rantes、mip1α趋化因子促人肝癌细胞侵袭运动的机制研究

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1、RANTES、MIP1α趋化因子促人肝癌细胞侵袭运动的机制研究：王晓颖樊嘉周俭邱双健吴晓峰刘银坤汤钊猷【摘要】目的探讨RANTES、MIP1α趋化因子促人肝癌细胞侵袭运动的机制。方法使用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察RANTES、MIP1α刺激后人肝癌细胞聚合型肌动蛋白(Factin)聚合的变化。采用明胶酶谱法分析RANTES、MIP1α对人肝癌细胞基质金属蛋白酶分泌及活性的影响。结果RANTES、MIP1α可诱导人肝癌细胞内Factin的聚合，并刺激细胞突起和伪足形成。明胶酶谱显示RANTES、MI

2、P1α刺激后人肝癌细胞基质金属蛋白酶MMP2、MMP9等活性显著增加，降解基质能力增强。结论RANTES、MIP1α趋化因子可以诱导Factin聚合促进人肝癌细胞定向运动，并通过增加基质金属蛋白酶活性提高人肝癌细胞侵袭能力。【关键词】肝肿瘤；趋化因子；细胞运动；肿瘤浸润MechanismofRANTESandMIP1αpromotinginvasionandmigrationofhepatomacarcinomacells【Abstract】ObjectiveToinvestigatemechanismo

3、fchemokinesincludingRANTESandMIP1αpromotinginvasionandmigrationofhepatomacarcinomacells(HCC).MethodsThepolymerizationofHCCFactinstimulatedbyRANTESandMIP1αetryandconfocalmicroscope.GelatinzymographyassayatrixmetalloproteinaseofHCC.ResultsBothRANTESandMIP1αco

4、uldprominentlypromotepolymerizationofFactinandformationofcellprocessandpseudopodiaofHCC.GelatinzymographyassaysshoulationotemigrationofHCCbyinducingpolymerizationofFactinandincreaseinvasivepotentialofHCCbyenhancingactivityofMMPs.【Keyacarcinoma;Chemokines;Cell

5、migration;Tumorinvasion趋化因子(chemokines)是一类分泌型小分子蛋白质。近来发现其与肿瘤侵袭转移密切相关［1-2］。我们前期研究发现肝癌细胞表达CCR1趋化因子受体，其配体RANTES、MIP1α等趋化因子可以促进肝癌细胞侵袭运动［3］。为进一步阐明RANTES、MIP1α等趋化因子促进肝癌细胞侵袭运动的机制，本研究深入观察RANTES、MIP1α刺激后人肝癌细胞聚合型肌动蛋白(Factin)及基质金属蛋白酶变化情况。1材料与方法1.1细胞培养高转移人肝癌细胞株MHCC97H由

6、本所建立。采用DMEM培养液，37℃、5%CO2饱和湿度的条件下培养。1.2悬浮细胞肌动蛋白聚合试验将处于对数生长期的MHCC97H人肝癌细胞常规消化脱壁，重悬于PBS，浓度为1×106个细胞/ml。取上述细胞悬液分别加入含100ng/ml的RANTES或MIP1α(RD公司)无血清DMEM培养液，不加趋化因子为空白对照。分别于趋化因子刺激后15、30、60、120、300和600s时，加入固定染色液［含0.1mg/mlLPC，磷酸缓冲液配制的10%福尔马林，1.65×10-6mol/L的FITCPhalloid

7、in(MolecularProbes公司)］并染色10min。染色后的细胞1500r/min离心5min，用1mlPBS液重悬细胞，上流式细胞仪分析。每次分析1×105个细胞。最大激发波长为560nm，吸收波长为540nm。以空白对照组的荧光总量为100%计算趋化因子刺激各时间点荧光总量的相对比值。1.3贴壁细胞的肌动蛋白聚合试验将处于对数生长期的MHCC97H人肝癌细胞常规消化脱壁，用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液重悬细胞，制备浓度为1×104个细胞/ml。将上述细胞悬液加入预置细胞培养载玻片的6孔培养板的各

8、室中，培养24h至肿瘤细胞完全贴壁，PBS液洗涤。每室加入含100ng/mlRANTES或MIP1α的无血清高糖DMEM培养液2ml，不加趋化因子为对照，孵育2h。吸弃培养液，用PBS液洗涤。加入3.7%中性甲醛固定10min，PBS液洗涤。丙酮脱水1min。每孔加入1mlPBS液配制的0.2%TritonX100，室温处理10min透化细