只，体重160～1809，采用随机数字表法，将大鼠随机分为7组(n_6)：正常组(naive组)、假手术组(sham组)、骨癌痛3天组(BCP3)、骨癌痛7天组(BCP7)、骨癌痛14天组(BCPl4)、骨癌

2、痛21天组(BCP21)、骨癌痛28天组(BCP28)。分别于术前1d，术后1、3、5、7、14、21、28d测定大鼠接种侧后肢的机械缩足反射阈值(PMWT)；采用苏木素一伊红(hematoxylin．eosin，HE)染色法观察各组大鼠接种侧胫骨的病理变化；采用免疫印迹法检测各组大鼠脊髓CCL21的表达水平。第二部分：健康雌性SD大鼠18只，体重160～1809，采用随机数字表法，将大鼠随机分为三组(n-6)：正常组(naive组)、假手术组(sham组)、骨癌痛组(BCP组)。分别于术前1d，术后1、3、5、7、1

3、4d测定大鼠接种侧后肢的机械缩足反射阈值(PMwT)，采用HE染色法观察各组大鼠接种侧胫骨的病理变化；采用免疫荧光技术观察各组大鼠脊髓CCL21的表达部位。第三部分：健康雌性SD大鼠56只，体重160～1809，采用随机数字表法，将其随机分为7组(n=8)：假手术组(I组)、假手术+溶媒PBS组(II组)、假手术+CCL21中和抗体组(III组)、骨癌痛组(1V组)、骨癌痛+溶媒PBS组(V组)、骨癌痛+对照IgG组(VI组)和骨癌痛+CCL21中和抗体组(VII组)。Ⅳ组、V组、Ⅵ组和Ⅶ组采用胫骨骨髓腔内注射Walk

4、er-256乳腺癌细胞制备胫骨癌痛模型，I组、II组和III组骨髓腔内注射等体积生理盐水，各组于建模后第14天观察大鼠胫骨的影像学表现。其中V组、Ⅵ组和Ⅶ组于注射Walker-256乳腺癌细胞后第14天经L5～6蛛网膜下腔分别注射溶媒PBSl51al、亲和纯化的正常羊IgGlolag／15I．tl和CCL21中和抗体组10}tg／159l；II组和III组于相同时点经L5～6蛛网膜下腔分别注射徐州医学院硕士学位论文潍：媒PBSl5p,1、CCL21中和抗体组10p．g／151xl。于注射Walker-256乳腺癌细胞或

5、生理盐水前ld(Zo，即基础值)、注射Walker．256乳腺癌细胞或生理盐水后1、3、5、7、14d(Zl～5)及给药后0．5、l、2、4、8、12、24、48h(T1．8)时测定大鼠接种侧后肢的机械缩足反射阈值(PMWT)。结果(1)疼痛行为学：造模后第7、14、21、28天，骨癌痛大鼠接种侧后肢PMWT降低(P

6、痛行为学：造模后第7、14天，骨癌痛大鼠接种侧后肢PMWT降低(P

7、高(P<0．05)，在8h达到峰值(P<0．01)；与Ⅳ、V组比较，Ⅵ组鞘内给药后PMWT差异无统计学意义(胗0．05)。结论1．胫骨癌痛大鼠脊髓水平CCL21表达量上调。2．CCL21在脊髓背角表达于神经元。3．鞘内注射CCL21中和抗体，能够减轻胫骨癌痛大鼠已产生的痛觉过敏。提示趋化因子CCL21参与大鼠胫骨癌痛的产生和维持，并且可能通过脊髓背角的神经元在这个过程中发挥作用。关键词骨癌痛；CCL21；痛觉过敏；脊髓徐州医学院硕士学位论文TheexpressionandroleofCCL21inthespinalof

8、rattibialD0necancerDalnmonel1●1●AbstractObjeetiveThepresentstudywasdesignedtoinvestigatetheexpressionandroleofChemokineCCL21inthespinalofrattibialbonecancerpainmodel．