趋化因子ccl28在缺氧诱导肝癌细胞迁移侵袭中的作用研究

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1、後旦大学万方数据硕士学位论文学校代码：10246学号：09211210027趋化因子CCL28在缺氧诱导肝癌细胞迁移侵袭中的作用研究院系：专业：姓名：指导教师：完成日期：中山医院肿瘤学周莹张博恒教授2012年4月22日万方数据论文题目趋化因子CCL28在缺氧诱导肝癌细胞迁移侵袭中的作用研究TheroleofchemokineCCL28inhypoxiainducedinvasion1o‘一●■■●annmigration0tnepat0CeUUlarCarClnoma指导小组成员名单吴伟忠殷欣教授主治医

2、师万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯Ig⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5刚舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5第一部分HIF_1a与CCL28在肝细胞癌中表达及相关性的探讨材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18讨{仑⋯⋯⋯⋯0Oil·Qgl⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23第二部分降低CCL28表达对缺氧条件下肝癌细胞迁移和侵袭的影响材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OI0⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35全文总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39文献综述一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40文

4、献综述二⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49附录1⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57附萄专2⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯66致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．68万方数据复旦大学硕士论文中文摘要趋化因子CCL28在缺氧诱导肝癌细胞迁移侵袭中的作用研究背景与目的：肝细胞肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，在我国居恶性肿瘤死亡率第二位。转移一直是影响肝癌预后的重要因素。肝癌细胞获得侵袭转移能力，与其

5、所在的肿瘤微环境是密切相关的。缺氧是实体肿瘤发展过程中的常见现象之一。研究认为缺氧微环境可以诱导肿瘤细胞发生上皮间质转化、生成新生血管和促进肿瘤侵袭和转移。趋化因子是一族分子量为8．14kDa大小的趋化作用的细胞因子，通过与其相应受体结合，发挥调节白细胞趋化到炎症部位的作用。近来不断有研究证实趋化因子及其受体在肿瘤的生长，侵袭，血管生成和转移中起到重要的作用。已有研究报道CCL2和CCR2与肿瘤转移有关，但是其他趋化因子在肿瘤发展中的作用仍知之甚少。本研究着重于探索CCL28在缺氧诱导的人肝癌转移过程中

6、作用。方法：应用实时定量PCR检测50例肝细胞癌组织中CCL28和HIF．1amRNA表达情况并分析两者表达的相关性，运用卡方检验，Kaplan．Meier分析HIF．1Qt及CCL28表达与年龄、性别、乙肝病毒标记物、肝硬化、分化、包膜、甲胎蛋白等临床病例特征及患者总体生存时间的关系；同时在体外细胞实验中，采用实时定量PCR，Westemblot与酶联免疫吸附实验(ELISA)检测缺氧对肝癌细胞株HepG2、HCCLM3HIF．1a和CCL28表达的影响；运用RNA干扰(siRNA)和Lipofect

7、amine2000细胞转染技术下调HIF．10t基因表达对肝细胞癌HCCLM3细胞CCL28蛋白表达的影响。通过抑制CCL28表达，结合Transwell和BDMatrigel观察CCL28在缺氧诱导的肝癌细胞侵袭迁移中的作用；采用明胶酶谱法测定CCL28．siRNA干扰后细胞上清的金属蛋白酶含量的差异。结果：1)实时定量PCR结果发现癌组织中HIF—lotmRNA含量0．0654士O．0988，29／50(58％)例呈高表达。CCL28mRNA水平在肝癌组织为O．0254士O．0755，23／50(4

8、6％)例呈高表达。Spearman双变量相关性分析显示肝细胞癌组织中CCL28与HIF．1amRNA水平呈高度相关(F0．595，p<0．001)；二者表达水平增高皆与术后复发相关。2)体外细胞实验显示肝癌HepG2和HCCLM3细胞HIF．10【和CCL28mRNA水平在缺氧(1％02)培养6h后开始增加，二者的蛋白表达水平在缺氧培养12h后开始增高，并呈现出时间依赖性。利用HIF．10t特异性siRNA阻断HIF．1Cc的表达后，CCL