小鼠骨髓间质干细胞对巨噬细胞表型和功能的影响及机制

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1、分类号墅窆2：12UDC鱼12密级一坌珏一编号!Q2窆窆圣!Ql垒QQ垒一@江蒜大擎硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION密级公五编号lQ2坌2圣!Ql垒QQ垒硕士学位论文小鼠骨髓间质干细胞对巨噬细胞表型和功能的影响及机制THEEFFECTSANDMECHANISMSoFMoUSEBoNEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLSONTHEPoLARIZATIoNPHENoTYPEANDFUNCTIoNoFMACRoPHAGE作者姓名：高硕指导教师：许文荣教授小组成员：钱晖教授朱伟研究员申请学

2、位：硕士学科专业：临床检验诊断学论文提交日期：2013年4月28日论文答辩日期：2013年6月10日学位授予单位：江苏大学学位授予日期：2013年6月17日答辩委员会主席：张竹繁教授基金资助：国家自然科学基金重大研究计划(91129718)；国家自然科学基金(81000181)；江苏省高校自然科学基金资助项目(10KJB310002)；江苏大学高级人才启动基金(10JDG094)独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其

3、他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机／构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：高石乙2,o吗年6只{《日学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科

4、学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生院办理。本学位论文属于不保密学位论文作者签名：高石让江苏大学硕士学位论文摘要目的：间质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)在组织再生、炎症反应及损伤修复中发挥重要作用。有研究表明MSCs对巨噬细胞的调节作用在这些过程中十分关键，然而这种作用的机制仍不十分明确。本研究旨在探讨小鼠骨髓M

5、SCs在正常或脂多糖(LPS)刺激条件下对巨噬细胞的极化表型和功能的影响，并对相关机制进行了初步研究，为进一步探索MSCs的免疫调节和促损伤修复机制提供依据。方法：分离培养小鼠骨髓MSCs，体外与小鼠巨噬细胞株RAW264．7或磁珠分选的小鼠脾脏CDllb阳性单核／巨噬细胞间接共培养，LPS作为刺激因素，qRT．PCR及ELISA方法检测巨噬细胞M1／M2相关因子表达水平(TNF．仅、IL．6、IL．10、Arg．1)；流式细胞术及免疫荧光技术检测RAW264．7细胞M2标记CD206的表达情况；细胞计数和MTT实验

6、研究MSC条件培养基(MSC．CM)对RAW264．7细胞增殖能力的影响；Tranwell迁移实验研究MSCs对RAW264．7细胞迁移功能的影响。此外，采用Westernblot方法研究MSC．CM对RAW264．7细胞M1／M2相关信号通路NF．r．B和STAT3的影响。结果：MSCs间接接触或上清作用于RAW264．7细胞，降低了M1型细胞因子TNF．a基因水平而升高了M2型相关基因IL-10、Arg．1表达水平。ELISA结果显示MSC．CM能使RAW264．7细胞IL．6分泌水平降低，而使IL．10分泌水平

7、增高。MSCs培养上清在LPS存在的条件下能降低脾脏单核／巨噬细胞TNF．a表达水平，增高Arg一1表达水平。流式细胞术及免疫荧光结果显示MSC．CM增加了RAW264．7细胞M2型标记CD206表达。同时，细胞计数结果表明MSC．CM作用组与对照组相比能增加RAW264．7细胞数量，MTT实验也证实了这小鼠骨髓闻质干细胞对臣噬细胞表型和功能的影响及机制一结果。在有或无LPS刺激的条件下，MSCs能显著增加RAW264．7细胞的迁移数量。Westernblot结果显示，MSC．CM抑制LPS诱导的NF。r．B活化，降

8、低NF．r,Bp65入核及磷酸化p65表达量，抑制下游炎性基因IL。lp和TNF．Q的表达水平。另一方面MSC．CM增加了JAKl和STAT3磷酸化蛋白表达水平。此外，STAT3信号抑制剂$3I．201，抑制了MSC．CM对巨噬细胞IL—lO和Arg-1基因表达的增强作用。结论：小鼠骨髓MSCs能通过问接接触或培养上清作用促进巨噬细胞由M1型向