母-胎界面ranklrank信息传递对脱膜巨噬细胞表型及功能的调节作用

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1、万方数据复旦大学附属妇产科医院博士研究生毕业论文母．胎界面RANKL／RANK信息传递对蜕膜巨噬细胞表型及功能的调节作用RegulationofRANKL／RANKinteractiononthefunctionalphenotypeofdecidualmacrophageinearlypregnancy研究生姓名孟玉菡学科及专业妇产科学导师导师组成员生殖免疫学李大金朱晓勇李明清二零一三年五月教授副教授助理研究员万方数据目录中文摘要英文摘要前言第一部分RANKL参与调控蜕膜基质细胞及滋养细胞的生物学行为第二部

2、分RANKL参与调节蜕膜巨噬细胞的功能及表型第三部分RANKL调控蜕膜巨噬细胞表型偏移的分予机制第四部分母胎界面RANKL表达下降导致巨噬细胞M1型偏移及自然流产结论参考文献致谢附录附录1英文缩略语附录2博士期间发表和待发表的论文综述●59¨巧卯∞记弭踞弭趼蹭万方数据孟玉菡博士论文中文摘要母一胎界面RANKL／RANK信息传递对蜕膜巨噬细胞表型及功能的调节作用博士研究生孟玉菡导师李大金教授导师组成员朱晓勇副教授李明清助理研究员中文摘要正常妊娠类似于同种异体移植，携有父系抗原的胚胎在母体内存活直至分娩，实际上是

3、母体对胎儿的免疫耐受；若母体对胎儿发生免疫排斥，则导致妊娠失败，提示母一胎免疫耐受机制在正常妊娠过程中发挥重要作用。阐明这种免疫耐受机制，不仅对生殖免疫，而且对肿瘤免疫及自身免疫病研究均有积极意义。母一胎界面主要包括蜕膜基质细胞、滋养细胞及蜕膜免疫活性细胞，其中蜕膜基质细胞及蜕膜免疫细胞来源于母体，而滋养细胞则来源于胎儿，它们之间相互作用，共同参与维持母．胎界面Th2型免疫偏移。其中蜕膜巨噬细胞占蜕膜免疫活性细胞的10％，可参与胚胎植入、胎盘发育及宫颈成熟等生理过程，以维持成功妊娠。核因子NF．KB受体活化因

4、子的配体RANKL(又称为TNFSFll，OPGL，TRANCE或ODF)，属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员，与受体RANK及诱饵受体骨保护索OPG进行相互调控，参与破骨细胞的分化及骨重塑过程。RANKL／RANK在免疫系统亦发挥作用，RANKL及RANK基因突变的小鼠表现为淋巴结缺如，RANKL可促进树突状细胞(DC)的存活，诱导T细胞增殖等作用。母一胎界面存在多种免疫活性细胞，但迄今仍不清楚RANKL在母一胎界面是否发挥作用。第一部分RANKL参与调控蜕膜基质细胞及滋养细胞的生物学行为目的分析RNAK

5、L在人早孕期蜕膜基质细胞及滋养细胞的表达及其调节作用。方法收集人早孕期正常的绒毛与蜕膜组织，应用胰酶消化、密度梯度离心法分离、培养正常人早孕期滋养细胞和蜕膜基质细胞(DSCs)。采用RT-PCR、免疫组织化学、流式细胞术，分别检测RANKL在母胎界面的表达。不同浓度的RANKL作用48h后，利用BrdU细胞增殖试剂盒检测蜕膜基质细胞及滋养细胞万方数据孟玉菡博士论文中文摘要的增殖能力；采用A1mexinV-FITC／PI检测蜕膜基质细胞的凋亡；及利用Transwell检测滋养细胞的侵袭能力。结果RlT．PCR、

6、免疫组化及流式细胞术研究发现，人早孕期蜕膜基质细胞共表达RANKL及其受体RANK；R1'_PCR、免疫组化及流式细胞术分析发现，滋养细胞也共表达RANK[。及其受体RANK。RANKL以浓度依赖的方式促进蜕膜基质细胞及滋养细胞的增殖；RANKL(100ng／m1)明显抑制蜕膜基质细胞的凋亡；RANKL(100ng／m1)显著促进滋养细胞侵袭。结论RANKL以自分泌方式促进蜕膜基质细胞的增殖，抑制其凋亡；RANKL以自分泌方式促进滋养细胞增殖与侵袭。第二部分RANKL参与调节蜕膜巨噬细胞的功能及表型目的解析母

7、胎界面的RANKL对蜕膜巨噬细胞功能及表型的调节作用。方法利用流式细胞术分析各种蜕膜免疫活性细胞RANK表达水平；比较外周单核细胞与蜕膜巨噬细胞RANK表达水平；根据RANK在巨噬细胞表达与否，区分为RANK+dM(p与RANK．dM9两个细胞亚群，进而分析两个细胞亚群的表型差异；免疫磁珠分选蜕膜巨噬细胞，得到较高纯度的巨噬细胞。将蜕膜基质细胞、滋养细胞及蜕膜巨噬细胞共培养，并在其共培养体系加入rhOPG及anti．RANKL中和性抗体作用48h后，流式细胞术分析蜕膜巨噬细胞表面协同刺激分子CD80、CD86

8、的表达；ELISA检测蜕膜巨噬细胞分泌IL。10、IL一12及IL一23的水平。经过蜕膜基质细胞及滋养细胞的RANKL训导蜕膜巨噬细胞与同种蜕膜naiveT细胞共培养5d后，Bioplex检测IL．4、IL．10、TNF．c【及IFN．1，的分泌水平。结果流式细胞术分析发现，蜕膜巨噬细胞表面表达较高水平的RANK，并且RANK在蜕膜局巨噬细胞的表达水平明显高于外周单核细胞。与RANK。dMqo比较，