趋化因子ccl24ccr3在人早孕期母-胎界面的表达及调节功能

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1、万方数据复旦大学附属妇产科医院硕士研究生毕业论文趋化因子CCL24／CCR3在人早孕期母一胎界面的表达及调节功能TheExpressionandFunctionalRegulationofChemokineCCL24／CCR3attheMaternal．fetalInterfaceofHumanFirst．Trimester研究生姓名学科及专业导师导师组成员李辉妇产科学生殖免疫学李大金教授李明清助理研究员二零一三年五月万方数据目录1洲《Ⅷ1删川圳咖帅㈣lY2702408第一部分CCL24对人早孕期滋养细胞自

2、分泌调节作用材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20第二部分滋养细胞来源的CCL24对蜕膜基质细胞旁分泌调节作用材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28第三部分CCL24对人早孕期蜕膜

3、Y6T细胞功能调节作用材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49附录附录l英文缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50附录

4、2硕士期间发表的论文和论著⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53O1Eu1●要要～摘摘～文文言中英前万方数据至龌亟±堂焦i金塞生童擅蔓趋化因子CCL24／CCR3在人早孕期母．胎界面的表达及功能调节中文摘要趋化因子是一组有趋化功能的可溶性细胞因子，通常由70．90个氨基酸组成。通过与细胞膜上相应的G蛋白耦联受体结合，趋化因子在淋巴细胞的募集和活化等免疫反应过程中发挥着重要作用。到目前为止，在人体已经发现了大约50种趋化因子以及相应的约18种趋

5、化因子受体。依据其结构中半胱氨酸残基位点的不同，趋化因子被分为CXCL、CCL、C和CX3C四大亚家族。趋化因子CCL24属于嗜酸性粒细胞选择性趋化和激活因子eotaxins类分子，也被称为eotaxin2或MPIF．2(myeloidprogenitorinhibitoryfactor2)。CCL24与唯～受体CCR3结合后，在人体广泛参与过敏性疾病、寄生虫感染、系统性疾病等多种免疫相关疾病的发病过程。既往研究表明，人早孕期母胎界面存在eotaxins家族的eotaxin1／CCL11分子，并且高表达eo

6、taxins类分子的共同受体CCR3。因此，我们推测：人早孕期母胎界面表达有趋化因子CCL24，CCL24与受体CCR3结合可能参与子宫内膜蜕膜化、胚胎种植以及母胎免疫耐过程的形成，并发挥一定的调节作用。本课题围绕母胎界面局部CCL24和CCR3的表达和功能调节进行试验设计，以探讨趋化因子CCL24和受体CCR3在母胎界面的表达特征及生物学意义。第一部分CCL24对人早孕期滋养细胞自分泌调节作用目的测定CCL24及其受体CCR3在人早孕期绒毛滋养细胞(Tros，trophoblasts)上的分子表达水平，并

7、探讨CCL24／CCR3对滋养细胞的自分泌调节作用。方法分离、培养并鉴定人早孕期母胎界面Tros。免疫组织化学(IHC，Immunohistochemistry)、酶联免疫吸附试验(ELISA，Enzyme—linkedimmunosorbentassay)及流式细胞术(FCM，flowcytometry)测定滋养细胞分泌或表达CCL24／CCR3的水平。将蜕膜基质细胞(DSCs，decidualstromalcells)与Tros细胞共培养48h，检测Tros分泌CCL24以及表达CCR3水平的变化。在体

8、外，rhCCL24处理Tros48h后，BrdU增殖实验检测Tros细胞增殖情况，MTT比色法检测Tros细胞活力，侵袭实验了解Tros细胞侵袭力的变化。结果本实验室建立的滋养细胞原代培养方法，可得至fJCK7+Tros细胞纯度达85％。IHC结果显示，绒毛组织表达中等水平的CCL24，并高表达CCR3受体。ELISA检测Tros细胞体外培养24．96h不同时段的上清，我们发现Tros细胞上清中万方数据奎龌亟±堂